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[发明专利]一种重组牛肠激酶的生产方法-CN200510026133.7无效
发明人：孙九如;任军;黄阳滨;杜碧金;沈丽丽 -专利权人：上海新生源医药研究有限公司
申请日： 2005-05-24 - 公布日： 2006-11-29 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组牛肠激酶的核苷酸序列，高效生产重组牛肠激酶的生产方法，以及有关的表达载体与工程细胞构建、表达和纯化的工艺。优化后的重组牛肠激酶蛋白基因非常适合在毕赤酵母中组成型分泌表达，同时通过发酵与纯化工艺优化，提高了表达量和纯化得率，具有表达高、稳定性好、活性高、生产工艺简便的优点。
一种重组肠激酶生产方法

[发明专利]一种Aβ42修饰蛋白及其表达与纯化方法-CN201711018671.0有效
发明人：刘夫锋;贾龙刚;路福平;王文娟;李玉;张会图 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2017-10-27 - 公布日： 2020-05-12 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明属于生物技术和基因工程技术领域，具体涉及一种Aβ42修饰蛋白及其在大肠杆菌中的表达及纯化方法。本发明构建的Aβ42表达体系提供了原核生物表达人淀粉样蛋白Aβ42表达载体的构建方法，并将表达载体导入至大肠杆菌表达宿主中，经诱导表达、两步纯化及鉴定后获得具有高纯度生物活性的目标Aβ42‑His蛋白。本方法所采用的大肠表达系统，具有表达效率高、表达量大、成本低、易操作等特点，所获得的Aβ42多肽含有His标签方便纯化，且纯度高、产率高，比化学合成Aβ42具有更好的聚集特性和细胞毒性等优点。
一种 42 修饰蛋白及其表达纯化方法

[发明专利]一种黄曲霉尿酸氧化酶的制备方法-CN200410017948.4有效
发明人：刘国安;方永强;张玉良 -专利权人：杭州北斗生物技术有限公司
申请日： 2004-04-27 - 公布日： 2005-11-02 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种黄曲霉尿酸氧化酶的制备方法，其包括如下步骤：(1)、黄曲霉尿酸氧化酶基因的获得；(2)表达载体的构建及转化大肠杆菌工程菌(3)、阳性克隆的筛选、培养、诱导表达(4)、融合蛋白的分离、纯化(5)、融合蛋白的酶切、纯化，其中所述的表达载体质粒是pET系列载体质粒，本发明一种重组黄曲霉尿酸氧化酶的制备方法，其表达方案简单，表达量高，纯化工艺简单，收率高，表达产物可溶，不需要复性，直接用层析方法进行纯化，纯化收率大大提高，适合大规模制备。
一种黄曲霉尿酸氧化酶制备方法

[发明专利]一种表达和纯化果蝇RDGC/CaM蛋白复合物的方法-CN202210323089.X在审
发明人：刘伟;刘佳;刘宇扬;蒋日婷;陈倩苟 -专利权人：深圳北京大学香港科技大学医学中心
申请日： 2022-03-30 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种使用SF9昆虫细胞表达系统共表达和纯化果蝇“视网膜变性蛋白RDGC和钙调蛋白CaM”蛋白复合物的方法。本发明方法是通过使用昆虫细胞表达纯化体系，采用Bac‑to‑Bac杆状病毒表达系统，通过转染试剂感染SF9昆虫细胞，然后通过共表达的方式感染昆虫细胞获得大量目的蛋白RDGC/CaM复合物，最终通过Strep‑tag亲和层析+凝胶过滤层析的方法体外纯化果蝇视网膜变性蛋白RDGC和钙调蛋白CaM复合物。通过SF9昆虫细胞表达系统将果蝇CaM蛋白与果蝇RDGC蛋白共表达和纯化其复合物的方法，对后续研究RDGC/CaM蛋白复合物在光信号转导中的调控机理及相关结构信息具有重要的科学意义和后续广阔的应用转化前景
一种表达纯化果蝇 rdgc cam 蛋白复合物方法

[发明专利]一种纯化中性或碱性蛋白酶的方法-CN201910989473.1在审
发明人：石亚伟;文阳宣 -专利权人：山西大学
申请日： 2019-10-17 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12N9/50 文献下载
摘要：本发明公开了一种纯化中性或碱性蛋白酶的方法，通过化学合成编码eglinC突变体的DNA序列，构建eglinC突变体的重组表达载体，利用大肠杆菌重组表达并纯化eglinC突变体蛋白，然后将蛋白偶联在sepharose4B柱材料，利用eglinC突变体和蛋白酶的特异结合来分离纯化细菌表达的中性或碱性蛋白酶。本发明利用eglinC突变体构建的亲和纯化系统，方法简单，操作步骤少，酶活损失低，纯化倍数高。
突变体碱性蛋白酶大肠杆菌重组化学合成编码重组表达载体蛋白酶突变体蛋白突变体构建分离纯化亲和纯化特异结合细菌表达构建酶活蛋白

