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[发明专利]云南红梨ΔPyTTG1基因及其原核表达载体和应用-CN201210064994.4无效
发明人：李昆志;张晓东;樊磊;崔道磊;陈丽梅;舒群;苏俊 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2012-01-13 - 公布日： 2012-07-18 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明公开了一种云南红梨色素合成和毛状体发育调控蛋白PyTTG1基因ΔPyTTG1及其原核表达载体，本发明利用RT-PCR从云南红梨中克隆PyTTG1基因特异性片段ΔPyTTG1，并构建其原核表达载体，然后在大肠杆菌中进行表达，获得云南红梨ΔPyTTG1纯化蛋白，云南红梨ΔPyTTG1纯化蛋白应用在制备PyTTG1特异性抗体中、在PyTTG1蛋白表达检测中及免疫沉淀和染色质免疫共沉淀中；本发明中所制备的抗体特异性强，能够准确的检测PyTTG1蛋白的亚细胞定位、高效的进行PyTTG1蛋白的纯化、高效分离PyTTG1蛋白所结合的蛋白和DNA片段及检测其在转基因植物中的表达情况。
云南 pyttg1 基因及其表达载体应用

[发明专利]一种基因工程新药－血小板因子4的制备方法-CN02120894.8无效
发明人：牛勃;张俊芳;杨琦;常冰梅;杨涛;解军;张悦红;阎占清;郭勇;李乐意 -专利权人：牛勃
申请日： 2002-08-13 - 公布日： 2002-12-25 - 主分类号： C07K14/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种基因工程新药人血小板因子4的制备方法,它是采用基因工程技术得到高表达的产物,具体步骤包括设计合成一对特异引物,以PT7－7rhPF4表达质粒为模板,应用PCR反应对其cDNA进行改造,通过重组技术构建hPF4原核表达质粒,用温控诱导方法表达目的蛋白,裂解表达菌株,收集纯化包涵体,最后分离纯化及复性测活,该方法可明显提高所说产物的表达量。
一种基因工程新药血小板因子制备方法

[发明专利]骨形态发生蛋白BMP-4的表达及纯化工艺-CN202310205513.5在审
发明人：易红飞;胡慧芳 -专利权人：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
申请日： 2023-03-06 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C07K14/51 文献下载
摘要：本发明提供了骨形态发生蛋白BMP‑4的表达及纯化工艺，其步骤包括：构建并培养骨形态发生蛋白BMP‑4的基因工程菌，进行表达；去上清，收集菌体，破碎菌体，离心收集沉淀；用洗涤溶液洗涤收集的沉淀；用变性溶液溶解洗涤后的包涵体，过滤，除去沉淀，收集滤液；在滤液中加入稀释溶液进行包涵体的复性，将复性液透析至透析溶液中；Ni柱亲和纯化。本发明采用原核表达系统对BMP‑4进行表达，并且优化了BMP‑4蛋白的纯化工艺，使BMP‑4的聚集体在体外溶解并重新折叠成天然结构，解决了BMP‑4真核表达体系表达量低、周期长及培养成本高的问题，并且为
形态发生蛋白 bmp 表达纯化工艺

[发明专利]一种便于选择性捕获功能外泌体及其纯化方法和应用-CN202210702775.8在审
发明人：杨国栋;梅瑞妍;万卓;刘利;韦梦影;刘云楠 -专利权人：中国人民解放军空军军医大学
申请日： 2022-06-21 - 公布日： 2022-09-20 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种便于选择性捕获功能外泌体及其纯化方法和应用，涉及外泌体纯化技术领域。本发明构建了具备切割特性的融合蛋白及对应表达载体，并采用该载体修饰外泌体供体细胞，外泌体供体细胞同时过表达携带MS2的治疗性mRNA。本发明过构建可切割的融合蛋白表达载体，使外泌体加载核酸药物和表面呈现特定表位在同一个外泌体实现，进而便于外泌体mRNA药物装载和后续选择性富集。本发明纯化成本相对较低并且便捷。
一种便于选择性捕获功能外泌体及其纯化方法应用

