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[发明专利]一种重组人成纤维细胞生长因子21融合蛋白的表达和纯化方法-CN201610036535.3在审
发明人：鲁帅尧;张莹;李鸿钧;马开利;陈瑜;和占龙;吴正存;马进;胡婧雯;柳光龙 -专利权人：中国医学科学院医学生物学研究所
申请日： 2016-01-20 - 公布日： 2016-04-20 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供一种含有重组人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)融合蛋白的表达和纯化方法，表达过程，所述融合蛋白为GST蛋白与重组人成纤维细胞生长因子21融合蛋白，构建成带GST标签质粒后转入BL21，IPTG诱导表达，以包涵体形式大量表达，纯化以离子交换层析柱和GST亲和柱两步，得到量大且纯度高的蛋白。本发明的有益效果是选用GST系统表达hFGF21蛋白，通过诱导条件的优化大幅度提高了蛋白表达量；经过离子交换柱层析纯化和GST亲和柱二次纯化，不仅可尽量减小蛋白的损失，还可有效提高蛋白纯度；对hFGF21
一种重组纤维细胞生长因子 21 融合蛋白表达纯化方法

[发明专利]基因重组制备人肌红蛋白的方法-CN02110359.3无效
发明人：王桂琴;陈明;史沁卫 -专利权人：王桂琴;陈明;史沁卫
申请日： 2002-04-27 - 公布日： 2004-08-04 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明为基因重组制备人肌红蛋白的方法，包括RT-PCR技术制备人肌红蛋白基因的过程、重组表达质粒的构建过程、重组表达质粒导入宿主大肠杆菌、纯化的目的基因在转化体表达的过程和表达产物纯化鉴定的过程，重组表达质粒所用的质粒为该方法在插入基因片段两端设计了双酶切位点的人工接头，保证了正确的插入方向，使重组表达质粒的构建可一次完成，操作更快速、方便、简单，相对现有技术大大缩短了制备生产的时间；表达产物正确、特异、稳定、高效，纯化的人肌红蛋白能与抗人肌红蛋白单抗特异反应，证明纯化产物保持了其天然活性，因而，本发明为制备人肌红蛋白及其单抗奠定了基础。
基因重组制备肌红蛋白方法

[发明专利]一种牙龈卟啉单胞菌PgPPX的表达纯化方法及制备得到的PgPPX-CN201910121851.4在审
发明人：张爱莉;卢作焜 -专利权人：许昌学院
申请日： 2019-02-18 - 公布日： 2019-05-10 - 主分类号： C12N9/14 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种牙龈卟啉单胞菌PgPPX的表达纯化方法及制备得到的PgPPX。PgPPX的表达纯化方法包括如下步骤：(1)设计引物，将目的基因构建在大肠杆菌表达载体pGEx‑6p‑1上得到重组载体；(2)将上述构建好的重组载体转化到大肠杆菌高效表达菌株BL21(DE3)中，得到重组工程菌；(3)使所述重组工程菌在LB液体培养基中振荡培养，利用IPTG诱导表达蛋白，离心收集菌体，超声波破碎细胞，纯化目的蛋白PgPPX。采用上述PgPPX的表达纯化方法每升LB培养基的PgPPX蛋白表达量高达20～30mg。
牙龈卟啉单胞菌重组工程菌重组载体构建制备超声波破碎细胞大肠杆菌表达高效表达菌株基因工程技术离心收集菌体大肠杆菌蛋白表达量表达蛋白目的蛋白目的基因设计引物载体pGEx 振荡培养转化

[发明专利]一种己糖激酶的制备方法-CN202111319332.2在审
发明人：罗漫杰;宫安;王梁;施婧妮;徐灿;彭晶 -专利权人：武汉瀚海新酶生物科技有限公司
申请日： 2021-11-09 - 公布日： 2021-12-28 - 主分类号： C12N9/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种己糖激酶表达及纯化方法，包括己糖激酶基因的克隆与分子构建、重组表达菌株的构建、重组己糖激酶的诱导表达、纯化与活力检测方法和己糖激酶高密度发酵放大等步骤。本发明第一次从酿酒酵母中克隆己糖激酶基因重组在大肠杆菌中表达，大大的提高了蛋白表达量和降低了蛋白纯化的难度，极大地简化了己糖激酶生产工艺；在实现己糖激酶的高效稳定表达的同时，通过优化诱导温度、诱导剂浓度、和诱导添加Mg2+浓度等提高了己糖激酶的蛋白比活力。
一种激酶制备方法

[其他]疫苗-CN87101287无效
发明人：加里·斯图尔特·科邦;乔安娜·特里·穆尔;罗·安东尼·约克·庄士顿;彼得·威拉德逊;戴维·哈罗德·肯普;亚拉加康·斯里斯康发;乔治·阿尔费;雷德·赖丁;基思·诺曼·兰特 -专利权人：澳洲生物科技公司;联邦科学及工业研究组织
申请日： 1987-11-27 - 公布日： 1988-10-05 - 主分类号： C12N15/00 文献下载
摘要：本发明涉及得自蜱的抗原及其纯化。本发明还涉及编码这类抗原的基因及其克隆，和重组DNA分子的表达。此外，本发明描述了纯化的抗原和与这些纯化的抗原有相似生物学活性的重组体表达产物的应用，以提供保护牛免受蜱侵染的疫苗。
疫苗

