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[发明专利]一种用于恙虫病东方体47kDa蛋白的诱导表达及纯化方法-CN202110800501.8在审
发明人：温萌;殷俊;程君;叶英;杨莉;李家斌 -专利权人：李家斌
申请日： 2021-07-15 - 公布日： 2021-08-27 - 主分类号： C07K14/195 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，尤其是一种用于恙虫病东方体47kDa蛋白的诱导表达及纯化方法，解决了现有技术中尚无较好的体外诱导以及大量表达恙虫病东方体相关蛋白的方法和相适应的条件的问题，所述用于恙虫病东方体47kDa蛋白的诱导表达及纯化方法，包括引物合成、目的基因的获取与扩增、重组表达质粒的构建、恙虫病东方体相关蛋白的诱导表达、Western blot试验、重组蛋白表达形式分析、重组蛋白纯化等步骤。本发明设计了一种恙虫病东方体47kDa蛋白获取的方法，通过探索调整蛋白诱导表达条件及蛋白纯化方法，成功体外诱导表达恙虫病东方体相关47kDa蛋白，同时提高体外蛋白的纯度，得到纯度＞85%。
一种用于恙虫病东方 47 kda 蛋白诱导表达纯化方法

[发明专利]一种用于恙虫病东方体TSA蛋白诱导表达及大量纯化的方法-CN202110800496.0在审
发明人：殷俊;温萌;程君;叶英;杨莉;李家斌 -专利权人：李家斌
申请日： 2021-07-15 - 公布日： 2021-08-24 - 主分类号： C07K14/195 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，尤其是一种用于恙虫病东方体TSA蛋白诱导表达及大量纯化的方法，解决了现有技术中尚无较好的体外诱导以及大量表达恙虫病东方体相关蛋白的方法和相适应的条件的问题，所述用于恙虫病东方体TSA蛋白诱导表达及大量纯化的方法，包括引物合成、目的基因的获取与扩增、重组表达质粒的构建、恙虫病东方体相关蛋白的诱导表达、Western blot试验、重组蛋白表达形式分析、重组蛋白纯化等步骤。本发明设计了一种恙虫病东方体TSA蛋白获取的方法，通过探索调整蛋白诱导表达条件及蛋白纯化方法，成功体外诱导表达恙虫病东方体相关TSA蛋白，同时提高体外蛋白的纯度。
一种用于恙虫病东方 tsa 蛋白诱导表达大量纯化方法

[发明专利]一种利用枯草芽孢杆菌表达外源蛋白的方法-CN201310308517.2无效
发明人：汪以真;栾超 -专利权人：浙江大学
申请日： 2013-07-23 - 公布日： 2013-12-04 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌表达外源蛋白的方法。通过构建融合蛋白SUMO-CBF和SUMOprotease1枯草芽孢杆菌分泌表达载体，实现表达并纯化融合蛋白SUMO-CBF和SUMOprotease1；用重组表达得到的SUMOprotease1切割重组表达得到的SUMO-CBF释放重组抗菌肽CBF；通过亲和层析和阳离子交换纯化得到不含内毒素的抗菌肽CBF。纯化产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等均有显著的抑制作用。本发明为使用SUMO技术在枯草芽孢杆菌表达系统中重组表达阳离子抗菌肽提供了可能；融合蛋白不易形成包涵体，直接分泌至胞外，并且重组阳离子抗菌肽不含内毒素，省去了大量下游的纯化工作；尤其是利用同一个系统纯化外源蛋白
一种利用枯草芽孢杆菌表达蛋白方法

