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[发明专利]一种抗流感病毒多肽的制备方法及应用-CN202211561946.6在审
发明人：刘龙;刘志新;付亚男;曾凤;黄聪聪 -专利权人：湖北医药学院
申请日： 2022-12-07 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物技术领域，特别涉及一种抗流感病毒多肽的制备方法及应用，与现有技术相比，本发明首次将昆虫杆状病毒表达系统与IMPACT纯化系统结合起来制备抗病毒多肽，通过昆虫杆状病毒表达系统表达多肽，经信号肽分泌到上清中，通过IMPACT系统进行自切割纯化，将高效表达与高效纯化相结合，可以高效生产抗病毒多肽，可抑制流感病毒的cRNA及vRNA合成，具有显著的抑制病毒效果。
一种流感病毒多肽制备方法应用

[发明专利]利用重组大肠杆菌高效表达Staphyloccocus aureus α-乙酰乳酸脱羧酶-CN201210210440.0有效
发明人：饶志明;李静静;张显;徐美娟 -专利权人：江南大学
申请日： 2012-06-20 - 公布日： 2012-12-12 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板，扩增得到编码α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)的基因saald，将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a上，在E.coli BL21中用IPTG诱导表达，利用表达载体pET-28a上的6·His-Tag标签，选用Ni柱亲和层析纯化表达具有活性的α-乙酰乳酸脱羧酶。粗酶液的比酶活为56U/mg，纯化后比酶活达到469.85U/mg，纯化倍数达8.36倍，回收率为87.65％。
利用重组大肠杆菌高效表达 staphyloccocus aureus 乙酰乳酸脱羧酶

[发明专利]一种DAHP合酶的异源可溶性表达方法及其重组载体和基因工程菌-CN201110368962.9无效
发明人：花强;韦柳静;马娜;范宇翔;刘念念;周燕;张婕;李婷兰 -专利权人：华东理工大学
申请日： 2011-11-18 - 公布日： 2012-06-20 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种由珍贵橙色束丝放线菌(Actinosynenma pretiosun)aroF基因编码的DAHP合酶的异源可溶性表达方法及所用的重组载体和基因表达工程菌。该方法通过将aroF基因连接到表达载体上形成重组表达载体，并将之转化到已含有编码分子伴侣蛋白GroEL/GroES的质粒pGro7的大肠杆菌中，诱导表达后可得到可溶性的具有酶活性的DAHP合酶，之后进行分离纯化和酶活检测本发明首次实现了珍贵橙色束丝放线菌DAHP合酶的异源可溶性表达并得到纯化的DAHP合酶；分离纯化和酶活检测的方法较之前有了较大改进。本发明对于研究珍贵橙色束丝放线菌(A.pretiosum)的莽草酸合成途径和氨基莽草酸途径有着重要意义。
一种 dahp 可溶性表达方法及其重组载体基因工程

[发明专利]针对艰难梭状芽孢杆菌的免疫方法-CN201680041646.1在审
发明人： L.奎伊梅内尔;P.J.皮伊特罗邦;P.伦多诺-哈耶斯;S.哈塞 -专利权人：圣诺菲·帕斯图尔公司
申请日： 2016-05-14 - 公布日： 2018-03-27 - 主分类号： A61K39/08 文献下载
摘要：本公开内容一般涉及对抗艰难梭状芽孢杆菌(C. difficile)的治疗性和/或保护性疫苗接种领域。更特别地，它涉及针对表达艰难梭状芽孢杆菌二元毒素(CDT)的艰难梭状芽孢杆菌菌株和不表达CDT的菌株免疫宿主的方法。这些方法包括给予宿主包含灭活的纯化的艰难梭状芽孢杆菌毒素A和纯化的毒素B的免疫原性组合物。纯化的艰难梭状芽孢杆菌毒素可源自不表达CDT的艰难梭状芽孢杆菌菌株。
针对艰难芽孢杆菌免疫方法

