本发明公开了用于提高枯草芽孢杆菌自发突变频率的质粒。所述选自pUS20D9M,pUS20XP1以及pUS20XP2中的任意一个；其中，质粒pUS20D9M序列如SEQ ID NO.1所示，质粒pUS20XP1序列如SEQ ID NO.2所示，质粒pUS20XP2序列如SEQ ID NO.3所示。枯草杆菌是一种重要的微生物。很多育种工作需要提高枯草杆菌的基因突变频率。然而，目前尚缺乏理想的控制枯草杆菌自发突变频率的方法。本发明借助CRISPRi技术和过表达易错型DNA聚合酶的方法，提高宿主的自发突变频率(最高达5128倍)。整个操作可通过质粒的转化和消除实现，无需对宿主进行基因敲除。
本申请涉及烟酰胺核糖技术领域，具体涉及用于生物合成烟酰胺核糖的表达载体、菌株、方法及应用。该表达载体携带有外运蛋白MdtL的第一编码基因和磷酸核糖转移酶NAMPT的第二编码基因，所述第一编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述第二编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述表达载体被其宿主菌表达后于胞外分泌所述磷酸核糖转移酶，以催化烟酰胺向烟酰胺核糖的合成。转入了该表达载体的芽孢杆菌能于胞外表达磷酸核糖转移酶，而且其发酵产烟酰胺核糖的含量远高于在大肠杆菌中的生物合成量。