[发明专利]一种纯化蛋白的方法-CN201711492741.6有效
发明人：王天泽;郝淑静 -专利权人：北京中科唯新生物医学研究所有限公司
申请日： 2017-12-30 - 公布日： 2021-10-12 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种纯化蛋白的方法,上述方法包括如下步骤:1)选择S100蛋白家族构建待纯化蛋白的重组融合蛋白表达载体；2)上述重组融合蛋白的表达:得到表达菌体；3)上述重组融合蛋白的分离纯化:收集上述表达菌体，破碎上述表达菌体的细胞，离心并收集含上述重组融合蛋白的上清液,上述上清液进行阴离子交换柱初步分离,经过上样、洗脱并收集混合在300至400毫升范围内的洗脱液样品,向上述洗脱液样品中加入氯化钙(CaCl2),上疏水层析柱，得到上述疏水层析柱纯化后的融合蛋白；4)电泳鉴定；5)酶切纯化上述疏水层析柱纯化后的融合蛋白。本发明提出的新的纯化蛋白的方法，操作方便，成本低，纯化效果好。
一种纯化蛋白方法

[发明专利]重组虹鳟I型干扰素、其原核表达和纯化方法及应用-CN201910948594.1有效
发明人：魏文燕;李良玉;汪开毓;刘家星;杨马;陈霞;杨倩;唐洪;刘韬;张小丽;陈健;杨壮志 -专利权人：成都市农林科学院;四川农业大学
申请日： 2019-10-08 - 公布日： 2022-06-10 - 主分类号： C07K14/555 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组虹鳟I型干扰素、其原核表达和纯化方法及应用，原核表达和纯化方法包括虹鳟I型干扰素基因的获取、虹鳟I型干扰素基因的筛选、原核表达载体的构建与筛选和重组蛋白的表达与纯化等几个步骤，制备得到的虹鳟
重组虹鳟干扰素表达纯化方法应用

[发明专利]一种隐孢子虫蛋白激酶的纯化方法-CN201811497728.4有效
发明人：冯耀宇;苏嘉缘;张强;李娜;郭亚琼 -专利权人：华东理工大学;华南农业大学
申请日： 2018-12-07 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12N9/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种隐孢子虫蛋白激酶的纯化方法，先通过构建隐孢子虫蛋白激酶的体外重组表达载体，再进行质粒转导、IPTG低温诱导表达，成功表达后的菌体裂解后，经割胶回收纯化蛋白；本发明纯化方法通过低温诱导以及改善IPTG浓度的方式，提高了表达蛋白的可溶性，同时通过割胶回收的方法解决了隐孢子虫蛋白激酶在体外表达中易出现的自切降解包涵体表达等问题，能够得到高纯度条带单一且具备酶学活性的重组蛋白，并且能够提高对难以表达、分子量较大蛋白的纯化效果。所纯化得到的蛋白能够进一步用于功能性分析研究，为解决隐孢子虫蛋白功能领域的诸多问题奠定基础。
一种孢子蛋白激酶纯化方法

[发明专利]溶葡萄球菌酶的制备方法和其衍生物及衍生物的制备方法-CN200710068724.X有效
发明人：刘国安;刘沐荣;康经武 -专利权人：杭州北斗生物技术有限公司
申请日： 2007-05-22 - 公布日： 2007-12-26 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及溶葡萄球菌酶的制备方法和其衍生物及衍生物的制备方法。溶葡萄球菌酶的制备方法主要包括：设计并合成优化的溶葡萄球菌酶基因，构建表达载体后转化大肠杆菌工程菌，筛选高表达菌株，发酵培养工程菌，表达产物分离纯化。其中所述的表达载体质粒是pET系列载体质粒。本发明的方法，表达方案简单，表达量高，纯化工艺简单，收率高，表达产物可溶，不需要复性，直接用层析方法进行纯化，纯化收率大大提高，适合大规模制备。
葡萄球菌制备方法衍生物

[发明专利]骨形态发生蛋白BMP-2重组蛋白、编码基因及其原核表达方法-CN202310044443.X在审
发明人：易红飞;胡慧芳 -专利权人：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
申请日： 2023-01-30 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C07K14/51 文献下载
摘要：还公开了其编码基因、表达质粒、原核表达载体以及原核表达方法。本发明采用原核表达系统，创造性地引入增溶标签，使包涵体表达转为可溶性表达，BMP‑2在原核系统中为包涵体表达，通过添加增溶标签，使蛋白转为可溶性表达，减小了蛋白分离纯化的难度，缩短了纯化周期，提高了纯化效率
形态发生蛋白 bmp 重组编码基因及其表达方法

[发明专利]一种家蚕气味结合蛋白BmOBP2的表达纯化方法-CN201310025720.9有效
发明人：张耀洲;刘玲玲;杜瑶瑶;陈剑清;舒特俊 -专利权人：天津耀宇生物技术有限公司
申请日： 2013-01-22 - 公布日： 2013-05-15 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种家蚕气味结合蛋白BmOBP2的表达纯化方法。通过设计引物，构建重组表达载体pET-32a-BmOBP2，诱导表达得到大量重组目的蛋白，重组蛋白经镍离子亲和层析和阴离子交互那层析两步纯化等简易的技术可以得到纯度较高的重组蛋白，为以后研究其三维结构和生物学功能奠定了极其重要的基础，该还方法解决了天然膜蛋白表达量低、难纯化的问题。
一种家蚕气味结合蛋白 bmobp2 表达纯化方法