[发明专利]基因重组人胸腺素β4的制备方法-CN201210149956.9有效
发明人：侯增淼;高恩;李晓颖;李哲;赵金礼 -专利权人：西安华澳丽康生物工程有限公司
申请日： 2012-05-07 - 公布日： 2012-09-12 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：一种基因重组人胸腺素β4的制备方法，包括基因的获得、载体pPIC9K与I型人胶原蛋白和毕赤酵母电转化人胸腺素β4的连接、多拷贝插入重组子的筛选、基因重组人胸腺素β4融合蛋白毕赤酵母发酵、基因重组人胸腺素β4的纯化步骤。本发明利用人I型人胶原蛋白在毕赤酵母的高表达特性引导人胸腺素β4在毕赤酵母中稳定高效表达。在融合蛋白的I型人胶原蛋白前导肽与人胸腺素β4之间引入肠激酶切位点，避免了人胸腺素β4因为分子量较小，表达、纯化过程中所遇到的难题，增加了表达量，简化了纯化程序，提高了产品的提取纯化效率，可用于制备基因重组人胸腺素
基因重组胸腺制备方法

[发明专利]乙型肝炎疫苗及其生产方法-CN202310082311.6在审
发明人：邹烨宁;赵冉;白迅;孟凡红;董高峰;张立志;薛晨宝;李研;胡雅灵;高强;尹卫东 -专利权人：北京科兴中维生物技术有限公司
申请日： 2023-01-19 - 公布日： 2023-06-02 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本公开涉及一种诱导乙肝表面抗原表达的方法、乙肝表面抗原纯化的方法、生产乙型肝炎疫苗的方法和乙型肝炎疫苗。该诱导乙肝表面抗原表达的方法：将表达乙肝表面抗原的酵母进行三级发酵至OD600为100～200时，添加甲醇，诱导乙肝表面抗原表达，收获发酵产物。乙肝表面抗原纯化的方法包括：采用PEG沉降及硅胶吸附对发酵产物初步纯化，得到杂蛋白较少的粗纯液，再通过阴离子交换和凝胶过滤层析进一步纯化获得抗原提取物，并通过硫酸铝钾溶液在位吸附，获得体外效价高的乙肝疫苗本公开提供的诱导乙肝表面抗原的方法能够提高乙肝表面抗原的产量；对乙肝抗原的纯化的方法，提高了抗原回收率，缩短了生产时间，有利于工艺放大生产。
乙型肝炎疫苗及其生产方法

[发明专利]装甲RNA病毒样颗粒表达后菌体的裂解试剂、纯化试剂及其应用-CN201610397829.9有效
发明人：张岩;盖伟;单万水;邢婉丽;张春涛;宋翠丹;周海卫;程京 -专利权人：博奥生物集团有限公司;深圳市第三人民医院;中国食品药品检定研究院
申请日： 2016-06-07 - 公布日： 2020-01-03 - 主分类号： C12N7/04 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及装甲RNA病毒样颗粒表达后菌体的裂解试剂、纯化试剂及其应用。本发明提供的试剂包括超声试剂和纯化试剂，超声试剂用于表达后菌体的重悬和超声破碎，纯化试剂用于破碎后释放的装甲RNA病毒样颗粒的超滤纯化。实验表明，采用本发明提供的超声试剂和纯化试剂对装甲RNA病毒样颗粒局具有良好的纯化效果，所得装甲RNA病毒样颗粒进行RT‑PCR表现出良好的扩增曲线，进行PCR则未见非特异性扩增。
装甲 rna 病毒颗粒表达菌体裂解试剂纯化及其应用