[发明专利]一种治疗抑郁症的药物靶点表达和纯化方法-CN201910394481.1在审
发明人：张进 -专利权人：江西晶美瑞生物医药有限公司
申请日： 2019-05-13 - 公布日： 2019-08-02 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种治疗抑郁症的药物靶点表达和纯化方法。本发明提供了一种针对抑郁症的药物靶点表达和纯化方法，包括如下步骤：将小鼠TRPC4基因片段克隆到pAntigen Mem载体，筛选阳性克隆；提取质粒，转化感受态DH10菌株，挑选阳性克隆；抽提杆粒，在杆状病毒表达系统中产生P3杆状病毒；将P3杆状病毒转导入HEK293S GnTI^‑细胞，诱导表达，收集纯化药物靶点。之后，根据针对抑郁症的TRPC4药物靶点，有利于相应的特异性小分子抑制剂和相关抗体的设计，以用于抑郁症等相关疾病的治疗。
药物靶点抑郁症表达和纯化杆状病毒阳性克隆治疗杆状病毒表达系统生物技术领域小分子抑制剂片段克隆诱导表达抽提杆感受态菌株抗体小鼠质粒筛选细胞疾病转化

[发明专利]一种人活性颗粒酶K重组蛋白的制备方法-CN201310090856.8无效
发明人：江文正;龙凤英;杜佳妮;陈冉;孔晓波;史亚茹 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2013-03-21 - 公布日： 2013-07-17 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明涉及一种人活性颗粒酶K重组蛋白（rhGzmK）的制备方法，该重组蛋白去除了人颗粒酶K（hGzmK）N端的24个氨基酸，并在C端增加了6个组氨酸，以方便用镍离子柱进行纯化。其流程是：抽提人NK92细胞的总RNA，利用RT-PCR技术得到hGzmK基因，将之与原核表达载体pET24a(+)相连，构建重组表达质粒pET24a(+)-hGzmK，经转化大肠杆菌BL21后获得工程菌，该工程菌经IPTG诱导可表达rhGzmK。该重组蛋白以包涵体的形式表达，可利用镍亲和层析柱进行纯化，其纯度可达95%以上。该方法具有操作简单、产量高、重组蛋白易于纯化等特点，且纯化蛋白具有较高的生物学活性。
一种活性颗粒重组蛋白制备方法

[发明专利]细胞核质转移受体蛋白13多克隆抗体制备方法-CN200610005385.6无效
发明人：陶涛;彭梓 -专利权人：厦门大学
申请日： 2006-01-19 - 公布日： 2006-07-26 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：核质转移蛋白受体13蛋白的表达、纯化及其抗体制备方法，涉及一种蛋白表达、纯化及抗体制备，尤其是涉及一种核质转移蛋白受体13(imp 13)抗体的制备方法。步骤为：将全长importin 13基因插入到表达质粒pGEX－4T－2，然后转化到大肠杆菌中，在BL21中表达目的蛋白；经层析法纯化得到有生物活性的蛋白：用纯化后的蛋白做抗原去免疫兔子，得到了imp
细胞核质转移受体蛋白 13 克隆抗体制备方法

