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[发明专利]犬附红细胞体唾液酸糖蛋白内肽酶osgep基因的原核表达、纯化方法和应用-CN202010289612.2在审
发明人：宋淇淇;姜阜杉;杨琳燕;秦顺义;赵瑞利 -专利权人：天津农学院
申请日： 2020-04-14 - 公布日： 2020-08-07 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明涉及一种犬附红细胞体唾液酸糖蛋白内肽酶osgep基因的原核表达、纯化方法，步骤如下：⑴设计扩增osgep基因的特异性引物；⑵PCR扩增获得osgep基因片段并纯化；⑶将osgep基因片段中三联密码子为TGA处点突变为TGG；⑷将突变后的osgep基因连接至原核表达载体，构建重组表达质粒；⑸重组表达载体的原核表达以及表达形式的检测；⑹纯化osgep重组蛋白。本发明方法将犬附红细胞体的唾液酸糖蛋白内肽酶osgep基因进行原核表达并纯化得到纯度高的osgep蛋白，此蛋白可用于制备多抗血清、单克隆抗体，也可作为抗原包被酶标板，从而为犬附红细胞体血清学检测方法的建立奠定基础
犬附红细胞体唾液酸糖蛋白肽酶 osgep 基因表达纯化方法应用

[发明专利]人血清白蛋白在毕赤酵母中的表达与纯化-CN98110844.X有效
发明人：袁中一;邱荣德;吴祥甫;李士云;夏其昌;储瑞蔼 -专利权人：中国科学院上海生物化学研究所;上海第一生化药业公司
申请日： 1998-05-15 - 公布日： 2003-08-27 - 主分类号： C07K14/765 文献下载
摘要：本发明涉及一种人血清白蛋白在毕赤氏酵母(Pichiapastors)中的表达与纯化方法。本发明的方法特征在于重组表达质粒pPKQ-HSA的构建和表达HSA的高效分离纯化。
血清白蛋白酵母中的表达纯化

[发明专利]一种制备N-乙酰氨基半乳糖转移酶的方法-CN201911267015.3有效
发明人：张延;梁涛;许之珏;贾文娟 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2019-12-11 - 公布日： 2022-09-23 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种用于表达N‑乙酰氨基半乳糖转移酶的原核表达系统。本发明提供一种用于表达N‑乙酰氨基半乳糖转移酶的原核表达载体，所述表达载体中包括ppGalNAc‑T蛋白表达框和PDI蛋白表达框。本发明所提供的用于表达N‑乙酰氨基半乳糖转移酶的原核表达载体和原核表达系统使用共表达单一质粒及具有胞内氧化环境的宿主细胞、并通过常规的通用培养基进行表达，表达系统和操作方法均简单，一步表达、纯化，不需要重折叠等后续操作，且获得ppGalNAc‑T2酶的产量优于人源HEK 293T细胞系表达纯化的ppGalNAc‑T2酶。
一种制备乙酰氨基半乳糖转移酶方法

[发明专利]重组NcoI限制性内切酶的制备方法-CN202110021361.4在审
发明人：于博文;李建辉;单永超 -专利权人：上海咏科生物科技有限公司
申请日： 2021-01-08 - 公布日： 2021-04-16 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组NcoI限制性内切酶的制备方法，包括以下步骤：一、合成NcoIM和NcoI的编码基因，分别构建至相应载体中，获得带有NcoIM基因的重组载体和融合了纯化标签的NcoI蛋白表达质粒；二、将带有NcoIM基因的重组载体转入大肠杆菌中，获得具备基底NcoIM表达的重组菌；三、制作成具备基底NcoIM表达的重组菌感受态细胞；四、将融合了纯化标签的NcoI蛋白表达质粒转入具备基底NcoIM表达的重组菌感受态细胞中，获得阳性单克隆，培养进行NcoI限制性内切酶的表达；五、NcoI限制性内切酶的纯化。
重组 ncoi 限制性内切酶制备方法

