本发明公开了一种醇脱氢酶突变体及其应用。该脱氢酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO:9所示氨基酸序列发生突变的氨基酸序列,发生突变的氨基酸序列具有如下至少1个突变位点:第40位、第87位、第194位和第331位,且第40位的T突变为S、A或C;第87位的W突变为F、Y或H;第194位的V突变为I、L或E;第331位的R突变为A、K或M;或者,醇脱氢酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点,且与发生突变的氨基酸序列具有90%以上同源性的氨基酸序列。具有上述至少一个突变位点或者保留上述突变位点且与其具有90%以上氨基酸序列同源性的醇脱氢酶突变体,其立体选择性和酶活性大大提高。
本发明涉及一种转氨酶突变体,所述转氨酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO:1所示氨基酸序列发生突变的氨基酸序列;其中,所述发生突变的氨基酸序列具有以下至少1个突变位点:第45位、第75位、第108位、第159位、第234位、第272位;且第45位P突变为V或G,第75位L突变为K,第108位G突变为E或D,第159位T突变为Y、H或P,第234位L突变为C,第272位C突变为R或K;所述转氨酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点,且与发生突变的氨基酸序列具有90%以上同源性。所述转氨酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示时,该酶突变体的热稳定性较高,且对式(a)所示底物具有较高的催化活性。
本发明公开了一种D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶的突变体及其应用。该D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO:1所编码的氨基酸序列发生突变的氨基酸序列,所述发生突变的氨基酸的突变位点为第39位的I突变为A,可选的突变位点还包括如下任意一个:第158位的Q突变为S,第186位的L突变为V;或者所述D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体的氨基酸序列具有所述发生突变的氨基酸序列中的突变位点,且与所述发生突变的氨基酸序列具有90%以上同源性的氨基酸序列具有上述突变位点的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构催化生产D‑阿洛酮糖的效率大幅度提高。
本发明公开了一种双羰基还原酶突变体及其应用。该双羰基还原酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO:9所编码的氨基酸序列发生突变的氨基酸序列,发生突变的氨基酸序列具有如下至少两个突变位点:第94位、第151位、第231位、第236位和第251位,且第94位的I突变为V、A或G;第151位的V突变为Q、N或S;第231位的F突变为W、Y或P;第236位的I突变为L、V或A;第251位的Q突变为H、R或K;或者双羰基还原酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点,且与发生突变的氨基酸序列具有90%以上同源性的氨基酸序列。具有上述突变位点的双羰基还原酶突变体酶活性大幅度提高。
本发明公开了一种转氨酶突变体及其应用。该转氨酶突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列发生突变得到的氨基酸序列,突变至少包括如下突变位点之一:第19位、第41位、第43位、第72位、第76位、第92位、第107位、第125位、第132位、第226位、第292位、第295位和第308位、第332位;且第19位突变为丝氨酸,第41位突变为丝氨酸,第43位突变为天冬酰胺,第72位的甘氨酸突变为亮氨酸等;或者转氨酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点,且与发生突变的氨基酸序列具有80%以上同源性的氨基酸序列。本发明转氨酶突变体大幅度降低了手性胺工业生产中的成本。
本发明公开了SHARPIN基因在制备诊断人皮肤肿瘤试剂中的用途,所述的SHARPIN基因的基因组DNA序列是SEQ ID NO:1所示的序列,所述的蛋白质序列是SEQ ID NO:2所示的序列,且SHARPIN基因突变位点在c.103、蛋白质序列突变位点在p.35;或SHARPIN基因突变位点在c.329、蛋白质序列突变位点在p.110;或SHARPIN基因突变位点在c.214、蛋白质序列突变位点在p.72;或SHARPIN基因突变位点在c.221、蛋白质序列突变位点在p.74;或SHARPIN基因突变位点在c.347、蛋白质序列突变位点在p.116。
本发明涉及包含Seq ID No.1的突变的序列的蛋白质,所述SEQ ID No.1的突变的序列包含至少一个突变A、A'、B、C或C',其中:突变A由用选自DFLAEGLTPR、KATN*ATLSPR和KATXATLSPR的序列替换序列SEQ ID No.1的氨基酸43至52组成,突变A’由用选自TSKLTR、FNDFTR、LSSMTR、PPSLTR和LSCGQR的序列替换序列SEQ ID No.1的氨基酸47至52组成,突变B由选自DFLAEGLTPR、KATN*ATLSPR、KATXATLSPR、TSKLTR、FNDFTR、LSSMTR、PPSLTR和LSCGQR的序列在序列SEQ ID No.1的氨基酸52和53之间的插入组成,突变C由选自DFLAEGLTPR、KATN*ATLSPR和KATXATLSPR的序列在序列SEQ ID No.1的氨基酸52和53之间的插入,和序列SEQ ID No.1的氨基酸4至13的缺失组成,突变C'由选自TSKLTR、FNDFTR、LSSMTR、PPSLTR和LSCGQR的序列在序列SEQ ID No.1的氨基酸52和53之间的插入,和序列SEQ ID No.1的氨基酸