[发明专利]一种O型口蹄疫病毒VP1蛋白的可溶性表达方法-CN202210786836.3在审
发明人：陆意;李林;毛爱民;杨芝芬;李花;冯嘉林;周虹妤 -专利权人：无锡中德伯尔生物技术有限公司;无锡市水产畜牧技术推广中心
申请日： 2022-07-06 - 公布日： 2022-10-14 - 主分类号： C07K14/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种O型口蹄疫病毒VP1蛋白的可溶性表达方法，以GenBank公布的KM243095.1基因为参考序列，根据大肠杆菌密码子嗜性，优化目的基因序列，合成目的基因；将目的基因克隆入pET32a(+)原核表达载体，转入大肠杆菌构建pET32a‑VP1重组质粒，随后进行pET32a‑VP1重组蛋白的诱导表达，并最终利用镍柱进行纯化。本发明根据大肠杆菌密码子嗜性对O型FMDV的基因序列进行部分优化，充分利用T7启动子、His纯化标签和Trx促溶标签的优点，结合密码子优化、在羧基端引入His标签和终止子、以及诱导表达条件的优化，实现了重组蛋白的可溶性表达，提高了纯化效率。
一种口蹄疫病毒 vp1 蛋白可溶性表达方法

[发明专利]一种高稳定性的重组SOD酶融合多肽及其表达纯化方法和应用-CN202211611278.3在审
发明人：李佳;张广献;黄嘉文 -专利权人：广州美神生物科技有限公司
申请日： 2022-12-14 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：一种高稳定性的重组SOD酶融合多肽及其表达纯化方法和应用，涉及基因工程技术领域；步骤包括：S1，在重组SOD酶融合多肽中接入几丁质结合域，并在所述几丁质结合域的C端加入HRV 3C蛋白酶，得到改性多肽，设计对应的cDNA序列；S2，将所述cDNA序列接入载体质粒中，得到重组质粒；S3，将所述重组质粒电转入感受态表达菌株中培养并诱导表达，通过几丁质树脂纯化，洗脱，得到高稳定性的重组SOD酶融合多肽。本发明的一种高稳定性的重组SOD酶融合多肽的表达纯化方法，采用耐热性强的SOD突变体和活性肽融合表达，以SOD突变体作为伴体使活性肽具有耐高温和延缓降解的性能，提高稳定性。
一种稳定性重组 sod 融合多肽及其表达纯化方法应用

[发明专利]鼠表皮生长因子在巴斯德毕赤酵母中的表达方法和纯化-CN201410000614.X无效
发明人：王喆明 -专利权人：杭州璞题生物科技有限公司
申请日： 2014-01-02 - 公布日： 2014-06-25 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种鼠表皮生长因子在巴斯德毕赤酵母中的表达方法和纯化，包括以下步骤：（1）构建重组质粒pBSAZ2.1；（2）电转化表达pBSAZ2.1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母；（3）阳性重组菌株的筛选；（4）诱导重组菌表达鼠表皮生长因子；（5）鼠表皮生长因子的纯化。本发明采用基因工程的方法，将mEGF基因连接至表达载体上，在巴斯德酵母细胞中完成分泌表达，从而构建出含mEGF目的基因的基因工程菌。能够指导蛋白质的正确折叠，提供复杂的糖基化等多种翻译后加工功能，因而表达产物在分子结构、理化性质和生物学功能方面最接近天然的生物蛋白质分子。可以避免蛋白在保内聚集形成包涵体，使目的蛋白的下游纯化更加简单，利于大规模处理。
表皮生长因子巴斯德毕赤酵母中的表达方法纯化

[发明专利]一种丙酮酸磷酸双激酶重组表达菌株的构建方法及其应用-CN201210014850.8无效
发明人：王周平;夏雨;弓紫丰 -专利权人：江南大学
申请日： 2012-01-18 - 公布日： 2012-09-05 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种丙酮酸磷酸双激酶重组表达菌株的构建方法，还涉及所构建菌株的具体应用，即对丙酮酸磷酸双激酶的表达、纯化方法，以及所得到丙酮酸磷酸双激酶在ATP-荧光素-荧光素酶发光反应体系中的应用。本发明克隆到来自于天蓝色链霉菌的丙酮酸磷酸双激酶编码基因ppdk，并将其构建为表达载体pET28a-ppdk，该载体转化到表达宿主BL21(DE3)后得到重组表达菌株BL21(DE3)/pET28a-ppdk，对该菌株进行培养和诱导，表达了丙酮酸磷酸双激酶，采用亲和层析方法纯化了丙酮酸磷酸双激酶。该纯化的酶在ATP-荧光素-荧光素酶发光反应体系中能有效催化反应产物单磷酸腺苷(AMP)和焦磷酸(PPi)生成三磷酸腺苷(ATP)，因而在ATP发光检测中具有重要用途。
一种丙酮酸磷酸激酶重组表达菌株构建方法及其应用