[发明专利]一种便于外源蛋白纯化的原核表达载体及构建方法-CN201010585352.X无效
发明人：孙怀昌;朱善元;张鑫宇;王健;刘文俊;夏晓莉 -专利权人：扬州大学
申请日： 2010-12-13 - 公布日： 2011-06-01 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明涉及一种便于外源蛋白纯化的原核表达载体及构建方法。所说的天表达载体结构如图1所示，它是在载体pET30a基础上，插入多克隆位点及Mxe-ELP基因序列，构建而成。将欲表达得外源蛋白编码基因插入多克隆位点，转化感受态宿主细胞，诱导表达后，利用弹性蛋白样多肽的生物学特点，再借助内含肽MxeGyrA在硫醇存在条件下能自我切割特点，从而分离、纯化出表达的外源蛋白。该表达系统与其他原核表达系统相比，避免使用价格昂贵的层析技术，且操作简单易行，在蛋白生产领域有着极其明显的优势，特别适用于可溶性蛋白的表达纯化。
一种便于蛋白纯化表达载体构建方法

[发明专利]一种表达蛇毒激肽原酶的基因工程菌、其构建方法及应用-CN201210152991.6无效
发明人：罗云波;许文涛;黄昆仑;马骉;张雅楠;宋梦薇;王云鹏 -专利权人：中国农业大学;北京赛升药业股份有限公司
申请日： 2012-05-16 - 公布日： 2012-12-26 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供了一种高效表达重组蛇毒激肽原酶的基因工程菌，其是通过反转录克隆了江浙蝮蛇中的蛇毒激肽原酶基因，构建原核重组表达质粒pET30a/蛇毒激肽原酶基因(pET30a/VK)，转入到大肠杆菌中，从中筛选出高效分泌表达的菌株该表达系统所表达的外源蛋白的N端具有His蛋白标签，通过Ni柱洗脱的方法进行纯化，极大地简化了重组蛋白的后续纯化工作，获得的重组蛋白纯度高达90％以上，且纯化效率高、成本低，适合目的蛋白的大规模制备。
一种表达蛇毒激肽原基因工程构建方法应用

[发明专利]蚕类蜕皮激素受体EcR/USP蛋白复合物的表达及纯化的方法-CN201510224941.8在审
发明人：吴桃利;王涛;汪俊;陈春麟 -专利权人：中国药科大学;上海美迪西生物医药有限公司
申请日： 2015-05-05 - 公布日： 2016-12-07 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及蚕类蜕皮激素受体EcR/USP蛋白复合物的表达及纯化的方法，包括以下步骤：构建USP-pET-28a(+)重组载体和EcR-pET21b-MDX12重组载体；将所述USP-pET-28a(+)重组载体和EcR-pET21b-MDX12重组载体转化表达菌，培养，诱导表达重组目的蛋白复合物；将所得的重组目的蛋白复合物经镍离子亲和层析及分子筛层析进行纯化。本发明通过构建重组表达载体EcR-pET21b-MDX12、USP-pET-28a(+)，将两个载体进行共转，诱导两种蛋白的共表达，从而得到大量的重组目的蛋白复合物，然后经镍离子亲和层析柱和分子筛分离纯化可以得到纯度较高的目的蛋白
蜕皮激素受体 ecr usp 蛋白复合物表达纯化方法

[发明专利]一种二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达和纯化方法-CN201710324938.2有效
发明人：张吉;刘涛;孙铮 -专利权人：张吉
申请日： 2017-05-10 - 公布日： 2019-11-05 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达和纯化方法，属于蛋白分子的表达和纯化领域。本发明主要包括以下步骤:克隆大肠杆菌的lpdA基因；构建重组表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中；通过抗性筛选，得到高水平表达的大肠杆菌转化子；转化子在摇瓶中扩大培养后，把破菌液上清用羟基磷灰石层析柱纯化得本发明具有表达稳定、操作简便、成本低、效率高的优点，特别是通过此种方式获得的LPD蛋白不含任何的标签，很好地保持了目的蛋白的天然构象和活性，能为LPD蛋白研究提供优质材料。
一种二氢硫辛酸脱氢酶 lpd 表达纯化方法

