本发明公开了一种酯酶pnbA‑BS突变体及其在制备l‑薄荷醇中的应用，所述酯酶pnbA‑BS突变体是以SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第400位丙氨酸突变为脯氨酸获得。以表达酯酶pnbA‑BS突变体A400P的基因工程菌为整细胞催化剂，催化dl‑乙酸薄荷酯的选择性拆分，恒速流加方式加入底物，底物加入量可达1700mM，产物l‑薄荷醇e.e.值99％，产物累积浓度可达600mM，反应时空得率可达160g/(L·d)。反应体系不添加有机溶剂，减少了化学品的使用，简化了产物分离工艺，是一种绿色、高效、简便的新型l‑薄荷醇制备方法。
本发明公开了一种老黄酶NemR‑PS突变体及其在制备(S)‑香茅醇中的应用，所述老黄酶NemR‑PS突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中第275位、第351位氨基酸进行单突变或双突变获得的。通过构建共表达老黄酶NemR‑PS突变体、醇脱氢酶YsADH和葡萄糖脱氢酶BmGDHM6的基因工程菌，以该基因工程菌作为催化剂，以恒速流加方式加入底物，一锅法多酶级联催化底物(E/Z)‑柠檬醛的二步还原，产物(S)‑香茅醇累积浓度达500mM，产物e.e.值99％，反应时间仅需12h，没有中间产物和副产物残留。
本发明公开了一种重组毕赤酵母工程菌及其在合成左旋多巴中的应用。本发明的重组毕赤酵母工程菌通过如下方法获得：将SEQ ID NO.1所示的酪氨酸酚裂解酶(TPL)的DNA序列进行密码子优化后，转入到毕赤酵母GS115，构建重组毕赤酵母YZ001，随后将SEQ ID NO.4所示的HAC1在毕赤酵母YZ001中过量表达，构建获得重组毕赤酵母工程菌YZ002。本发明重组毕赤酵母工程菌发酵离心后的上清液可有效用于合成左旋多巴，离心后的菌体可以用于下一批次的发酵，这不仅提高了左旋多巴的合成效率和使用率、节约生产成本，并为左旋多巴的生产加工开辟新的工业化途径。
