本发明涉及医学检测领域，尤其涉及一种突变ACC1蛋白及其用途。本发明的突变ACC1蛋白为将野生型ACC1蛋白的第1523位赖氨酸突变为谷氨酸得到，所述野生型ACC1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。利用蛋白质组学和生信分析发现并鉴定NAFLD小鼠模型的肝脏中发生显著差异丙二酰化修饰的ACC1蛋白及其丙二酰化位点K1523，说明ACC1蛋白丙二酰化修饰与肝脏脂质沉积有关，将来可作为协助诊断和判断病情严重程度的生物学标记物。利用K1523E突变模拟ACC1蛋白丙二酰化修饰，证明K1523是ACC1发挥酶活性的关键位点，将来可作为抗体制备、NAFLD治疗药物研发的靶点。
本发明涉及酶催化技术领域，尤其是一种耐热性增强的谷胱甘肽合成酶及应用，所述谷胱甘肽合成酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。使用时，反应体系pH7.0，含有硫酸镁、六偏磷酸钠、甘氨酸及谷氨酸钠、L‑半胱氨酸盐酸盐、AMP钠盐，加入谷胱甘肽合成酶的粗酶液及耐热型多聚磷酸激酶，30～45℃反应。该谷胱甘肽合成酶与野生型谷胱甘肽合成酶相比，可应用于高温催化NADH，表现出更强的热稳定性。
本发明涉及基因工程领域，公开了一种耦合机器学习结合机制引导的乙酰辅酶A合成酶改造策略及其应用。该乙酰辅酶A合成酶突变体为将具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的酶在第112位、第184位、第223位、第256位、第260位、第360位、第449位、第469位、第504位和第612位中的至少一位进行突变。本发明还提供一种编码乙酰辅酶A合成酶突变体的基因，一种重组载体，一种重组菌株，一种乙酰辅酶A合成酶突变体的制备方法，一种酶制剂以及它们的应用。该乙酰辅酶A合成酶突变体具有优异的催化活性，在藤仓赤霉菌中过表达该突变体可有效提高赤霉素的产量。
本发明涉及植物基因工程技术领域，尤其涉及一种与烟草盐胁迫有关的基因、蛋白、表达载体及应用。本发明提供了一种与烟草盐胁迫有关的基因，所述基因为烟草NtProT10基因，所述烟草NtProT10基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。NtProT10基因的启动子中含有21种与生长发育、激素和胁迫等相关的顺式作用元件，基因表达在拟南芥整个生长发育阶段具有连续性和组织特异性。在盐胁迫条件下，NtProT10基因表达量发生显著变化，Pro含量不断上升，存在显著差异。因此，NtProT10基因表达在烟草抗盐胁迫过程中发挥了一定的作用。
本发明公开了一种孝顺竹来源的蛋白连接酶原或酶及其应用。所述蛋白连接酶酶原氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其突变体与SEQ ID NO:1相比具有G217V差异。本发明还公开了蛋白连接酶原激活后相应的蛋白连接酶或其突变体，编码酶原或酶的多核苷酸、包含其的重组表达载体和转化体，以及包含它们的试剂盒。本发明还公开了蛋白连接酶或蛋白连接酶突变体的制备方法、AEP型蛋白连接酶的辅助激活的方法以及利用蛋白连接酶连接或环化多肽或蛋白的方法。本发明从孝顺竹中鉴定出一个新的AEP型蛋白连接酶，其突变体具有相当高的蛋白连接酶活力，且水解酶活力显著降低，能有效催化蛋白质分子间连接和多肽分子内环化，有望作为一个新的工具酶。
本发明提供了一种L‑氨基酸连接酶的制备方法及其在二肽合成上的应用。其中，二肽合成方法包括利用如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的L‑氨基酸连接酶进行二肽合成反应，得到二肽。利用本申请的L‑氨基酸连接酶，能够进行多种功能二肽的合成，底物谱较广，且合成效率较高，能够较好地用于工业放大，成本低，收率高，实现了真正的绿色化学。
