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[发明专利]牛源性成分定量分析标准质粒、制备及检测方法及应用-CN202110317748.4有效
发明人：马炳存;陈学强;李琰歆;贺巧玲;曹乾超;王灿;崔学文;刘阳;李增婷 -专利权人：四川省药品检验研究院（四川省医疗器械检测中心）
申请日： 2021-03-25 - 公布日： 2023-10-17 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明涉及食品检验技术领域，公开了一种牛源性成分定量分析标准质粒的制备方法，将beef基因与ref基因串联得beef‑ref基因，再将beef‑ref基因克隆入pUC 57质粒中，即得beef基因和ref基因含量为1:1的标准质粒；还公开了标准质粒，分析方法和应用。本发明本发明建立了深加工肉制品中牛源性成分定量分析的方法，能够定量分析样品中牛源性成分含量，满足了食品检测领域对肉制品中肉源性成分定量分析的需求，能够有效区分交叉污染、原料带入和恶意掺假，为市场监管提供了有力的技术支撑，进一步保障了肉制品食品安全。
牛源性成分定量分析标准质粒制备检测方法应用

[发明专利]一种DNA分子克隆方法及其应用-CN201710222909.5有效
发明人：言普;周鹏;沈文涛;庹德财;黎小瑛 -专利权人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所
申请日： 2017-04-07 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种DNA分子克隆方法及其应用，所述方法包括以下步骤：获得入门载体含有ccdB基因，ccdB基因两端分别依次连接XcmI酶切位点、接头序列和SfiI酶切位点；获得表达载体含有ccdB基因，ccdB基因两端分别依次连接SfiI酶切位点和接头序列；通过PCR获得目标DNA，通过TA克隆插入到所述入门载体，获得入门克隆；或在PCR过程中通过引物加入相应的接头序列，获得线性PCR产物；将上述入门克隆或线性PCR产物与表达载体混合，在克隆反应液作用下完成克隆。本发明改进了克隆反应液以及入门载体和表达载体的结构，实现单个或多个线性PCR产物或环状质粒上的DNA在克隆反应液作用下直接克隆到环状目标载体的一个或多个部位，提高了克隆效率，可广泛用于各种类型的DNA分子克隆。
一种 dna 分子克隆方法及其应用

[发明专利]一种杀虫球孢白僵菌工程菌构建方法-CN201911124752.8有效
发明人：李同祥;孙会刚;田林;汤薇;黄天姿;董玉玮;李文;王春艳;高兆建;王陶 -专利权人：徐州工程学院
申请日： 2019-11-18 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种杀虫球孢白僵菌工程菌构建方法，设计引物从pUC57‑AaIT载体中PCR扩增AaIT基因，经酶切、纯化和pbarGPEl构建pbarGPEl‑AaIT载体；用引物扩增出GpdA‑AaIT‑TrpC表达盒；用Not1单酶切pGPS3Ben‑bbchit1并去磷酸化，与用Not1酶切的GpdA‑AaIT‑TrpC连接，转化筛选获得pGPS3Ben‑bbchit1‑AaIT表达载体，将其导入根癌农杆菌感受态细胞中获得阳性转化子菌落；球孢白僵菌孢子悬液和含pGPS3Ben‑bbchit1‑AaIT载体的根癌农杆菌液混合，经固体IM培养基、CPZ选择培养基筛选获得转化球孢白僵菌工程菌株。本发明构建的球孢白僵菌工程菌株可制备高效杀虫生物防治剂，对环境无污染且防治效果良好，适合在生物防治技术领域推广。
一种杀虫球孢白僵菌工程构建方法

[发明专利]快速构建多聚腺苷酸polyA质粒的方法及相应质粒-CN202310974073.X在审
发明人：钱莉春;姜伟;赵碧玉;吴昕;杨熹;黎建军;李定华 -专利权人：苏州左旋星生物科技有限公司
申请日： 2023-08-04 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明涉及快速构建多聚腺苷酸polyA质粒的方法及相应质粒。该方法包括构建质粒骨架pLevoB1，合成目的mRNA基因片段并添加酶切位点，将目的mRNA基因片段插入质粒骨架pLevoB1中，即得到多聚腺苷酸polyA质粒成品，用作目标mRNA的模板质粒DNA。本发明能稳定、高效地为目的mRNA基因片段添加多聚腺苷酸polyA序列，且提高了正确克隆比例，所得多聚腺苷酸polyA质粒成品可用作目标mRNA的模板质粒DNA；还能便捷地更换线性化位点或增加多聚腺苷酸polyA序列。
快速构建腺苷酸 polya 质粒方法相应

[发明专利]一种食品级降解乙醇枯草杆菌重组菌的构建方法-CN201910940788.7有效
发明人：陆兆新;卢静;李金良;吕凤霞;张充 -专利权人：南京农业大学;南京福斯弗瑞生物科技有限公司
申请日： 2019-09-30 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明涉及一种食品级降解乙醇的枯草杆菌重组菌的构建方法，属于生物技术领域。乙醇经乙醇脱氢和乙醛脱氢酶的作用下可以转化为对人体相对无毒的乙酸。本发明公开的重组枯草杆菌的构建方法，通过双交换同源重组的方法将两个酶基因的表达盒整合至枯草杆菌的基因组上，实现了乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的胞内共表达，且满足食品级重组微生物的要求。该重组枯草杆菌可以在低pH条件下降解乙醇，可作为口服制剂“帮助”人体代谢部分酒精，起到解酒护肝的作用，在解酒保健品领域具有广阔的应用前景。
一种食品级降解乙醇枯草杆菌重组构建方法