[发明专利]寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体及构建及应用-CN201611230404.5有效
发明人：杨海涛;李婷;杨霄云;王泽方;陈成;李瑞 -专利权人：天津大学
申请日： 2016-12-27 - 公布日： 2020-03-17 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体及构建及应用，寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体MBP‑ZIKV_capcid_pET22b中所述MBP‑ZIKV_capcid的核苷酸序列用SEQ ID本发明利用MBP基因与寨卡病毒衣壳蛋白基因进行刚性融合能在体外大量表达和纯化寨卡病毒衣壳蛋白，寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体转化到宿主细胞后，克服了现有技术寨卡病毒衣壳蛋白单个蛋白的蛋白表达水平低和蛋白高聚的问题，蛋白溶解度提高﹑使蛋白纯化容易，能高效获得寨卡病毒衣壳蛋白，为纯化该蛋白及其相关种属蛋白提供了新技术，可用于医疗检测和生物学功能实验相关产品的开发。
病毒蛋白刚性融合表达载体构建应用

[发明专利]具有预防治疗动脉粥样硬化作用的重组蛋白表达与纯化-CN200910187943.9有效
发明人：刘庆平;迟彦;李文哲;张英彪 -专利权人：大连大学
申请日： 2009-10-15 - 公布日： 2010-07-14 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及人源重组蛋白的表达和纯化，具体涉及到一种具有预防治疗动脉粥样硬化作用的重组蛋白表达与纯化。通过设计一对上下游引物在已保存有β2-GPI基因片段的T载体上进行Polymerase Chain Reaction(PCR)反应扩增得到β2-GPI Domain V基因片段，并克隆到表达载体pET-32a-c(+)上，构建表达载体pET32a-DV，并将其转化至大肠杆菌rosetta-gami表达菌，然后经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达，并通过镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白，western blot方法验证重组蛋白β2-GPI Domain V表达，TLC-配体实验验证重组表达β2-GPI Domain V蛋白活性，ELISA竞争性抑制试验验证重组表达β2-GPIdomain
具有预防治疗动脉粥样硬化作用重组蛋白表达纯化

[发明专利]中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法-CN201911059553.3有效
发明人：周克夫;孟坤;龙敏 -专利权人：厦门大学
申请日： 2019-11-01 - 公布日： 2021-08-17 - 主分类号： C07K14/46 文献下载
摘要：中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法，涉及融合蛋白表达纯化方法技术领域，提供一种基于中华乌塘鳢卵黄蛋白原基因，克隆其部分基因并体外重组质粒，转入大肠杆菌进行原核表达，IPTG诱导温度为16℃条件下获得高效融合表达，并且表达目的蛋白以可溶性状态存在，目的蛋白占细菌可溶性蛋白总量25％以上。应用纯化技术获得融合蛋白MNP‑VTG，通过蔗糖酶酶切将标签MNP从融合蛋白中分离获得目的蛋白VTG单体。该方法表达高效纯化VTG简便，因是可溶性，分离比包涵体简单，无需复性。
中华乌塘鳢卵黄蛋白重组表达纯化方法

[发明专利]一种前体蛋白Kex2过表达毕赤酵母菌株及其构建方法-CN201811177983.0在审
发明人：黄义德;林尧;龙彦宇 -专利权人：福建师范大学
申请日： 2018-10-10 - 公布日： 2019-11-12 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及一种前体蛋白Kex2过表达毕赤酵母菌株及其构建方法。其特征是设计PCR上游引物和下游引物，在进行Kex2基因克隆，用EcoR I限制酶分别对回收纯化后的Kex2基因和pGAPZB表达质粒进行酶切，酶切后用DNA胶纯化回收试剂盒分别纯化酶切后的Kex2基因和线性化的pGAPZB表达质粒，然后利用T4连接酶将Kex2基因连接到pGAPZB表达质粒上得到转化子，将转化子连接产物转化大肠杆菌TOP 10中得到Kex2过表达毕赤酵母菌株；本发明构建的前体蛋白的Kex2过表达毕赤酵母菌株
毕赤酵母菌株前体蛋白表达质粒构建转化子酶切大肠杆菌毕赤酵母基因克隆基因连接加工效率连接产物上游引物下游引物回收基因纯化酶胶纯化试剂盒限制酶线性化转化加工改造

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