[发明专利]一种呼吸链超级复合物蛋白有效
| 申请号： | 201710821771.0 | 申请日： | 2017-09-13 |
| 公开（公告）号： | CN107815443B | 公开（公告）日： | 2021-07-06 |
| 发明（设计）人： | 杨茂君;谷金科;吴萌 | 申请（专利权）人： | 清华大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N9/04;C07K14/80;C07K1/36;C07K1/16;C07K1/14 |
| 代理公司： | 北京奉思知识产权代理有限公司 11464 | 代理人： | 吴立;邹轶鲛 |
| 地址： | 10008*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种哺乳类细胞呼吸链超级复合物蛋白，尤其是涉及具有高分辨原子分辨率冷冻电镜结构的呼吸链超级复合物蛋白，以及该蛋白的制备方法，采用该蛋白结构有助于进一步研究哺乳动物的呼吸作用机制以及与该呼吸作用相关的疾病。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 呼吸 超级 复合物 蛋白 | ||
【主权项】：
一种哺乳类呼吸链超级复合物蛋白，由一个NADH脱氢酶复合物I、两个细胞色素bc1复合物III和一个细胞色素c氧化酶复合物IV组成超级复合物I1III2IV1，超级复合物I1III2IV1长300埃，高190埃；在冷冻电镜三维结构中，超级复合物整体分辨率高于4埃；其中NADH脱氢酶复合物I包含如下45个蛋白亚基：蛋白1具有SEQ ID NO:1的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:1具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:1具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白2具有SEQ ID NO:2的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:2具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:2具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白3具有SEQ ID NO:3的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:3具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:3具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白4具有SEQ ID NO:4的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:4具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:4具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白5具有SEQ ID NO:5的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:5具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:5具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白6具有SEQ ID NO:6的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:6具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:6具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白7具有SEQ ID NO:7的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:7具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:7具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白8具有SEQ ID NO:8的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:8具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:8具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白9具有SEQ ID NO:9的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:9具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:9具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白10具有SEQ ID NO:10的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:10具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:10具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白11具有SEQ ID NO:11的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:11具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:11具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白12具有SEQ ID NO:12的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:12具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:12具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白13具有SEQ ID NO:13的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:13具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:13具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白14具有SEQ ID NO:14的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:14具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:14具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白15具有SEQ ID NO:15的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:15具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:15具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白16具有SEQ ID NO:16的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:16具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:16具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白17具有SEQ ID NO:17的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:17具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:17具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白18具有SEQ ID NO:18的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:18具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:18具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白19具有SEQ ID NO:19的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:19具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID 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NO:29具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白30具有SEQ ID NO:30的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:30具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:30具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白31具有SEQ ID NO:31的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:31具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:31具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白32具有SEQ ID NO:32的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:32具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:32具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白33具有SEQ ID NO:33的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:33具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:33具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白34具有SEQ ID NO:34的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:34具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:34具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白35具有SEQ ID NO:35的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:35具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:35具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白36具有SEQ ID NO:36的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:36具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:36具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白37具有SEQ ID NO:37的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:37具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:37具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白38具有SEQ ID NO:38的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:38具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:38具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白39具有SEQ ID NO:39的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:39具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:39具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白40具有SEQ ID NO:40的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:40具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:40具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白41具有SEQ ID NO:41的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:41具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:41具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白42具有SEQ ID NO:42的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:42具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:42具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白43具有SEQ ID NO:43的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:43具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:43具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白44具有SEQ ID NO:44的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:44具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:44具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白45具有SEQ ID NO:45的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:45具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:45具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；其中细胞色素bc1复合物III包含如下11个蛋白序列：蛋白46具有SEQ ID NO:46的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:46具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:46具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白47具有SEQ ID NO:47的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:47具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:47具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白48具有SEQ ID NO:48的蛋白序列；或者与SEQ ID NO:48具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:48具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列；蛋白49具有SEQ ID NO:49的蛋白序列；或者与SEQ ID 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ID NO:69具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白；或者与SEQ ID NO:69具有一个或几个氨基酸的取代、缺失或替换的蛋白序列。
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- 本发明公开了一种热稳定性提升的FDH突变体及其参与的辅酶再生系统，本发明利用力文所开发的基于深度学习算法的蛋白质设计平台‑Lésign对野生型甲酸脱氢酶的序列进行改进，并进行生物实验验证，AI计算结果和生物实验结果表明，得到的突变体的热稳定性优于野生型。特别是本发明进一步限定的组合突变得到的突变体的人稳定性表现得较为优异，在60℃孵育90min后的剩余酶活基本上能达到野生型的250％。上述突变体参与的NAD
- 蛋白可溶性表达提高的FDH突变体及其编码基因-202310571222.8
- 刘薇;王浩博;陈波 - 杭州力文所生物科技有限公司
- 2023-05-18 - 2023-10-20 - C12N9/02
- 本发明公开了一种蛋白可溶性表达提高的FDH突变体及其编码基因，本发明通过Lésign平台对野生型甲酸脱氢酶进行序列改造。计算得到的突变体RP31～37的蛋白可溶性表达量和热稳定性均有较大提升。特别是RP31和RP33，可溶性表达量均达到了野生型的300％以上，在60℃孵育90min后的剩余酶活均达到了野生型的200％左右。因此，本发明本发明突变后的甲酸脱氢酶在相同发酵条件下可以得到更多可用于催化的酶量，同时突变体参与的NAD
- 应激蛋白新型变体及利用其的L-芳香族氨基酸的生产方法-202380008902.7
- 金贤英;杨澈敏;申沅株;金容秀;曹永一 - 大象株式会社
- 2023-02-14 - 2023-10-20 - C12N9/02
- 本发明涉及应激蛋白新型变体及利用其的L‑芳香族氨基酸的生产方法，上述应激蛋白变体通过置换构成谷胱甘肽还原酶或应激蛋白B的氨基酸序列中的一个以上的氨基酸来改变蛋白质活性，从而包含其的重组微生物可以有效地生产L‑芳香族氨基酸。
- 一种不依赖递氢体的呕吐毒素降解酶突变体-202310300432.3
- 文继开;李丹阳;梁国强;邓诣群;母培强;吴骏;林如琴;陈庆梅;陈超 - 华南农业大学;岭南现代农业科学与技术广东省实验室
- 2023-03-24 - 2023-10-20 - C12N9/02
- 本发明公开了一种不依赖递氢体可以降解呕吐毒素特性的突变体，与野生型相比，该突变体包含F103A和T493E两个突变位点，其氨基酸序列和核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。突变体SDH
- 一种增强碳源代谢的大肠杆菌底盘细胞-202111481363.8
- 陆姝欢;刘洋;李翔宇;朱文冉;余超;汪志明 - 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司
- 2021-12-06 - 2023-10-20 - C12N9/02
- 本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种增强碳源代谢的大肠杆菌底盘细胞。本发明提供的大肠杆菌底盘细胞中含有甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶突变体，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明提供的大肠杆菌底盘细胞，碳源代谢能力增强，具备较高的乳糖摄入能力。本发明提供的大肠杆菌底盘细胞为工业化大肠杆菌基因工程菌构建奠定了基础。
- 高效合成氢化可的松的11β-羟化重组丝状真菌及其应用-202310000666.6
- 刘晓光;杨滨瑞;路福平;毛淑红;李金红 - 天津科技大学
- 2023-01-03 - 2023-10-17 - C12N9/02
- 本发明提供了高效合成氢化可的松的11β‑羟化重组丝状真菌及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域；本发明将来源于新月弯孢霉的C11β‑羟化酶CYP5103B6突变体T291Y/M365A/A372F在缺失11α‑羟化酶CYP68J5的赭曲霉菌株中过表达，获得的赭曲霉重组菌能够高效转化底物11‑脱氧皮质甾醇生成氢化可的松。所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。底物11‑脱氧皮质甾醇的投料量为3g/L，转化72h，产物氢化可的松的得率达到78％。本发明为研究开发高效C11β‑羟化11‑脱氧皮质甾醇生产氢化可的松工艺提供了宝贵的工业菌种和技术方法。
- 对PPO抑制剂类除草剂具有耐受性的PPO2多肽及应用-202310135184.1
- 请求不公布姓名 - 青岛清原种子科学有限公司
- 2023-02-18 - 2023-10-17 - C12N9/02
- 本发明涉及生物技术领域，更具体地说，本发明涉及对PPO抑制剂类除草剂具有耐受性的PPO2多肽及应用。将其应用到植物中可以大大提高植物对PPO抑制剂类除草剂的抗性，可使用在包括经济作物在内的植物上，根据除草剂抗性特性和除草剂选择使用，从而达到经济地控制杂草生长的目的。
- 烯还原酶突变体、其组合物、生物材料及应用-202311163731.3
- 罗积杏;王红艳;壮晓健;童杰;李原强 - 瑞博（苏州）制药有限公司;浙江九洲药业股份有限公司
