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[发明专利]异源表达和纯化人类葡萄糖转运蛋白家族成员GLUT1、GLUT2、GLUT3的方法-CN200810069723.1无效
发明人：胡宗利;杨妤欣;陈国平;陈绪清;王翊;刘志昭 -专利权人：重庆大学
申请日： 2008-05-22 - 公布日： 2008-10-15 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种异源表达和纯化人细胞膜上葡萄糖转运蛋白家族成员GLUT1、GLUT2、GLUT3的方法，其步骤为：构建诱导型融合蛋白表达载体GST－GLUT1、GST－GLUT2、GST－GLUT3并转化裂殖酵母；鉴定裂殖酵母转化子；GST－GLUT1、GST－GLUT2、GST－GLUT3三种融合蛋白在裂殖酵母中的诱导表达；确认GLUT1、GLUT2、GLUT3基因在裂殖酵母中得到表达；分离和纯化上述三种融合蛋白；检测和鉴定分离纯化的上述三种融合蛋白；从上述三种融合蛋白中的分别分离和纯化人类GLUT1、GLUT2、GLUT3蛋白。本发明的方法可以应用于在裂殖酵母中表达高等动植物的膜蛋白，并且获得的蛋白质具有翻译后的修饰作用和生物活性。
表达纯化人类葡萄糖转运蛋白家族成员 glut1 glut2 glut3 方法

[发明专利]一种标记β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法-CN201810377374.3在审
发明人：咸涛 -专利权人：江苏诺鬲生物科技有限公司
申请日： 2018-04-25 - 公布日： 2018-09-14 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种标记β‑D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其中包括载体系统的转化及对表达菌株的优化诱导，少量试验后对高表达菌株筛选培养，进行大量的蛋白纯化合成洗脱。本发明产品通过构建好的表达载体转化到表达菌株内，筛选菌落并进行PCR测序验证，得到阳性菌株，进行少量预实验后，同时进行SDS‑PAGE,确认目的蛋白的表达，筛选出高表达菌株，随后对该高表达菌株进行大量培养，再进一步进行大量蛋白纯化，该结合蛋白能够有效与真菌细胞壁成份β‑D葡聚糖进行免疫亲和，准确标记真菌表面β‑D葡聚糖抗原。
葡聚糖结合蛋白高表达表达菌株蛋白纯化合成菌株筛选真菌细胞壁表达载体菌株筛选免疫亲和目的蛋白阳性菌株载体系统准确标记菌落抗原真菌构建洗脱转化诱导验证试验优化

[发明专利]一种基于ELP-Intein和ccdB的高效质粒载体及其使用方法-CN202110185156.1在审
发明人：安迎锋;高何瑞;高嵩;王虹玲;张艺峰;许淑敏;邵一伦;杨尧;王潘;汤静怡;李少荣 -专利权人：沈阳农业大学
申请日： 2021-02-10 - 公布日： 2021-05-28 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程领域，具体的说是一种基于ELP‑Intein和ccdB的高效质粒载体及其使用方法。同时，该质粒载体含有T7启动子和终止子，并具有ELP‑Intein表达盒，可以高效地表达外源蛋白，还可用基于Intein自我切割的ELP标签和His‑tag标签双纯化法进行蛋白纯化。同时，将基于尿素的变性‑复性循环与基于ELP标签的纯化步骤相结合，可以有效的实现不溶性蛋白的纯化。本质粒载体的灵活克隆功能、高效表达功能、双纯化功能，特别是对于不溶性蛋白包涵体的纯化功能，将使得该载体及相应使用方法在基因工程领域具有广泛的应用前景。
一种基于 elp intein ccdb 高效质粒载体及其使用方法

[发明专利]重组人甲状旁腺素(1～34肽)的串联表达方法-CN200610030690.0无效
发明人：黄阳滨;孙九如;张翊;任军;梁光军;邱燕 -专利权人：上海新生源医药研究有限公司;上海新生源生物医药有限公司
申请日： 2006-08-31 - 公布日： 2008-03-05 - 主分类号： C12N15/16 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组人甲状旁腺素的核苷酸序列，通过串连表达高效生产重组人甲状旁腺素的生产方法，以及有关的工程细胞构建、表达和纯化的工艺。优化后的重组人甲状旁腺素蛋白基因，非常适合在原核细胞进行串连表达，同时通过发酵与纯化工艺优化，提高了表达量，具有高表达、高稳定的优点。本发明可高效、简便、低成本的获得重组人甲状旁腺素纯品。
重组甲状旁腺素 34 串联表达方法

[发明专利]一种敬钊毒素蛋白的高效表达及分离纯化方法-CN201710732641.X在审
发明人：霍林巨;罗玉娇;张常昕;夏艳冬;司品法;张允雷;刘一佑;金伟;雷兰婷 -专利权人：湖南甲骨文生物医药有限公司
申请日： 2017-08-23 - 公布日： 2017-12-15 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种敬钊缨毛蛛粗毒中活性多肽JZTX‑58的高效表达系统与分离纯化方法。本发明通过基因工程技术，采用表达质粒pVT102U/α和酿酒酵母S78菌株构成的真核表达系统，经过分离纯化、质谱分析鉴定成功表达得到敬钊毒素‑58(JZTX‑58)蛋白质，解决了直接从敬钊缨毛蛛粗毒中分离纯化而很难得到足量毒素来进行功能研究的难题
一种毒素蛋白高效表达分离纯化方法