[发明专利]一种麻鸭ACE2的基因克隆和鼠抗鸭多克隆抗体的制备-CN202010047410.7在审
发明人：张源淑;李帅;纪晓霞;王换换;闫书平;姜婉茹;李志强 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-01-16 - 公布日： 2021-07-16 - 主分类号： C07K16/40 文献下载
摘要：本发明提供了麻鸭ACE2基因的克隆、蛋白的表达和纯化及其多克隆抗体的制备。提供了ACE2蛋白的氨基酸序列和基因序列，麻鸭ACE2原核表达载体，利用大肠杆菌原核表达系统表达ACE2蛋白，并对蛋白进行纯化，纯化后的蛋白制备效价较高的多克隆抗体，经测定后该抗体效价为1∶1600，可以用于相关实验
种麻 ace2 基因克隆鼠抗鸭多抗体制备

[发明专利]可溶性CD105蛋白真核表达及纯化方法-CN201811389003.3在审
发明人：杨希;葛良鹏;郎巧利;黄楠;余琳;邹贤刚 -专利权人：重庆市畜牧科学院
申请日： 2018-11-21 - 公布日： 2019-03-22 - 主分类号： C07K14/71 文献下载
摘要：本发明属于使用载体引入外来遗传物质的突变或遗传工程技术领域，具体涉及一种可溶性CD105蛋白真核表达及纯化方法，包括以下步骤：A.选择表达CD105蛋白的胞外区片段(E26‑G586)，片段前端信号肽选用CD105蛋白本身的信号肽，并在信号肽前端加入Kozak序列，片段末端加入K_6×His，得到CD105表达盒；B.将CD105表达盒插入pcDNA3.4质粒中，构建真核表达载体pcDNA3.4‑sCD105；C.利用HEK293F细胞进行转染和表达；用二步纯化法进行纯化目的蛋白。该方法利用真核细胞表达和纯化获得高纯度(>95％)CD105蛋白的获得率高达4.17mg/L。
蛋白真核表达表达盒信号肽外来遗传物质遗传工程技术真核表达载体真核细胞表达胞外区片段二步纯化法目的蛋白片段末端前端信号高纯度构建质粒转染突变细胞引入

[发明专利]一种梨PMEI蛋白体外表达的方法及其应用-CN202010041241.6有效
发明人：吴巨友;朱晓璇;汤超;王鹏;张绍铃 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-01-15 - 公布日： 2022-10-14 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种梨PMEI蛋白的体外表达纯化方法及其应用。通过设计引物克隆梨PMEI基因；构建大肠杆菌重组表达质粒PMEI‑pCold‑TF；将构建的重组表达质粒PMEI‑pCold‑TF转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中，构建梨PMEI蛋白重组表达菌株；对重组菌株进行蛋白诱导表达，并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PMEI蛋白；之后，用获得的重组梨PMEI蛋白处理梨花粉管及拟南芥根部。通过本发明的方法，实现了梨PMEI蛋白的首次体外表达及纯化，表达效率高，纯化蛋白稳定存在且纯度完全可以满足相关实验的需要；通过重组梨PMEI蛋白对梨花粉管和拟南芥根部的处理，促进了梨花粉管和拟南芥根部的生长
一种 pmei 蛋白体外表达方法及其应用

[发明专利]一种木聚糖酶表达、纯化方法-CN201810233502.7在审
发明人：万群;张晓帅;李治宏 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2018-03-21 - 公布日： 2018-09-18 - 主分类号： C12N9/42 文献下载
摘要：本发明公开了一种木聚糖酶表达、纯化方法，包括以下步骤：S01，表达步骤：含有目的基因的大肠杆菌在基本培养基中生长，使目的蛋白大量表达；S02，纯化步骤：含有目的蛋白的融合蛋白通过两步镍亲和层析和酶切，得到高纯度木聚糖酶本发明利用基本培养基表达木聚糖酶，只需提供大肠杆菌生长所需的基本营养物质以及微量元素，大幅度降低了表达成本。本发明用两次镍亲和层析柱纯化代替以前的离子交换和分子筛层析等纯化方式，可有效地缩短纯化时间（1天），并且采用本发明的木聚糖酶的纯化方法所得木聚糖酶得率高，纯度高，木聚糖酶的纯度大于96%。
木聚糖酶大肠杆菌基本培养基目的蛋白糖酶种木镍亲和层析柱分子筛层析镍亲和层析基本营养离子交换目的基因融合蛋白微量元素高纯度有效地生长得率酶切

