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[发明专利] 一种蚯蚓抗菌肽的表达 方法 -CN202010124156.6 在审
发明人：
李银生 ;吴宜钊 ;邱江平
- 专利权人：
上海交通大学
申请日：
2020-02-27
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公布日：
2020-06-19
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主分类号：
C12N15/75 文献下载
摘要： 本发明公开了一种蚯蚓抗菌肽的表达 方法；通过构建改进型麦芽糖操纵元启动子Pglv ‑M1，淀粉酶信号肽序列SP amyQ、SUMO序列和 抗菌肽序列所构成的枯草芽孢杆菌表达 载体，实现利用麦芽糖作为诱导物表达 蚯蚓抗菌肽；利用SUMO蛋白酶切割所得目标蛋白后，利用亲和层析纯化 得到蚯蚓抗菌肽LumbricinⅠ(6‑34)。纯化 产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母等都有抑菌作用。本发明采用枯草芽孢杆菌作为表达 宿主，不含内毒素，便于纯化 ；采用启动子Pglv ‑M1，麦芽糖作为诱导物，并减弱了葡萄糖对其的抑制作用；对各段序列进行了优化，提高表达 产量；融合蛋白可分泌至细胞外，减少纯化 步骤。一种 蚯蚓 抗菌 表达 方法
[发明专利] 一种高效表达 及纯化 Cas9蛋白的方法和 应用 -CN202210054940.3 有效
发明人：
潘力 ;廖清 ;王斌
- 专利权人：
华南理工大学
申请日：
2022-01-18
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公布日：
2023-08-22
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主分类号：
C12N9/22 文献下载
摘要： 本发明公开一种高效表达 及纯化 Cas9蛋白的方法和 应用。本发明主要包括Cas9表达 载体的构建，大肠杆菌的转化，Cas9蛋白的诱导表达 ，Cas9蛋白的纯化 ，以及体内体外的应用。使用GB1作为促溶标签，可增加SpCas9的稳定性及溶解性，初步提高SpCas9的表达 量，且GB1不影响SpCas9的功能，后续不需去除，简便可行。再通过使用10×His标记，有助于融合蛋白与Ni‑NTA树脂的高亲和力，并有助于高盐洗去除污染的核酸，提高纯化 效果。使用串联T7启动子，明显提高SpCas9的表达 量。通过体内外应用，证明了所纯化 得到的SpCas9‑GB1蛋白正确折叠，具有切割DNA的能力，且可入核进行基因编辑。一种 高效 表达 纯化 cas9 蛋白 方法 应用