[发明专利]一种生产重组亚硝酸盐还原酶的方法-CN202011636221.X在审
发明人：方国康;汪本助;王舒;徐斌 -专利权人：安徽丰原发酵技术工程研究有限公司
申请日： 2020-12-31 - 公布日： 2021-07-23 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及亚硝酸盐还原酶的重组表达载体、具有所述重组表达载体的宿主细胞以及生产重组亚硝酸盐还原酶的方法。本发明通过设计表达载体，实现重亚硝酸盐还原酶的高效表达，再采用优化的纯化方法对目标蛋白进行提纯，大幅缩短了目标蛋白的纯化流程与纯化时间，同时提高了目标蛋白的纯度、得率和酶活，节省实验步骤并减少成本。
一种生产重组亚硝酸盐还原酶方法

[发明专利]基因工程制备人白细胞介素4的方法及其表达载体和工程菌-CN01105968.0无效
发明人：王建莉 -专利权人：上海华康生物技术有限公司
申请日： 2001-04-12 - 公布日： 2004-06-02 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种表达基因工程人白细胞介素4(rhIL-4)的表达载体pK223-3m-hIL-4，还公开了用该表达载体转化的大肠杆菌DH5α，以及用上述表达载体和/或宿主细胞发酵表达、纯化人基因工程白细胞介素用本发明可的表达载体及工程菌可高获得IL-4的高表达，并通过复性及纯化获得人IL-4纯品，且获得的基因工程IL-4比活性高。
基因工程制备白细胞方法及其表达载体工程

[发明专利]一种表达蛇毒激肽原酶的高效麦胚无细胞蛋白合成系统的建立及应用-CN201210153576.2无效
发明人：罗云波;许文涛;黄昆仑;马骉;王云鹏;宋梦薇;张雅楠 -专利权人：中国农业大学;北京赛升药业股份有限公司
申请日： 2012-05-16 - 公布日： 2012-10-17 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明建立了一个用来高效表达重组蛇毒激肽原酶的麦胚无细胞蛋白合成系统，其是通过反转录克隆了江浙蝮蛇中的蛇毒激肽原酶基因，构建麦胚无细胞表达质粒pCS2+/VK，制备麦胚抽提物，建立体外转录和翻译体系，对蛇毒激肽原酶进行表达并对系统进行了优化该表达系统所表达的外源蛋白的N端具有His蛋白标签，通过Ni柱洗脱的方法进行纯化，极大地简化了重组蛋白的后续纯化工作，且纯化效率高、成本低。该外源蛋白还具有生物学活性为下一步临床研究奠定了基础。
一种表达蛇毒激肽原高效麦胚无细胞蛋白合成系统建立应用

[发明专利]一种针对高血压的药物靶点表达和纯化方法-CN202010911659.8在审
发明人：张进;李健;万双燕 -专利权人：深圳晶蛋生物医药科技有限公司
申请日： 2020-09-02 - 公布日： 2020-11-20 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种针对高血压的药物靶点表达和纯化方法。本发明提供了一种针对高血压的药物靶点表达和纯化方法，包括如下步骤：将人全长TRPM4基因片段克隆到pAntigen Mem载体，筛选阳性克隆；提取质粒，转化感受态DH10菌株，挑选阳性克隆；抽提杆粒，在杆状病毒表达系统中产生P3杆状病毒；将P3杆状病毒转导入HEK293S GnTI‑细胞，诱导表达，收集纯化药物靶点。之后，根据针对高血压的TRPM4药物靶点，有利于相应的特异性小分子抑制剂和相关抗体的设计，以用于高血压等心血管疾病的治疗。本申请所述的针对高血压的药物靶点表达和纯化方法能生产具有正常生理活性，产量达毫克级别的针对高血压的药物靶点，促进相应的相关抗体研发。
一种针对高血压药物表达纯化方法

[发明专利]纤维素结合域在棒状杆菌分泌表达系统中的应用-CN201310045414.1无效
发明人：赵志敬;蒋欢;胡广 -专利权人：北大工学院绍兴技术研究院
申请日： 2013-01-28 - 公布日： 2014-08-06 - 主分类号： C12N15/77 文献下载
摘要：本发明属于蛋白表达纯化技术领域，具体是利用里氏木霉的纤维素结合域作为亲和标签，在棒状杆菌表达系统中进行分泌表达和纯化重组蛋白的方法。所述方法包括以下步骤：1)优化并合成编码里氏木霉糖苷水解酶I的纤维素结合域(CBD)的密码子序列；2)将步骤1合成的序列作为蛋白标签序列克隆至棒状杆菌分泌表达载体；3)将目的蛋白序列插入到步骤2获得的标签载体；4)将步骤3获得的重组载体转化至棒状杆菌中进行蛋白的分泌表达；5)以CBD为亲和标签，利用纤维素柱纯化该重组菌分泌的重组蛋白。该方法不需菌体破碎，直接利用低成本的纤维素柱填料对诱导后的培养基进行蛋白纯化，从而降低蛋白的生产成本。
纤维素结合杆菌分泌表达系统中的应用