[发明专利]罗非鱼抗菌肽hepcidin的基因工程制备方法-CN201110277573.5无效
发明人：陶妍;文雅;沈彦萍 -专利权人：上海沈李科工贸有限公司
申请日： 2011-09-19 - 公布日： 2012-02-01 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供一种制备罗非鱼抗菌肽hepcidin的方法，包括：构建融合表达载体pET32a-THM；将该融合表达载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)，构建表达工程菌；发酵培养表达工程菌，并进行IPTG诱导表达；发酵产物经亲和层析得到纯化的抗菌肽融合蛋白；及抗菌肽融合蛋白经肠激酶处理和分子筛层析纯化，得到罗非鱼hepcidin成熟肽“THM”产品。本发明在原核宿主细胞中高效表达了重组抗菌肽hepcidin，分离纯化方便、易操作，适合大规模扩大生产。产品经抗菌活性测定，对革兰氏阳性和阴性细菌具有明显的抗菌效果，且热稳定性良好。
罗非鱼抗菌 hepcidin 基因工程制备方法

[发明专利]一种ELP类胶原蛋白的纯化方法及应用-CN202010843103.X在审
发明人：赵广义;李仁赛;张杰 -专利权人：点斗基因科技（南京）有限公司
申请日： 2020-08-20 - 公布日： 2021-04-16 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种类弹性蛋白(Elastin‑like polypeptides，ELPs)和类胶原蛋白(collagen like protein,CLP)的融合蛋白ELP‑CLP的纯化方法及应用，该蛋白含有人工合成的类弹性蛋白多肽本发明将类弹性蛋白标签ELP100与类胶原蛋白多肽基因连接到原核表达载体pRELPN上，构建成pRELPN‑CLP‑ELP100融合蛋白表达载体，该载体在BL21(DE3)大肠杆菌中高表达，使用包涵体纯化法对该融合蛋白进行纯化，包括如下步骤：菌种的收集与破碎，洗除杂蛋白、脂质和核酸，蛋白精纯化，是的纯化得率高、方法简单、成本低廉，适合于大规模生产。
一种 elp 胶原蛋白纯化方法应用

[发明专利]一种CK-MB重组蛋白的表达载体及其制备方法和应用-CN202210369951.0在审
发明人：谢灵志;李明振;吴佳;蔡宁 -专利权人：杭州百凌生物科技有限公司
申请日： 2022-04-08 - 公布日： 2022-11-18 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种CK‑MB重组蛋白、其表达载体及制备方法和应用，属于基因工程技术领域。所述表达载体上包括CK‑M序列和CK‑B序列，还包括第一标签序列和第二标签序列，所述第一标签序列位于所述CK‑M序列之前或者之后，所述第二标签序列位于所述CK‑B序列之前或者之后。本发明的CK‑MB的表达载体表达出来的重组蛋白包含两种标签，可以使用两种不同的纯化方法，纯化方法简单，并且纯化后的重组蛋白没有多余的蛋白片段，纯度高，并且使得两种蛋白同时于原核细胞中低温诱导表达，并于原核细胞胞内组装，以天然二聚体形式大量表达于胞内上清表达出来，重组蛋白活性高。
一种 ck mb 重组蛋白表达载体及其制备方法应用

[发明专利]Aβ42在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化方法-CN201710499265.4有效
发明人：刘夫锋;贾龙刚;路福平;王文娟;张会图;秦慧民;李玉 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2017-06-27 - 公布日： 2020-07-24 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于生物技术和基因工程技术领域，具体为Aβ42在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化方法。本发明构建的Aβ42表达体系提供了原核生物可溶性融合表达人淀粉样蛋白Aβ42的表达载体的构建方法，并将表达载体导入至大肠杆菌表达宿主中，经诱导表达、蛋白酶切、两步纯化及鉴定后获得具有高纯度生物活性的目标本方法所采用的大肠表达系统及融合蛋白，具有表达效率高、表达量大、成本低、易操作等特点，所表达的Aβ42多肽不含任何残基、纯度高、产率高等优点。
42 大肠杆菌中的高效可溶性表达纯化方法