[发明专利]一种提高TOPO克隆中载体连接效率的方法及试剂盒-CN202210972356.6有效
发明人：聂俊伟;曹林;瞿志鹏;荆彦平;熊晶晶 -专利权人：南京诺唯赞生物科技股份有限公司
申请日： 2022-08-15 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明提供一种提高TOPO克隆中载体与目的DNA连接效率的方法，包括向连接转化体系中加入一定量的DNA结合蛋白，并在此基础上提供了相应的连接转化试剂及试剂盒，采用本发明的方法、试剂或试剂盒可获得更多的克隆载体。
一种提高 topo 克隆载体连接效率方法试剂盒

[发明专利]核酸递送方法及系统-CN202180066876.4在审
发明人：宋杰;程进;唐林林 -专利权人：上海然爱营销咨询合伙企业（有限合伙）
申请日： 2021-09-29 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：提供了一种组合物，其包含单链DNA以及至少一种转染试剂，所述组合物中所述单链DNA与所述转染试剂质量比的比值为约100至约0.1。还提供了使用所述组合物递送核酸的方法和系统。
核酸递送方法系统

[发明专利]含有IRES及新型启动子的核酸载体及其应用-CN202111647377.2在审
发明人：赵欣 -专利权人：赵欣
申请日： 2021-12-29 - 公布日： 2023-07-11 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种使用新型启动子的核酸载体。该核酸载体是能够在体外转录mRNA的质粒载体。本发明构建的核酸载体，包括T7或VSW3启动子、目标蛋白基因、内部核糖体进入位点(IRES)以及位于IRES之后的外源基因3’‑端的长度为120‑200的多聚腺苷脱氧核酸poly(A)片段，转录出的mRNA直接拥有poly(A)，不需要额外的加尾操作。VW3启动子体外转录所得mRNA在转染细胞后，呈现出更强的mRNA稳定性和更高的蛋白表达能力。另外，使用本发明构建的核酸载体体外转录出的mRNA含有IRES序列，可同时表达两种蛋白。含有CVB3 IRES序列的核酸载体体外转录出的mRNA蛋白表达量高于含有ECMV等其他IRES序列的核酸载体。
含有 ires 新型启动子核酸载体及其应用

[发明专利]一种阻断受体结合的核糖体失活蛋白减毒改造的方法-CN202010289198.5有效
发明人：刘梦铃 -专利权人：成都富岱生物医药有限公司
申请日： 2020-04-14 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本专利申请属于生物工程技术领域，具体公开了一种阻断受体结合的核糖体失活蛋白减毒改造的方法，A、预测结合位点，以分子对接软件预测核糖体失活蛋白与受体结合的部位和结合位点；B、根据A步骤中的预测结果，对结合位点的氨基酸残基进行突变改造；C、根据步骤B得出突变体基因进行密码子优化；D、将C步骤中优化的目标突变体全基因合成，并进行表达载体构建；E、检测，对D步骤中构建的目标突变体基因蛋白进行检测，通过毒性试验和荧光测试，检测其是否进入细胞，检测其是否表达。本方案创建的突变结合位点氨基酸残基的结构改造模式能显著阻断α‑MMC进入细胞及其引发的细胞毒性，从而达到显著减毒效果。
一种阻断受体结合核糖体蛋白改造方法

[发明专利]一种构建冠状病毒感染性克隆的方法及其应用-CN201910373562.3有效
发明人：谢青梅;封柯宇;邵冠明;张新珩;邵洋洋 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2019-05-05 - 公布日： 2023-06-20 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种构建冠状病毒感染性克隆的方法及其应用，首先是获得覆盖所选冠状病毒全长基因组的cDNA小片段，然后进行分段克隆，再使用RED/ET重组技术将含有冠状病毒全长基因组的cDNA小片段组装到质粒载体上，筛选获得含有该冠状病毒全长cDNA的感染性克隆。其有益效果在于，本发明首次利用中低拷贝的质粒载体成功构建了鸡传染性支气管炎病毒感染性克隆，为冠状病毒的感染性克隆的构建开辟了新途径，该方法解决了冠状病毒载体选择困难和病毒大基因组在细菌中不稳定的问题，阳性克隆率高，且获得的反向遗传疫苗株克隆具有完整性、传代稳定性和感染性，拯救效率高，为研究冠状病毒的致病机理和开发新型疫苗等提供了有效工具。
一种构建冠状病毒感染性克隆方法及其应用

