本发明属于细菌性抗原技术领域，公开了一种铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白rePilA‑FliC及制备方法和应用，所述铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白rePilA‑FliC的核苷酸序列为SEQ ID NO:1；氨基酸序列为SEQ ID NO:2；重组表达载体包含核苷酸序列SEQ ID NO:1。本发明采用pGEX‑6p‑2载体来构建重组表达质粒，表达重组蛋白rePilA‑FliC，pGEX是表达融合蛋白的载体，所表达的融合蛋白中含有一个蛋白纯化的GST标签。与其他融合载体相比，pGEX系列载体具有纯化条件温和、步骤简单、不需要变性剂的加入，从而使纯化后的蛋白能最大限度保持其空间构象和免疫原性。
本发明公开了一种SalI限制性内切酶的制备方法，包括以下步骤：一、合成SalIM和SalI的编码基因，分别如SEQ ID NO.1所示和SEQ ID NO.2所示，分别构建至相应载体中，获得带有SalIM基因的重组载体和融合了纯化标签的SalI蛋白表达质粒；二、将带有SalIM基因的重组载体转入大肠杆菌中，获得具备基底SalIM表达的重组菌，保护基因组DNA不被SalI内切酶切割，使大肠杆菌能够继续正常生长增殖，从而提高SalI的表达量。三、制作成具备基底SalIM表达的重组菌感受态细胞；四、将融合了纯化标签的SalI蛋白表达质粒转入具备基底SalIM表达的重组菌感受态细胞中，获得阳性单克隆，培养进行SalI限制性内切酶的表达；五、SalI限制性内切酶的纯化。
本发明涉及一种修饰信号多肽ComX及其原核表达与纯化方法。所述多肽ComX的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述编码多肽ComX的comX基因序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还提供一种含有comX基因的重组载体，同时提供一种ComX原核表达菌株及其制备方法，并提供了一种所述ComX原核表达菌株表达所得修饰信号多肽ComX的纯化方法。本发明采用的大肠杆菌表达系统，同时表达了修饰酶ComQ及目标信号多肽ComX，获得了人工合成困难的修饰信号多肽ComX，具有表达效率高、成本低、易操作等特点，所获得的ComX成熟肽方便纯化，且纯度高、产率高