[发明专利]Klenow酶及其表达纯化方法-CN201710592821.2有效
发明人：周俊;钟淑瑶;章瑞程;邓艳华 -专利权人：菲鹏生物股份有限公司;广东菲鹏生物有限公司
申请日： 2017-07-19 - 公布日： 2019-12-27 - 主分类号： C12N9/12 文献下载
摘要：本发明涉及一种Klenow酶及其表达纯化方法，通过对含有Klenow酶表达片段的重组工程菌进行诱导培养，并收集诱导培养后的菌体。然后将菌体裂解，得到含有目的蛋白(Klenow酶)的裂解液。在进行Ni离子亲和柱纯化之前，向裂解液中加入阳离子聚合物进行聚合沉降反应，然后向聚合沉降反应后收集的上清液中加入蛋白沉淀剂盐析沉降目的蛋白，从而得到粗产物。粗产物中核酸残留少、杂质少，对Ni离子亲和柱纯化过程的影响较小。这种表达纯化的方法操作简便、快速、成本低，适应于大批量的生产，表达纯化获得的Klenow酶纯度高，满足二代测序对于Klenow酶的纯度要求。
klenow 及其表达纯化方法

[发明专利]SARS主蛋白酶的表达和纯化方法-CN202010901715.X在审
发明人：李健;熊兵 -专利权人：深圳晶蛋生物医药科技有限公司
申请日： 2020-08-31 - 公布日： 2020-11-24 - 主分类号： C12N9/50 文献下载
摘要：本发明公开了SARS主蛋白酶的表达和纯化方法，步骤有：构建并转化表达质粒；取菌液到含有50μg/ml Kan+抗生素的LB液体培养基中，在摇床上培养过夜；加入IPTG，诱导培养；菌液离心，在重悬缓冲液中重悬；破碎离心，取上清镍柱纯化，不同咪唑浓度的洗脱液进行洗脱，将含有SARS主蛋白酶的洗脱液，进行透析得到目的蛋白。本发明的优点有：利用大肠杆菌蛋白表达系统可在短时间内获得大量SARS主蛋白酶，通过特殊的纯化方法可获得纯度高、稳定性好的SARS主蛋白酶。整个SARS主蛋白酶蛋白表达和纯化过程耗费成本低、操作简单、可重复性高，可投入大量生产过程。
sars 蛋白酶表达纯化方法

[发明专利]重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的高效稳定表达和纯化及其应用-CN200810070591.4无效
发明人：黄明东;朱丽丽;王婉瑜 -专利权人：中国科学院福建物质结构研究所
申请日： 2008-02-02 - 公布日： 2009-08-05 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明提供了重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的高效稳定表达和纯化的技术方法。重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin在酵母细胞中的大量表达及目的蛋白的纯化，纯化蛋白在SDS-PAGE电泳中呈现为一条带。该重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的获得方法具有直接表达、成本低，稳定性高，表达量高、分离纯化工艺简便、活性高等特点。本发明发现本重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin不仅具有接近于野生型蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的抑制血小板聚集的活性，而且首次验证了其能够抑制肿瘤细胞生长的活性，从而能够作为一种新型抗血栓和抗肿瘤新药
重组蛇毒金属蛋白酶 jerdonitin 高效稳定表达纯化及其应用

[发明专利]两种鱼类抗菌肽基因的串联表达产物及其表达方法-CN201010225669.2有效
发明人：王克坚;丁建;蔡晶晶 -专利权人：厦门大学
申请日： 2010-07-09 - 公布日： 2010-12-08 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：两种鱼类抗菌肽基因的串联表达产物及其表达方法，涉及一种海洋生物的基因工程技术。提供两种鱼类抗菌肽基因的串联表达产物以及两种鱼类Hepcidin串联表达载体的构建和串联表达产物的制备方法。通过pET32a原核表达载体串联表达两种鱼类hepcidin基因，实现两种抗菌肽hepcidin同时可溶性表达，两种串联抗菌肽表达量超过50mg/L，可溶性串联表达产物通过N末端His-Tag亲和层析纯化后，再以肠激酶切除串联蛋白标签，切后混合物再经Ni亲和层析柱，获得纯化的Hepcidin串联表达产物。纯化表达产物对金色葡萄球菌、嗜水单胞气菌，溶壁微球菌等均有显著的抑制作用。
鱼类抗菌基因串联表达产物及其方法

