本发明提供了一种靶向敲除人MC1R基因的sgRNA及其构建的细胞株。该sgRNA包括sgRNA1和sgRNA2，sgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，sgRNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的sgRNA能够精确指导Cas9蛋白靶向切割MC1R基因，采用该sgRNA构建获得的表达载体转录获得的mRNA电转细胞转化率高，极大提高了敲除MC1R基因的成功率，获得的A375细胞株能够稳定低表达黑素生成的相关蛋白，对于研究黑素生成及皮肤相关疾病治疗等有着十分重要的意义。
本发明提供了一种重组胶原蛋白、重组胶原海绵材料及其制备方法和应用。所述重组胶原蛋白的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列。所述重组胶原海绵材料是通过将所述重组胶原蛋白依次经过物理交联和化学交联后获得的；该重组胶原海绵材料的吸湿能力为40～50，孔隙率为90％以上。本发明重组胶原海绵材料具有止血、创面修复、吸湿和血小板聚集能力，其吸湿性高、止血效果显著、生物相容性佳，在外科领域中具有重要得临床意义。
本发明公开了一类含天冬酰胺或谷氨酰胺的环二肽的合成方法，该方法是以Fmoc‑L‑Glu‑OTrt或Fmoc‑L‑Asp‑OTrt为起始原料，以其侧链羧基连接固相载体RinkAmide AM Resin，以Fmoc‑L‑AA(X)‑OH(AA指α‑氨基酸，X为α‑氨基酸的侧链保护基)为连接的第二个氨基酸，完成连接后，用哌啶/DMF脱掉Fmoc保护基，用三氟乙醇/醋酸的DCM溶液脱掉羧基上的Trt保护基，让羧基裸露出来，最后在PyBop、DIEA的DMF溶液中让树脂肽上裸露的氨基和羧基自行环合成环二肽并挂在树脂上，经过切割，使环二肽脱落下来，在乙醚中沉淀生成含天冬酰胺或谷氨酰胺的环二肽。本发明合成方法简单、操作安全，易于纯化，适合规模化操作，可批量合成含天冬酰胺或谷氨酰胺的环二肽。