[发明专利]一种以重组蛋白为标签的表达纯化系统-CN200910052999.3无效
发明人：丁澦;陆致晟;陈闻涛;吴旭冬;吴迪;刘瑞;周杨彬;岳志亮;吴一峰 -专利权人：复旦大学
申请日： 2009-06-12 - 公布日： 2010-12-22 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明属生物技术领域，涉及一种蛋白表达纯化系统，尤其是一种以重组蛋白为标签的表达纯化系统。本发明的蛋白表达纯化系统，是将目的蛋白的两端，在N端连接一个新型荧光蛋白sGFP标签，在C端连接上一个组氨酸His短肽，并加有多核苷酸酶切位点，蛋白全长融合表达。该系统的目的蛋白表达效率能够得到改进，提高目的蛋白产率，全长蛋白在可见光下为绿色，可以实施监测蛋白表达效果、纯化过程；仅通过肉眼监视蛋白的表达效率、断裂程度及纯化流程。
一种重组蛋白标签表达纯化系统

[发明专利]一种Klenow（exo-）突变蛋白的表达纯化方法-CN201811409927.5在审
发明人：程奇;孙文丽 -专利权人：浙江善测禾骑士生物科技有限公司
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2019-02-22 - 主分类号： C12N9/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种Klenow(exo‑)突变蛋白的表达纯化方法，具体步骤如下：扩增Klenow(exo‑)目的片段；构建重组表达质粒pTrc99a‑klenow(exo‑)；重组表达质粒的诱导表达；Klenow(exo‑)蛋白的初步纯化；Klenow(exo‑)蛋白的进一步纯化。本发明公开提供了一种大规模制备klenow(exo‑)蛋白的方法，通过overlap获得klenow(exo‑)基因并引入组氨酸标签，利用大肠杆菌表达系统获得高纯度的klenow(exo‑)蛋白，目的蛋白在大肠杆菌系统中表达量较高，纯化工艺简单，生产成本极低。
蛋白重组表达质粒突变蛋白大肠杆菌表达系统大肠杆菌系统组氨酸标签初步纯化目的蛋白目的片段诱导表达表达量高纯度构建扩增制备生产成本基因引入

[发明专利]一种具有美白功效的活性多肽的生物发酵制备方法-CN201811405974.2在审
发明人：张光亚;张春毅;侯艳平 -专利权人：蓝脑科技（厦门）有限公司
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2019-02-26 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种具有美白功效的活性多肽的生物发酵制备方法，包括构建ELPs与decapeptide‑12的融合蛋白表达载体，利用大肠杆菌表达系统表达蛋白，以ELPs为纯化标签分离纯化此融合蛋白，经酶解后即获得具有美白功效的活性多肽其中，本申请针对表达产量低的问题，对大肠杆菌表达可溶性融合蛋白以及ELPs作为纯化标签对其进行分离纯化的步骤进行改进，大大提高了表达产量，使其最终的活性多肽的产量大大增加。
活性多肽美白纯化标签分离纯化融合蛋白生物发酵制备大肠杆菌表达系统可溶性融合蛋白大肠杆菌表达表达蛋白表达载体构建酶解申请改进

[发明专利]重组胎盘生长因子的制备方法-CN02828331.7无效
发明人： D·玛格里尼;M·巴缇斯特;E·康缇;G·萨尔维亚;M·图斯 -专利权人：盖莫纳股份公司
申请日： 2002-02-05 - 公布日： 2005-05-25 - 主分类号： C07K14/475 文献下载
摘要：提取和纯化在诱导型原核表达系统中表达的重组胎盘生长因子(PLGF)的方法包括下列步骤：I)细菌细胞的发酵，II)内含体的提取和纯化，III)表达蛋白的复性，IV)离子交换层析，V)反相层析。
重组胎盘生长因子制备方法