[发明专利]一种抗VEGF抗体片段的纯化制备方法-CN201210185573.7有效
发明人：刘宁;宋磊;赵文明 -专利权人：山东泉港药业有限公司
申请日： 2012-06-07 - 公布日： 2012-10-31 - 主分类号： C07K16/22 文献下载
摘要：本发明涉及在大肠杆菌周质表达重组VEGF抗体片段的纯化制备方法。关键技术是大肠杆菌周质表达VEGF抗体片段的纯化制备工艺和方法。纯化该重组抗体时，周质提取过程中加入可溶性增强试剂，利于抗体重链和轻链的正确折叠，对抗体片段纯化前进行热处理，使部分宿主菌蛋白失活、沉淀，而抗体分子更加稳定。在纯化过程中，仅使用阳离子交换—疏水层析两步法纯化获得纯度大于95%的抗体蛋白，是一种操作简单方便，低成本，高产出，适合产业化的抗体片段纯化制备方法。
一种 vegf 抗体片段纯化制备方法

[发明专利]一种表达和纯化Her2全长蛋白的方法以及Her2全长蛋白的应用-CN201810814041.2在审
发明人：王海瑶;张永顶;马伟民 -专利权人：深圳市伯劳特生物制品有限公司
申请日： 2018-07-23 - 公布日： 2019-05-10 - 主分类号： C07K14/82 文献下载
摘要：本发明涉及酶联免疫技术领域，公开了一种表达和纯化Her2全长蛋白的方法以及Her2全长蛋白的应用。本发明以果蝇卵细胞作为表达Her2全长蛋白的宿主细胞，联合适宜的昆虫细胞表达载体、筛选方法、细胞传代扩增方法以及蛋白纯化方法组成系统的Her2全长蛋白表达纯化方法，获得了毫克级以上的目标蛋白，并具备较佳的抗原性和与抗Her2单抗结合的特异性，可通过夹心ELISA法有效识别血清中Her2的含量，对乳腺癌的诊断分型和预后有重要指导作用。
全长蛋白表达和纯化昆虫细胞表达载体酶联免疫技术重要指导作用夹心ELISA法蛋白纯化目标蛋白宿主细胞细胞传代有效识别诊断分型抗原性血清预后乳腺癌单抗果蝇扩增应用筛选联合

[发明专利]生物活性肽在原核细胞中的高效率重组表达和纯化方法-CN201410410942.7在审
发明人：郑学明;黄新祥 -专利权人：江苏大学
申请日： 2014-08-20 - 公布日： 2014-12-10 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了生物活性肽在原核细胞中的高效率重组表达和纯化方法，包括构建重组表达载体pHGB1-TEV、生长因子重组表达质粒pHGB1-TEV-hEGF、pHGB1-TEV-mEGF和pHGB1-TEV-LL-37并在大肠杆菌JM109菌株中高效表达和纯化抗菌肽LL-37及人和鼠表皮生长因子的技术。通过这一体统表达的重组蛋白N端带有序列His6-GB1-TEV，六个组氨酸标签便于重组蛋白通过Ni-NTA柱得到纯化，TEV酶切序列使得融合标签能被在TEV酶高效切除，从而得到目的生物活性肽。生物活性肽具有多种功能，具有巨大的市场需求，利用该技术重组表达和纯化生物活性肽具有产量高，活性高，工艺简单，生成成本低廉等优点，具有很高的工业开发价值。
生物活性原核细胞中的高效率重组表达纯化方法