[发明专利]SFTSV膜蛋白原核双表达载体构建方法-CN202210203258.6在审
发明人：刘苗苗 -专利权人：济宁医学院
申请日： 2022-03-03 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N15/64 文献下载
摘要：本发明公开了SFTSV膜蛋白原核双表达载体构建方法，具体包括以下步骤：步骤一、基因分析；步骤二、优化合成；步骤三、表达构建；步骤四、纯化测试；本发明涉及分子病毒学技术领域。该SFTSV膜蛋白原核双表达载体构建方法，通过将病毒膜蛋白的两个基因片段构建在一个双表达载体上，实现两个蛋白的同时表达，并且通过Strep标签和His标签联合纯化的方式进行目的蛋白的提纯，其中Strep标签适合需要产出更高纯度目标蛋白的实验，且可弥补His标签不适用的金属蛋白和复合蛋白的纯化实验，为表达载体的构建提供稳定保障，方便后期对两个蛋白分别进行纯化，为评估两个蛋白的功能提供了便利，为病毒的防治提供思路
sftsv 膜蛋白原核双表达载体构建方法

[发明专利]一种全能核酸酶的高密度发酵表达及分离纯化的方法-CN202210432924.3在审
发明人：谭鑫;茅缪伟;张长清;王小曼;张立俊 -专利权人：上海健启生物科技有限公司
申请日： 2022-04-24 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明涉及核酸酶加工技术领域，且公开了一种全能核酸酶的高密度发酵表达及分离纯化的方法，所述纯化方法包括以下步骤：S1、菌体构建，构建含全能核酸酶目的基因的质粒；S2、发酵表达；S3、发酵菌体预处理；S4、层析纯化，将含目的蛋白的上清液通过亲和层析纯化。该全能核酸酶的高密度发酵表达及分离纯化的方法，通过表达全能核酸酶的大肠杆菌发酵得到高表达量的分泌核酸酶，并采用层析纯化方法得到高纯度的全能核酸酶，由于在表达核酸酶的基因序列上添加6×His‑tag及SUMO‑tag
一种全能核酸酶高密度发酵表达分离纯化方法

[发明专利]一种ELP-Ⅲ型胶原蛋白的纯化方法及应用-CN202011286904.7在审
发明人：张杰 -专利权人：点斗基因科技（南京）有限公司
申请日： 2020-11-17 - 公布日： 2021-03-16 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种类弹性蛋白(Elastin‑like polypeptides，ELPs)和Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)的融合蛋白的纯化和复性的方法。本发明将类弹性蛋白标签ELP100与Ⅲ型胶原蛋白多肽基因连接到原核表达载体pRELPN上，构建成pRELPN‑CLP Ⅲ‑ELP100融合蛋白表达载体，该载体在BL21(DE3)大肠杆菌中高表达。由于该蛋白在大肠杆菌中以胞内包涵体的形式存在，所以我们采用包涵体纯化和复性的方法来对该融合蛋白进行纯化和复性，包括如下步骤：菌种的收集与破碎，洗除杂蛋白、脂质和核酸，蛋白精纯化，滴定稀释法复性，ITC纯化和MTT细胞法活性鉴定，本方法纯化得率高、方法简单，适合于大规模生产。
一种 elp 胶原蛋白纯化方法应用

[发明专利]一种重组人胰岛素原的生产方法-CN200510026290.8无效
发明人：孙九如;任军;黄阳滨;杜碧金;祈晖 -专利权人：上海新生源医药研究有限公司
申请日： 2005-05-30 - 公布日： 2006-12-06 - 主分类号： C12N15/17 文献下载
摘要：本发明提供了一种新型N－端前导序列的人胰岛素原分子(INS)，以及一种应用该胰岛素原分子高效生产人胰岛素原的生产方法，以及有关的表达载体与工程细胞构建、表达和纯化的工艺。将酵母α因子前导肽序列与本发明提供的新型人胰岛素原分子融合，导入一种酵母组成型表达载体，再转入毕赤酵母中实现组成型分泌表达，同时通过发酵与纯化工艺优化，提高了表达量和纯化得率，具有表达高、稳定性好、活性高
一种重组胰岛素生产方法

