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[发明专利]一种能高效利用非天然辅因子的P450BM3酶突变体及其表达应用-CN202310901760.9在审
发明人：荣明利;焦林翔;鲁晓晓;冯英慧;张鲁嘉 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2023-07-21 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种能高效利用非天然辅因子的P450BM3酶突变体，以PDB编号1J9Z与4DQL为结构模板，以FAD黄素的N‑5原子与NMNH的C‑4原子之间的距离为改善催化效率的基础进行理性设计提高P450BM3酶利用仿生辅因子NMNH的活性，最后得到能高效利用非天然辅因子的P450BM3酶突变体，将其应用到了分泌表达系统中。本发明P450BM3酶突变体能够高效利用仿生辅因子NMNH，可大大降低了工业生产的成本和障碍。
一种高效利用天然因子 p450bm3 突变体及其表达应用

[发明专利]一种高酶活胃蛋白酶的人工改造酶及其分子改造方法和表达应用-CN202211425013.4有效
发明人：缪廷炜;冯英慧;荣明利;张鲁嘉;吴迎红;沈涛;杜新园 -专利权人：华东师范大学;宁夏夏盛实业集团有限公司;沧州夏盛酶生物技术有限公司
申请日： 2022-11-15 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本申请公开了一种高酶活胃蛋白酶的人工改造酶及其分子改造方法和表达应用，以催化活性位点处水的O原子与肽键的酰胺C原子间距离为基础进行理性设计提高胃蛋白酶活性，对胃蛋白酶进行人工分子改造，筛选得到酶活显著提高的突变体。本发明通过对胃蛋白酶的序列、结构和功能进行深入研究，从稳定催化结构和促进催化反应两方面对胃蛋白酶进行突变，获取在工业生产中更具备应用价值的高活力酶。
一种高酶活胃蛋白酶人工改造及其分子方法表达应用

[发明专利]一种提高脯氨酸内肽酶底物选择性的分子改造设计方法-CN202310888345.4在审
发明人：鲁晓晓;沈佩琦;冯英慧;张鲁嘉 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2023-07-19 - 公布日： 2023-10-17 - 主分类号： G16B15/30 文献下载
摘要：本发明改造脯氨酸内肽酶以提升其底物选择性的理性设计方法，从PDB数据库中下载来自Myxococcus xanthus脯氨酸内肽酶的晶体结构，通过分子对接获得酶‑底物复合物结构，MD模拟使结构稳定，对底物附近的酶残基进行虚拟饱和突变，约束性MD模拟使酶处于完美催化的“近进攻态”构象，利用MM/GBSA方法计算结合自由能并进行残基能量拆解从而虚拟筛选出潜在底物选择性提升的突变体酶。通过大肠杆菌表达系统进行酶的表达，镍柱纯化，使用紫外‑可见吸收法测定重组酶对于底物SEPTTMPLW、SEATTMALW以及两者的混合物的酶促反应选择性。本发明分子改造设计方法可以快速有效提升脯氨酸内肽酶的底物选择性。
一种提高脯氨酸肽酶选择性分子改造设计方法

[发明专利]一种高酯化能力的脂肪酶突变体及其表达应用-CN202310560479.3在审
发明人：高蓓;张鲁嘉;朱屹婷;冯英慧;王嘉伟;何晓 -专利权人：华东理工大学;华东师范大学
申请日： 2023-05-18 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： C12N9/20 文献下载
摘要：本发明提供了一种高酯化能力的脂肪酶突变体及其表达应用，通过半理性理性设计、定点突变技术改造MAS1脂肪酶基因，最后得到具有高酯化能力的脂肪酶突变体，将其应用到了分泌表达系统中。本发明脂肪酶突变体不仅能提升n‑3PUFA甘油三酯的生产效率，同时可以大大节约工厂生产的经济成本，满足n‑3PUFA甘油三酯的工业生产需求。
一种酯化能力脂肪酶突变体及其表达应用

[发明专利]一种鲜味受体重组蛋白包涵体的复性方法-CN202210392025.5有效
发明人：张传玺;高蓓;张鲁嘉;沈亚领;方波欢 -专利权人：华东理工大学;华东师范大学
申请日： 2022-04-14 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： C07K14/705 文献下载
摘要：本发明提供了鲜味受体重组蛋白包涵体的复性方法，将包涵体蛋白先纯化后复性，同时将洗涤液与变性液合并为一步，大大简化了操作步骤；采用含逐步降低浓度的十二烷基硫酸钠的复性液进行三步梯度透析复性；色谱柱中的蛋白质重折叠可以通过使用变性剂和添加剂调节流动相来改善色谱重折叠。色谱特异性结合融合蛋白的多聚组氨酸标签，因此大部分蛋白质在溶液中保持游离，能够通过吸附到表面上不受限制地折叠，采用环糊精作为分子伴侣促进蛋白质折叠，使蛋白回收率高达70％以上，纯度高85％以上，且本方法处理的蛋白产量高，方法简便，后期易于加工，利于工业化的生产。
一种鲜味受体重组蛋白包涵复性方法

