本发明属于酶工程技术领域,具体为一种转氨酶突变体及其应用和酶催化方法。本发明的转氨酶突变体是对SEQ ID No:1所示转氨酶的第284位的甘氨酸替换为其它脂肪族氨基酸得到。本发明还涉及所述转氨酶的编码基因与载体构建而成的重组载体,以及所述重组载体转化宿主细胞而得到的重组基因工程菌。所述转氨酶突变体、重组载体、重组基因工程菌可用于催化含有苄氧基的酮类底物与氨基供体反应生成转氨产物,并具有高的催化反应能力,能提高转化率和所得到的手性转氨产物的ee值。
本发明涉及生物医药领域,公开了一种葡萄糖基转移酶突变体及其编码基因、重组载体、重组菌株和酶制剂以及它们的应用。该葡萄糖基转移酶突变体为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的R位进行点突变,并在其N端添加4‑8个组氨酸。制备天麻素的方法包括以下步骤:将葡萄糖基转移酶突变体与对羟基苯甲醇、二磷酸尿苷葡糖接触。本发明提供的葡萄糖基转移酶突变体,对于底物对羟基苯甲醇的特异性较高,进而使得对羟基苯甲醇转化成天麻素的转化率明显提高,具有较好的工业应用前景。
本发明公开了一类提高β‑烟酰胺单核苷酸产量的突变体,其编码基因、氨基酸序列及其应用,此类突变体包括突变体Nampt1、PnuC2和/或NiaP1;所述突变体Nampt1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示;所述突变体PnuC2的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示;所述突变体NiaP1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示;利用本发明得到的重组菌体能够提高NMN的生产能力,所述生产过程易于放大,且该方法获得NMN含量达到26.25g/L;利用本发明所设计的突变体的组合能够使各个基因最大限度地发挥各自的能力,最佳组合提高5.7倍,生产耗时缩短35%。所述重组菌体在食品、医药、化妆品领域的应用。
本发明公开了一种PpUGT7重组蛋白、上述PpUGT7重组蛋白的表达基因、表达盒、重组载体、宿主菌以及应用。PpUGT7重组蛋白包括由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的多肽。结合具体实施例,本发明的这种PpUGT7重组蛋白对于延龄草苷具有催化能力,实现其糖基化反应,生成延龄草苷‑6’‑O‑葡萄糖苷,为甾体皂苷的糖基化研究奠定了基础,为甾体皂苷活性机制形成研究提供了理论支持。本发明首次克隆并验证了PpUGT7重组蛋白的糖基转移酶功能,在体外酶催化反应中PpUGT7重组蛋白能够催化延龄草苷生成延龄草苷‑6’‑O‑葡萄糖苷。
本发明公开了一种转氨酶及其在制备光学纯手性胺中的应用,包括一种转氨酶,所述转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,或所述转氨酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:2相比,具有第67位、第139位、第185位、以及第195位氨基酸突变中的一种或多种,所述突变为氨基酸残基的取代。本发明通过设计生物酶催化法利用转氨酶,通过动力学拆分消旋胺,或者通过酮的不对称合成生成手性胺,与传统的化学合成方法相比,酶法具有反应效率高、立体选择性好、反应条件温和、低能耗、环境友好等优点,通过在工业化制备光学纯手性胺的生产过程中,从而使得本发明提供的光学纯手性胺的制备方法,具有高的反应效率、立体选择性以及收率。