- 2023-09-11 - 2023-10-17 - C12N9/02
- 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及烯还原酶突变体、其组合物、生物材料及应用。本发明发现了一种烯还原酶，其可用于西他列汀中间体的制备，进一步的，通过随机和定点突变获得烯还原酶突变体，将它们用于西他列汀中间体的合成，试验结果表明，本发明的烯还原酶突变体对底物选择性高、酶活力强，与传统合成方法相比，步骤简单、成本低、副产物低、产物手性纯度高，能够更好的满足工业化生产需求，具有广泛的应用潜力。
- 一种4-羟基苯乙酸-3-羟化酶突变体-202310870985.2
- 赵伟睿;张前超;胡升;梅乐和;黄俊;吕常江 - 浙大宁波理工学院
- 2023-07-14 - 2023-10-17 - C12N9/02
- 本发明公开了一种4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体，所述4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体由大肠杆菌(Escherichia coli)来源的野生型4HPA3H酶经过突变所得，野生型4HPA3H酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，突变方式为以下一种：(1)I157L；(2)A211D；(3)I157L/A211D。本发明4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体，其中1157L、A211D两种突变体全细胞催化白藜芦醇活性相对于WT提高了1.84和2.07倍，同时将两个位点进行叠加所得的突变体I157L/A211D全细胞催化白藜芦醇活性相较于WT提高了2.46倍。
- 一种耐高温重组突变型SOD及其编码基因和应用-202111456305.X
- 聂作明;青立军;盖其静;周始煜 - 浙江安各洛生物技术有限公司
- 2021-12-01 - 2023-10-17 - C12N9/02
- 本发明公开的是一种耐高温重组突变型SOD及其编码基因和应用，以耐高温菌Acidilobus saccharovorans的SOD序列为基础，将其编码蛋白的氨基酸序列中164L突变为I以及168V突变为E，从而提高SOD的活性、热稳定性、耐酸碱性以及耐胰蛋白酶消化性，其活性至少提高60％以上，活性显著高于现有技术生产的SOD的活性，耐高温突重组变型SOD包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，还提供了在制备超氧化物歧化酶产品中的应用，特别是在医药、食品、化妆品等行业，本发明具有突变酶活显著提高，耐胰蛋白酶消化，具有较高蛋白稳定性，耐高温等技术特点。
- 一种提取超氧化物歧化酶的方法-202311038405.X
- 张成林 - 张成林
- 2023-08-17 - 2023-10-13 - C12N9/02
- 本发明涉及一种提取超氧化物歧化酶的方法，包括有粉碎榨汁工艺、固液分离工艺、提取浓缩工艺和固定化修饰工艺；通过双相酶法提取和酶固定化修饰技术生产的植物SOD产品，所述固定化修饰技术是将SOD粗酶经固定化优化技术制得固定化SOD，再经进一步提纯修饰制得高活性SOD所需原料SOD菊种植栽培采用生态保护系统，本方法利用生态保护系统，实现人工规模化规范化种植、无化学农药污染、纯天然、绿色环保的有机应用，是一种植物超氧化物歧化酶(SOD)提取方法，即是从绿色植物中可食部分提取的精华，无任何副作用。
- 一种植物来源的塑料降解酶及其体外降解PP塑料的方法-202210850985.1
- 李永;谭前龙;陈文韬;唐杰;李自迁 - 中南林业科技大学
- 2022-07-19 - 2023-10-13 - C12N9/02
- 本发明公开了一种植物来源的塑料降解酶及其体外降解PP塑料的方法，属于酶工程技术领域。本发明的植物来源的塑料降解酶为植物来源的HIS1蛋白酶。体外降解PP塑料的方法，步骤如下：利用RT‑PCR技术从植物中克隆HIS1基因；通过平末端克隆技术将基因连接到原核表达质粒中；导入Bl21(DE3)大肠杆菌表达平台进行表达并纯化出HIS1蛋白；在体外构建酶反应环境对PP塑料进行降解。本发明提供的HIS1蛋白可以有效实现PP塑料的降解，为PP塑料生物降解提供了一条以植物酶降解塑料的新思路，具有良好的应用前景。
- 一种P450酶突变体、单质粒三酶共表达系统及其在骨化二醇合成中的应用-202310642328.2
- 王华磊;柳沁怡;沈亚领 - 华东理工大学
- 2023-06-01 - 2023-10-13 - C12N9/02
- 本发明公开了一种P450酶突变体、单质粒三酶共表达系统及其在骨化二醇合成中的应用。P450酶突变体包括：以SEQ ID NO.1所示野生型P450酶CYP109E1为模板，分别对第78位的T突变或第81位的G突变，形成的突变体T78A、T78V、T78L和T78I，G81V和G81M，以及同时对第78位的T和第81位的G突变，形成的突变体T78L/G81M。本发明还通过构建一种P450酶突变体和氧化还原伴侣的单质粒三酶共表达系统，提高了P450酶羟基化反应中的电子传递效率，可在温和条件下以更高效率合成骨化二醇，解决了P450酶催化合成骨化二醇催化效率以及活力低的问题，具有重要的工业应用价值。
- 一种老黄酶NemR-PS突变体及其在制备(S)-香茅醇中的应用-202210616904.1
- 李霞;王壹;魏春;冯彬斌;冯颖婷;张飞龙;肖延铭;应向贤;章银军 - 浙江工业大学;浙江英沃迪生物科技有限公司
- 2022-06-01 - 2023-10-13 - C12N9/02
- 本发明公开了一种老黄酶NemR‑PS突变体及其在制备(S)‑香茅醇中的应用，所述老黄酶NemR‑PS突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中第275位、第351位氨基酸进行单突变或双突变获得的。通过构建共表达老黄酶NemR‑PS突变体、醇脱氢酶YsADH和葡萄糖脱氢酶BmGDH
- 硫醚单加氧酶突变体及其在制备手性拉唑药物中的应用-202310650468.4
- 郁惠蕾;周敏;秦鹏;耿强;张志钧 - 华东理工大学
- 2023-06-02 - 2023-10-10 - C12N9/02
- 本发明属于生物工程技术领域，涉及一种硫醚单加氧酶突变体；编码所述硫醚单加氧酶突变体的核酸，含有该核酸的重组表达载体，含有该重组表达载体的重组表达转化体；以及所述重组硫醚单加氧酶突变体在制备手性拉唑药物中的应用。与其它制备光学纯拉唑类药物的生物催化剂相比，本发明提供的硫醚单加氧酶突变体具有蛋白表达量高、催化活性高、溶剂耐受强、热稳定性好、产品光学纯度高、产率高等优势，在工业应用中显示出广泛的应用前景。
- 一种生产棘白霉素类药物的基因工程菌及其应用-202210314827.4
- 陈少欣;卫腾云;杨松柏;吴远杰 - 上海医药工业研究院有限公司;中国医药工业研究总院有限公司
- 2022-03-28 - 2023-10-10 - C12N9/02
- 本发明公开了一种生产棘白霉素类药物的基因工程菌及其应用。所述基因工程菌包括一种基因组合，所述基因组合包括来源于丝状真菌Coleophoma empetri中编码P450单加氧酶CEP450‑3的基因和编码磺酰基转移酶CESUL的基因。本发明还公开了一种棘白霉素类化合物，其组成环脂肽的高酪氨酸处具有磺酰氧基的修饰。本发明还公开了通过培养所述基因工程菌来制备所述棘白霉素类化合物的方法，以及所述基因组合、重组表达载体和基因工程菌在生产所述棘白霉素类化合物中的应用。本发明的基因工程菌能生产具有磺酰氧基修饰的新化合物PBS和EcBS，新化合物的水溶性和抗菌活性均分别优于原未经磺酰氧基修饰的化合物PB
- 专利分类