[发明专利]一种高热稳定性胃蛋白酶的人工改造酶及其表达应用-CN202211425015.3在审
发明人：荣明利;冯英慧;缪廷炜;赵玥;张鲁嘉;沈涛;杜新园 -专利权人：华东师范大学;宁夏夏盛实业集团有限公司;沧州夏盛酶生物技术有限公司
申请日： 2022-11-15 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本申请公开了一种高热稳定性胃蛋白酶的人工改造酶及其表达应用，基于结构分析，结合多种稳定性设计软件的系统性测试，探究胃蛋白酶的热力学结构弱点并以此进行突变体筛选，获得了在70℃半衰期分别提高了200.0％和66.3％的D52N和S129A突变体，并与市售的胃蛋白酶制剂进行活性比较，与商业化胃蛋白酶的比活力没有显著性差异，重组胃蛋白酶可以代替商业化动物脏器提取的胃蛋白酶。
一种高热稳定性胃蛋白酶人工改造及其表达应用

[发明专利]一种基于葡萄糖氧化酶的人工改造酶及其表达应用-CN202111356602.7有效
发明人：支凤东;张鲁嘉;缪雨露;赵玥;潘月;崔令蒙;方波欢;冯英慧;沈涛 -专利权人：华东师范大学;宁夏夏盛实业集团有限公司;沧州夏盛酶生物技术有限公司
申请日： 2021-11-16 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种基于葡萄糖氧化酶的人工改造酶及其表达应用，通过理性设计、定点突变技术改造来自于黑曲霉的葡萄糖氧化酶M8基因，最后得到热稳定性显著提高的突变体，将其应用到了真核细胞表达系统。由此解决了全价饲料高温制粒过程中葡萄糖氧化酶酶活过多丧失的问题。
一种基于葡萄糖氧化酶人工改造及其表达应用

[发明专利]一种提高酶分子突变位点筛选效率的分子改造设计方法-CN202211347191.X在审
发明人：倪辉;龙香;张鲁嘉;冯英慧;沈涛;杜新园;龚蕾 -专利权人：集美大学;华东师范大学;宁夏夏盛实业集团有限公司
申请日： 2022-10-31 - 公布日： 2023-01-31 - 主分类号： G16B20/50 文献下载
摘要：本发明适用于生物工程技术领域，提供了一种提高酶分子突变位点筛选效率的分子改造设计方法，以开源软件AutoDock、Pymol为基础，结合构建的筛选方案，采用全理性蛋白酶设计改造方法，通过定点突变，分子对接以及构建突变位点筛选方案的方法，进行酶分子的全理性设计改造，从而提升酶分子的性能。基于此方法建立的应用系统方便用户在实验前测试大量的突变位点并优先选择突变位点，提升了酶分子突变位点筛选的效率,节约人力、物力和财力。
一种提高分子突变筛选效率改造设计方法

[发明专利]一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法-CN202210550377.9在审
发明人：俞家欢;张鲁嘉;方波欢;蒲姿蓉;张钰麟 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2022-05-20 - 公布日： 2022-08-12 - 主分类号： C07K16/32 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，采用本发明方法制得的复性单链抗体重组蛋白溶液，该单链抗体重组蛋白所处的溶剂即为使用者后续实验所需的缓冲液，无需再进行缓冲液的置换，同时最终产物中单链抗体蛋白的浓度能达到30mg/mL以上，单链抗体复性率达到20％以上，最终置换蛋白与复性单链抗体蛋白的比例达到30％以上。本发明变复性方法适用于大肠杆菌表达得到的曲妥珠单链抗体蛋白，同时也适用于与曲妥珠单链抗体蛋白序列同源性达到60％以上的单链抗体蛋白。
一种用于曲妥珠单链抗体与其序列同源复性方法

[发明专利]一种提高脯氨酰内肽酶催化效率的分子改造设计方法-CN202010300809.1有效
发明人：李晓琳;韩艳芳;张鲁嘉;张增辉;丛亚龙;马明哲;方波欢 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2020-04-16 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： G16B5/00 文献下载
摘要：本发明改造脯氨酰内肽酶以提升其催化效率的理性设计方法主要是通过同源建模获得嗜热球杆菌(Sphaerobacter thermophiles)脯氨酰内肽酶，分子对接获得酶‑底物复合物结构，MD模拟使结构稳定，对底物附近的酶残基进行虚拟饱和突变，约束性MD模拟使酶处于完美催化的“近进攻态”构象，利用MM/GBSA方法计算结合自由能从而虚拟筛选出潜在催化效率提升的突变体酶。通过大肠杆菌表达系统进行酶的表达，镍柱纯化，使用HPLC测定重组酶对于九肽底物的酶活及动力学参数。结果表明，本发明分子改造设计方法可以快速有效提升脯氨酰内肽酶的催化活性，说明本发明的酶改造方法可靠。
一种提高脯氨酰内肽酶催化效率分子改造设计方法