[发明专利]通过不定胚方式固定水稻杂种优势的方法-CN201910589002.1有效
发明人：赵炳然;吕启明;毛毕刚 -专利权人：湖南杂交水稻研究中心
申请日： 2019-07-02 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过不定胚方式固定水稻杂种优势的方法，将OsMADS24启动子与BBM1基因编码序列连接，构建到表达载体中得到载体A；构建ZEA1双靶点CRISPR/Cas9敲除的载体B；将载体A和载体B通过农杆菌介导法共转化到杂交水稻种子中得到T0代植株；筛选ZEA1基因双等位纯合敲除同时成功异位表达BBM1基因的T0代植株，进行自交得到自交种子。本发明利用水稻珠心组织特异表达启动子，将水稻成胚关键基因在杂交水稻珠心组织中特异表达，诱导珠心组织体细胞形成不定胚；将在水稻卵细胞中特异表达并对卵细胞生长发育发挥作用的基因敲除；使杂交水稻自交。这种方法可以固定水稻的杂种优势，大大提高杂交水稻配组效率，消除杂交水稻繁制种风险。
通过不定方式固定水稻杂种优势方法

[发明专利]使用加标签的向导RNA构建体进行高效基因筛选的组合物和方法-CN201980085316.6有效
发明人：魏文胜;朱诗优;曹中正;刘志恒;何苑;袁鹏飞 -专利权人：北京大学;博雅缉因（北京）生物科技有限公司
申请日： 2019-12-20 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明提供了使用一组或多组具有内部标签(“iBAR”)的向导RNA构建体进行基因筛选的组合物、试剂盒和方法。每组具有三个或更多个靶向相同基因组基因座的向导RNA构建体，但嵌入有不同的iBAR序列。
使用标签向导 rna 构建进行高效基因筛选组合方法

[发明专利]一种检测单ADP-核糖基转移酶活性的基因编码探针-CN202211390395.1在审
发明人：赵晟;刘雪莲;赵志康;仲明 -专利权人：东南大学
申请日： 2022-11-08 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开一种检测单ADP‑核糖基转移酶活性的基因编码探针，属于生物技术领域，用于在活细胞水平测量蛋白质的单ADP核糖基化(MAR)，我们将绿色荧光蛋白(NeoGreen)连接到PARP14的Macrodomain2(M2)的C末端，该融合蛋白可检测体外和细胞内的PARP活性，为了验证该探针的有效性，我们同时设计了能够表达融合了红色荧光蛋白的TIPARP基因(即PARP7)的质粒，并与表达M2‑NeonGreen的质粒共转染到293T细胞中，然后荧光显微镜观察到TIPARP在共转染的293T细胞中形成了特异性的绿色核凝聚物。结果表明，M2‑NeonGreen可以在过表达TIPARP的细胞系中产生特定的可测量信号，M2‑NeonGreen探针不仅为细胞水平的药物高通量筛选提供了一种简单、快速、低成本的方法，而且为未来体内检测MAR信号提供了一种方便有效的工具。
一种检测 adp 核糖转移酶活性基因编码探针

[发明专利]一种快速无痕制备含长多聚腺嘌呤的mRNA的方法及应用-CN202211001682.9在审
发明人：陈薇;杨益隆;徐俊杰;赵晓帆;张章;李煜;宰晓东;李耀辉;侯利华 -专利权人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
申请日： 2022-08-19 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速无痕制备含长多聚腺嘌呤的mRNA的方法及应用，通过模块化设计和IIS型限制性DNA内切酶系统，将包含长poly(A)的复杂基因合成分解为简单目的基因的快速合成和与预先制备的前导质粒无痕连接两个步骤。基于该方法合成的mRNA无需加尾操作即可携带固定长度的poly(A)，并且由于目的基因合成不涉及长poly(A)复杂片段，模板质粒制备速度和效率得到极大提高。所述质粒能够作为线性化模板直接用于长多聚腺苷脱氧核酸poly(A)mRNA的体外转录合成，IIS型限制性DNA内切酶系统无需在目的基因和poly(A)之间引入额外拼接序列，转录出的mRNA序列完全符合预期。
一种快速制备含长多聚腺嘌呤 mrna 方法应用

[发明专利]一种无抗性标记基因枯草表达重组质粒及其构建方法与应用-CN202210816750.0在审
发明人：潘力;陈倩琳 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2022-07-12 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明提供了一种无抗性标记基因枯草表达重组质粒及其构建方法与应用。本发明利用枯草芽孢杆菌SCK6超级感受态直接构建不含大肠杆菌复制起始位点Ori及氨苄抗性基因的Bsggt重组表达质粒，能够获得更小的游离质粒表达系统，为异源蛋白在生产应用过程中提供了更小质粒的稳定表达工具。本发明使用Cas9n‑AID碱基编辑技术进行无抗性标记表达质粒的构建对于菌株的筛选过程简单，所构建的无抗性标记表达质粒相对于传统的穿梭质粒更小，且表达过程中不需要添加诱导剂进行蛋白的诱导表达，由于表达质粒无抗性标记，在培养过程中由于没有抗生素的压力生长速度能明显提高，高表达的同时无抗生素的引入更适用于食品安全级别的生产应用。
一种抗性标记基因枯草表达重组质粒及其构建方法应用

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