[发明专利]一种新型高效重组质粒载体及其应用-CN200910091236.X无效
发明人：聂李亚;马素永;许松山;汤晓闯;刘国强;赵娜娜 -专利权人：北京诺思兰德生物技术股份有限公司
申请日： 2009-08-17 - 公布日： 2011-03-30 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明是一种高效的原核表达载体。本发明的载体含有多聚组氨酸和GST两种标签，便于根据实际情况对表达产物的快速纯化，以及协助目的蛋白在工程菌胞内实现可溶性表达；本发明的载体同时还含有卡那抗性基因，使得在生物医药类目的蛋白的生产过程中，终产品引起人体过敏反应的可能性降到最低，并且使得纯化工艺难度与成本也大大下降。本发明对提高目的产物的纯化效率、降低成本具有重要的意义。
一种新型高效重组质粒载体及其应用

[发明专利]基因重组Tα1的表达和制备方法-CN201010560378.9无效
发明人：丁宇;岳妙姝;杨子义;干玉;李光伟 -专利权人：扬子江药业集团北京海燕药业有限公司
申请日： 2010-11-26 - 公布日： 2011-09-21 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明是关于基因重组Tα1的表达和制备新方法，各个步骤经过优化后，简捷高效，选用对环境和人员无害的原材料，便于操作和规模放大。优化后的方法流程如下：(1)用密码子优化后的碱基序列，构建大肠杆菌高效表达工程菌株；(2)工程菌的发酵表达采用IPTG诱导法诱导表达融合蛋白；(3)目的多肽的分离采用Ni金属螯合、蛋白酶切、Capto Q和S100纯化；(4)纯化获得的多肽经过理化、活性分析鉴定，与设计的一致。
基因重组表达制备方法

[发明专利]重组人白细胞介素－11的高表达方法-CN200710162973.5无效
发明人：黄阳滨;任军;朱飞云 -专利权人：上海新生源医药研究有限公司
申请日： 2007-09-28 - 公布日： 2008-04-23 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组人白细胞介素－11的核苷酸序列，高效生产重组人白细胞介素－11的生产方法，以及有关的工程细胞构建、表达和纯化的工艺。优化后的重组人白细胞介素－11基因，非常适合在大肠杆菌中表达，同时通过发酵与纯化工艺优化，提高了表达量，具有高表达、高稳定的优点。本发明可高效、简便、低成本的获得重组人白细胞介素－11纯品。
重组白细胞 11 表达方法

[发明专利]人脐带间充质干细胞表达人2.5Sβ-神经生长因子及分离纯化的方法-CN201110116404.3有效
发明人：杨国成;夏腊菊;周波;杨媛 -专利权人：武汉北度生物科技有限公司
申请日： 2011-05-06 - 公布日： 2011-10-19 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明涉及一种STEMPRO MSC SFM无血清Cytoline1微载体培养技术，培养人脐带间充质干细胞(HUMSC)表达重组人2.5SβNGF和分离纯化人2.5SβNGF的新方法。该方法采HUMSC表达系统表达2.5S-βNGF，采用等电点沉淀、CM-SepharosFF和SP-SepharoeHP层析三步联用法分离纯化。该方法与从小鼠颌下腺提取NGF或大肠杆菌表达系统表达NGF利用亲和层析、离子交换层析和疏水层析技术分离相比，具有生产规模大、产品纯度高、产品生物活性高和收率高、可避免异源性蛋白的污染等优点。
脐带间充质干细胞表达 2.5 神经生长因子分离纯化方法