[发明专利]采用变量增益算法与广度层内增益算法的保险数据决策树构建方法-CN201711422828.6有效
发明人：赵昕;毛耀鋆;张鲁嘉;尹龙;涂闪;杨明锋 -专利权人：上海七炅信息科技有限公司
申请日： 2017-12-25 - 公布日： 2021-08-06 - 主分类号： G06Q40/08 文献下载
摘要：本发明涉及一种保险数据决策树构建方法，尤其涉及采用变量增益算法与广度层内增益算法的保险数据决策树构建方法。按以下步骤进行：变量增益算法→广度层内增益算法→特征选择方式。采用变量增益算法与广度层内增益算法的保险数据决策树构建方法有效提高建模精准度，提升操作便利性。
采用变量增益算法广度保险数据决策树构建方法

[发明专利]一种酶固定化方法及其应用-CN201710444356.8有效
发明人：高蓓;魏东芝;张鲁嘉;王风清;江敏;刘国松 -专利权人：华东理工大学
申请日： 2017-06-13 - 公布日： 2020-11-27 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供一种酶固定化方法及其应用。该固定化方法利用磁感应蛋白与靶蛋白的直接融合，然后通过融合蛋白对纳米铁珠的吸附，从而实现酶的固定化。该方法可提高固定化酶的热稳定性和更强的pH耐受性，所制备的固定化酶在重复利用15次后，其相对活性仍然高达80％，在重复利用20次后，其相对活性仍然高达75％。本发明提供了一种操作简单的、效率提高的以及成本降低的酶固定化方法及其应用。
一种固定方法及其应用

[发明专利]一种表达微管β亚基与蛋白A的D结构域融合蛋白的基因工程菌株及其构建方法-CN202010207523.9有效
发明人：赵玥;张鲁嘉;张增辉;韩艳芳;何晓;方波欢 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2020-03-23 - 公布日： 2020-11-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明以变形杆菌(Prosthecobacter dejongeii)的微管β亚基作为基础蛋白，与蛋白A的D结构域进行融合，通过大肠杆菌表达系统进行表达，得到融合蛋白βA，该融合蛋白βA既保留了原核微管的自组装特性，又保留了蛋白A的D结构域结合VH Ⅲ家族单链抗体的活性。本发明融合蛋白βA具备微管亚基自组装活性，能与微管蛋白α亚基自组装形成微管结构，融合蛋白βA又可借助蛋白A的D结构域结合VH Ⅲ家族抗体，形成工程化微管‑抗体‑抗原的复合物，突破冷冻电镜技术对样品的尺寸限制。
一种表达微管蛋白结构融合基因工程菌株及其构建方法

[发明专利]一种基于酵母二肽基肽酶Ⅲ的抗体模拟物及其应用-CN202010192357.X有效
发明人：潘月;张鲁嘉;张增辉;何晓;张传玺;方波欢 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2020-03-18 - 公布日： 2020-10-20 - 主分类号： C12N9/48 文献下载
摘要：本发明提供了一种基于酵母二肽基肽酶Ⅲ的抗体模拟物及其应用，通过理性设计改造获得DPPⅢ突变菌株，获得AFB1抗体模拟物，使其与黄曲霉毒素高效亲和，解决了抗体生产加工过程中的稳定性问题，并实现抗体模拟物对小分子的富集作用和黄曲霉毒素的高效快速检测。
一种基于酵母二肽肽酶抗体模拟及其应用

[发明专利]一种基于α螺旋融合两种蛋白质且保持各自亚基活性的蛋白质融合设计方法-CN202010192367.3有效
发明人：赵玥;张鲁嘉;张增辉;何晓;方波欢 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2020-03-18 - 公布日： 2020-10-20 - 主分类号： G16B15/00 文献下载
摘要：本发明融合设计方法利用α螺旋结构通过相同氨基酸替换的方法将变形杆菌(Prosthecobacter dejongeii)的微管蛋白α亚基与蛋白A的D结构域融合，通过α螺旋形成条件、二级结构分析、能量计算和动力学模拟筛选出可行性较高的融合蛋白，通过实验证明了筛选出的融合蛋白确实具备微管组装特性和蛋白A的D结构域亲和VHⅢ单链抗体的活性。本发明的融合设计方法以天然存在的自组装体系——微管位基础，通过再微管蛋白亚基上融合其他具备活性的蛋白质亚基，在保留微管亚基自组装活性的条件下增加了微管自组装体系结合单链抗体的活性。
一种基于螺旋融合种蛋白质保持各自活性蛋白质设计方法

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