[发明专利]家族3纤维素结合域在真核生物中作为重组蛋白质表达和纯化的亲和标签的应用-CN201110035017.7无效
发明人：洪泂;宛雯;高晓连 -专利权人：中国科学技术大学
申请日： 2011-01-19 - 公布日： 2011-09-07 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明属于重组蛋白表达纯化领域。本发明提供利用家族3纤维素结合域CBM3作为重组蛋白质表达的亲和标签在真核生物中表达和纯化重组蛋白的方法，所述方法包括下列步骤：(1)构建所述真核生物密码子优化的编码CBM3的核苷酸序列；(2)构建步骤(1)中的所述真核生物密码子优化的编码CBM3的核苷酸序列与编码目标蛋白的核苷酸序列的重组构建体；(3)将步骤(2)中构建的所述重组构建体克隆到适于在所述真核生物中表达的表达载体中；(4)将步骤(3)中获得的重组表达载体在所述真核生物中进行表达；和(5)以CBM3作为亲和标签，利用纤维素纯化所表达的重组蛋白。本发明还提供利用CBM3作为重组蛋白质表达的亲和标签结合内蛋白子在真核生物中表达和纯化重组蛋白的方法，所述方法包括构建目标蛋白-内蛋白子-CBM3重组构建体，从而将融合表达的重组蛋白无外额外氨基酸的切出及纯化
家族纤维素结合生物作为重组蛋白质表达纯化亲和标签应用

[发明专利]一种人肿瘤坏死因子TNF－α突变体的生产方法-CN200510026652.3无效
发明人：孙九如;任军;黄阳滨;丰涛;蒋剑 -专利权人：上海新生源医药研究有限公司
申请日： 2005-06-10 - 公布日： 2006-12-13 - 主分类号： C12N15/28 文献下载
摘要：本发明提供了一种人肿瘤坏死因子TNF－α突变体的生产方法，以及有关的表达载体与工程细胞构建、表达和纯化的工艺。优化后的人肿瘤坏死因子TNF－α突变体蛋白基因非常适合在毕赤酵母中表达，同时通过发酵与纯化工艺优化，提高了表达量和纯化得率，具有表达高、稳定性好，生产工艺简便的优点。
一种肿瘤坏死因子 tnf 突变体生产方法

[发明专利]一种重组人干扰素γ的生产方法-CN200510026132.2无效
发明人：孙九如;任军;黄阳滨;丰涛;蒋剑 -专利权人：上海新生源医药研究有限公司
申请日： 2005-05-24 - 公布日： 2006-11-29 - 主分类号： C12N15/23 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组人干扰素γ的核苷酸序列，高效生产重组人干扰素γ的生产方法，以及有关的表达载体与工程细胞构建、表达和纯化的工艺。优化后的重组人干扰素γ蛋白基因非常适合在毕赤酵母中表达，同时通过发酵与纯化工艺优化，提高了表达量和纯化得率，具有表达高、稳定性好，生产工艺简便的优点。
一种重组干扰素生产方法

[发明专利]一种原核表达载体pASK－75－EX-CN200510046140.3无效
发明人：徐明恺;张惠文;张成刚 -专利权人：中国科学院沈阳应用生态研究所
申请日： 2005-03-30 - 公布日： 2006-10-04 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明涉及原核表达载体，采用设计并合成的载体克隆表达区基因构建成一种新型原核表达载体pASK－75－EX，其具有序列表SEQ ID NO：1中碱基序列；其具有常见的限制性核酸内切酶组成的多克隆位点和纯化检测标签结果表明pASK－75－EX可高效表达外源蛋白scFv－ML与B－L－SEC2，且其表达产物由于载体中新添加的纯化检测标签而可被方便廉价的纯化和检测。
一种表达载体 pask 75 ex