[发明专利]恶臭假单胞菌KT2440蛋白同源表达载体的构建及表达、纯化方法-CN201910955769.1在审
发明人：崔格特 -专利权人：武汉博欧特生物科技有限公司
申请日： 2019-10-09 - 公布日： 2019-12-20 - 主分类号： C12N15/78 文献下载
摘要：本发明公开了一种恶臭假单胞菌KT2440蛋白同源表达载体的构建及表达、纯化方法，首先构建含10×His标签的表达载体，将目的蛋白基因插入该表达载体中，再将含有目的蛋白的表达载体转入恶臭假单胞菌KT2440中诱导表达。表达出目的蛋白后，通过亲和层析纯化的方法获得纯目的蛋白，蛋白酶切除10×His标签，获得纯目的蛋白。本发明提出的蛋白表达载体，使得恶臭假单胞菌KT2440中无法通过异源表达的蛋白得到纯化。
表达载体目的蛋白恶臭假单胞菌构建蛋白蛋白表达载体目的蛋白基因亲和层析纯化蛋白酶异源表达诱导表达同源切除转入

[发明专利]一种重组NotI限制性内切酶在大肠杆菌中的生产方法-CN201710301236.2有效
发明人：李森;雍德祥;邹刚刚;王方平;刘宗文 -专利权人：通用生物系统（安徽）有限公司
申请日： 2017-05-02 - 公布日： 2017-07-21 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组NotI限制性内切酶在大肠杆菌中的生产方法，包括以下步骤：a)、pCreat Duet‑NotI‑甲基化酶表达质粒的构建；b)、NotI限制性内切酶与甲基化酶蛋白的诱导表达与鉴定；C)、NotI限制性内切酶与甲基化酶蛋白的纯化与鉴定，本发明应用大肠杆菌表达系统，通过设计共表达载体，与甲基化酶基因共表达，甲基化酶可以保护大肠杆菌基因组免受NotI的影响，从而实现重组NotI在大肠杆菌中表达，再经过亲和层析和Superdex 200凝胶过滤层析对NotI蛋白进行提纯，整个纯化过程需5到6h，简单的两步纯化方式整体大幅缩短了NotI蛋白的纯化流程与纯化时间，同时提高了NotI蛋白的纯度、得率和酶活，该NotI蛋白纯化工艺的新方法，为研发及生产其他Ⅱ型限制性内切酶奠定了基础。
一种重组 noti 限制性内切酶大肠杆菌中的生产方法

[发明专利]以硫磺菌蘑菇凝集素N-乙酰氨基乳糖胺结合域作为融合标签的目标蛋白表达与纯化方法-CN201510744121.1有效
发明人：赵军;王川庆;高冬生;杨霞;常洪涛;陈陆;王新卫;李永涛;刘红英;姚慧霞;李晓静 -专利权人：河南农业大学
申请日： 2015-11-04 - 公布日： 2020-03-20 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明公开了一种人工合成的编码硫磺菌蘑菇凝集素N‑乙酰氨基乳糖胺结合域的LSL基因以及含有LSL基因的表达载体、宿主细胞，LSL基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。本发明还公开了一种以LSL作为融合标签的目标蛋白表达与纯化方法，该方法具体涉及LSL基因合成、含LSL基因和目标蛋白基因的表达载体构建、含LSL基因和蛋白酶基因的表达载体构建、融合蛋白的表达与纯化、LSL蛋白标签去除和目标蛋白纯化等步骤。本发明方法简单易行，实现了目标蛋白一步纯化，可获得高纯度的目标蛋白，降低了蛋白纯化成本，可广泛用于生物医药、兽药等领域的活性蛋白质以及生物制品行业中疫苗抗原的规模化制备，具有较高的实用价值。
硫磺蘑菇凝集素乙酰氨基乳糖结合作为融合标签目标蛋白表达纯化方法

[发明专利]一种异源表达卤化酶的纯化方法-CN202110017687.X在审
发明人：王苗;李昱良;刘建国;王倩;任群利;胡欢;李小兰 -专利权人：遵义医科大学
申请日： 2021-01-07 - 公布日： 2021-03-12 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种异源表达卤化酶的纯化方法，属于基因工程技术领域。本发明通过构建一个卤化酶高效表达载体，富集蛋白，利用HIS标签纯化树脂纯化pET‑abxH R卤化酶，在最适缓冲液浓度(NTA‑60、NTA‑80)下洗脱出目的蛋白，BCA试剂盒确定蛋白浓度大小，纯化的蛋白酶保存于本发明提供了一种链霉菌来源的卤化酶表达纯化方法，具有良好的普适性，尤其适于在大肠杆菌中表达的卤化酶。
一种表达卤化纯化方法