[发明专利]一种制备重组人源血管内皮生长因子VEGF165的方法-CN201310283384.8有效
发明人：钱永常 -专利权人：杭州纽龙日尚生物制品有限公司
申请日： 2013-07-04 - 公布日： 2017-02-08 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及制备重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165蛋白质的方法，包括步骤①构建用于表达不带标签的重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165的表达载体，②通过表达系统表达重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165，③分离和用阴离子交换柱纯化重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165。本发明还涉及用于上述方法制备的重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165蛋白质的复性方法和纯化方法。本发明所获得的rh‑VEGF165不含任何纯化标签同时也避免了使用肠激酶切除6×His‑Tag及后续从rh‑VEGF165中纯化去除6×His‑Tag标签和肠激酶的步骤，大大简化了rh‑VEGF165的纯化工艺
一种制备重组血管内皮生长因子 vegf165 方法

[发明专利]铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白reFPO及制备方法和应用-CN201911385096.7有效
发明人：郭刚;冯强;张欣;吴翼;熊蜂;罗莉;张娇娇;杨念 -专利权人：重庆艾力彼生物科技有限公司
申请日： 2019-12-28 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明属于细菌性抗原技术领域，公开了一种铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白reFPO及制备方法和应用，所述铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白reFPO的核苷酸序列为SEQ ID NO:1；氨基酸序列为SEQ ID NO:2；重组表达载体包含核苷酸序列SEQ ID NO:1。本发明采用pGEX‑6p‑1载体来构建重组表达质粒，表达重组蛋白reFPO，pGEX是表达融合蛋白的载体，所表达的融合蛋白中含有一个蛋白纯化的GST标签。与其他融合载体相比，pGEX系列载体具有纯化条件温和、步骤简单、不需要变性剂的加入，从而使纯化后的蛋白能最大限度保持其空间构象和免疫原性。
铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白 refpo 制备方法应用

[发明专利]一种膜联蛋白V与内皮抑素融合蛋白的制备方法和应用-CN202210444447.2在审
发明人：华子春;朱宇阳 -专利权人：南京吉芮康生物科技研究院有限公司;中国药科大学
申请日： 2022-04-26 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种膜联蛋白V‑内皮抑素融合蛋白的制备方法和应用，本发明的构建方法，包括如下步骤：(1)构建膜联蛋白V与内皮抑素融合蛋白基因的质粒；(2)获得膜联蛋白V与内皮抑素融合蛋白可溶性表达的表达菌株；(3)表达和纯化膜联蛋白V与内皮抑素融合蛋白。本发明利用膜联蛋白V与内皮抑素的融合表达，获得了融合蛋白的可溶性表达，建立了可溶性表达的融合蛋白的分离纯化工艺，融合蛋白具有显著的协同效果。
一种蛋白内皮融合制备方法应用

[发明专利]一种重组蛋白及其表达方法、纯化方法及用途-CN202011580950.8在审
发明人：朱传凤;瓦晓霞;马超;李雄雄;傅生芳;王婉 -专利权人：兰州生物制品研究所有限责任公司
申请日： 2020-12-28 - 公布日： 2022-07-01 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组蛋白及其表达方法、纯化方法及用途。所述重组蛋白的表达方法包括：1)RSV‑F编码片段的扩增；2)根据扩增后的RSV‑F编码片段构建包含F蛋白的亚克隆质粒；3)根据所述亚克隆质粒构建RSV‑F的真核表达质粒；4)转染所述RSV‑F的真核表达质粒于所述重组蛋白的纯化经阴离子交换柱纯化、阳离子交换柱纯化以及凝胶过滤色谱柱纯化。纯化后的RSV‑F重组蛋白，具有免疫原性，可用于RSV亚单位疫苗的研发或者RSV感染的免疫诊断。
一种重组蛋白及其表达方法纯化用途

[发明专利]一种ELP融合蛋白及其应用-CN200910141889.4无效
发明人：徐安龙;蓝东明;黄光瑞;王磊;陈尚武 -专利权人：中山大学
申请日： 2009-05-21 - 公布日： 2010-01-27 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种含ELP的融合蛋白以及相关的一系列应用，包括一种无标签的重组蛋白的表达纯化的方法、一种无标签的重组蛋白、一种表达纯化含ELP的融合蛋白的方法、一种用于蛋白表达纯化的试剂盒、一种具有固定化酶特性的可循环利用的酶以及一种利用包含ELP的蛋白酶进行循环酶切纯化的方法，本发明利用ELP所具有的反温度相变的特性，解决了蛋白表达量低或形成不可溶包含体的问题，而且在蛋白纯化中不需要利用复杂的纯化操作。
一种 elp 融合蛋白及其应用

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