[发明专利]一种制备增强型单体细菌荧光素酶luxAB的方法-CN201310151132.X有效
发明人：沈锡辉;崔博宇;宋云洪;司美茹;王瑶 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2013-04-27 - 公布日： 2017-06-20 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备增强型单体细菌荧光素酶luxAB的方法，先获得目的基因；构建重组表达载体；获得含重组表达质粒的表达菌种；诱导靶蛋白的表达及蛋白的纯化；检测纯化的增强型单体细菌荧光素酶的活性。本发明利用融合型荧光素酶其独特的优势，将luxA和luxB基因异二聚体荧光素酶基因融合并经过易错PCR突变和化学随机突变，筛选得到9个荧光强度增强的突变体，然后经过shuffling技术，得到一个增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB，将其克隆到表达载体pET28a上，转化至BL21(DE3)菌株中表达，并用温和破碎法裂解细胞，纯化表达产物，得到增强型单体细菌荧光素酶，本发明的方法过程简单、生长周期短、成本低廉、易于纯化、
一种制备增强单体细菌荧光 luxab 方法

[发明专利]一种生产重组蛋白酶K的方法-CN202011639034.7在审
发明人：汪本助;徐斌;王舒 -专利权人：安徽丰原发酵技术工程研究有限公司
申请日： 2020-12-31 - 公布日： 2021-04-02 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及蛋白酶K的重组表达载体、具有所述重组表达载体的宿主细胞以及生产重组蛋白酶K的方法。本发明通过设计表达载体，实现重蛋白酶K的高效表达，再采用优化的纯化方法对目标蛋白进行提纯，大幅缩短了目标蛋白的纯化流程与纯化时间，同时提高了目标蛋白的纯度、得率和酶活，节省实验步骤并减少成本。
一种生产重组蛋白酶方法

[发明专利]免纯化的活性蛋白表达干燥方法及大规模蛋白突变体库筛选方法-CN202111069959.7在审
发明人：宋东亮;马海玲;江翱;陈晶晶;孙晓亮;曹振 -专利权人：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
申请日： 2021-09-13 - 公布日： 2021-12-24 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供一种免纯化的活性蛋白表达干燥方法，其步骤包括：构建重组蛋白的表达载体；将重组蛋白的表达载体转染到表达菌株中并培养，诱导表达重组蛋白；收集表达菌体，使用干燥剂去除菌体中水分，得到免纯化的活性蛋白本发明可以不经过纯化步骤即可获得高活性和稳定性的重组蛋白。这种工艺包括载体构建及转化、菌体培养、诱导表达、收集菌体和室温干燥几个步骤，具有成本低、蛋白活性好、稳定性高、操作简单、耗时短等优势，既适用于大规模蛋白工业化生产，也适用于大规模蛋白进化改造和理想突变体库的制备与筛选
纯化活性蛋白表达干燥方法大规模突变体筛选

[发明专利]重组SARS冠状病毒M蛋白的表达和纯化-CN03159428.X无效
发明人：姜卫红;张晓丽;王晶茹;谢幼华;汪垣;杨晟 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2003-09-17 - 公布日： 2005-03-23 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了重组SARS冠状病毒M蛋白的表达和纯化方法。本发明人将SARS冠状病毒M基因克隆到不同的菌体表达载体中表达。结果，M蛋白在大肠杆菌中得到高度表达，经亲和层析纯化得到重组SARS冠状病毒M蛋白，所表达的蛋白占菌体总量的26％。本发明表达的重组SARS冠状病毒M蛋白可用于SARS诊治、结构生物学研究和疫苗制备等。
重组 sars 冠状病毒蛋白表达纯化

[发明专利]一种限制性内切酶MnlI及其表达纯化方法-CN201910804225.5在审
发明人：程槐旭;胡梦竹;燕东平;聂尚海 -专利权人：莫纳（武汉）生物科技有限公司
申请日： 2019-08-28 - 公布日： 2019-11-12 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明提供了一种限制性内切酶MnlI及其表达纯化方法，所述方法包括以下步骤：构建限制性内切酶MnlI重组表达载体，转化甲基化感受态细胞，得限制性内切酶MnlI重组菌株，诱导培养，裂解菌体，纯化回收产物，表达纯化方式操作简单，快速，收率高，纯化出的限制性内切酶MnlI纯度高。
限制性内切酶重组表达载体感受态细胞回收产物诱导培养重组菌株甲基化构建菌体裂解收率转化

[发明专利]表达重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白基因的家蚕重组杆状病毒及其制备方法和应用-CN201310001030.X无效
发明人：张耀洲;南芙蓉;张浩;舒特俊;陈剑清 -专利权人：天津耀宇生物技术有限公司
申请日： 2013-01-04 - 公布日： 2013-06-05 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明涉及一种表达重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白基因的家蚕重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明通过将重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(rhTNFR-Fc)基因构建到家蚕杆状病毒表达系统中获得重组杆状病毒，从而高效表达目的蛋白，并纯化出目的融合蛋白rhTNFR-Fc。本发明通过家蚕杆状病毒表达系统可以高效表达并纯化出融合蛋白rhTNFR-Fc，平均每mL蚕血淋巴可纯化出0.17mg的目的融合蛋白。
表达重组肿瘤坏死因子受体 fc 融合蛋白基因家蚕杆状病毒及其制备方法应用