本发明实施例公开了一种用于纯化凝血因子VII的方法包括：对凝血因子VII转基因兔的兔乳进行脱脂，得到脱脂兔乳；将所述脱脂兔乳经SP Fast Flow阳离子层析，获得含凝血因子VII的第一纯化液；将所述第一纯化液经Heparin Bestarose HP层析柱层析，得到含凝血因子VII的第二纯化液；将所述第二纯化液经Butyl‑650M层析得到含凝血因子VII的第三纯化液。本发明用于纯化凝血因子VII的方法，利用SP Fast Flow填料对凝血因子VII进行粗纯，以去除兔奶中大部分的杂蛋白，随后用Heparin Bestarose HP层析柱对SP Fast Flow洗脱样品进行纯化，最后用Butyl‑650M层析对Heparin Bestarose HP洗脱样品进行纯化，这样就减少了兔乳中大量的酪蛋白对亲和填料载量与纯化效果的影响，可有效提高凝血因子纯度，降低成本，提高经济效益。
本发明涉及一种凝血因子IX突变体及其应用，对应于野生型凝血因子IX氨基酸序列中340位置的氨基酸并非谷氨酸，而是赖氨酸或者精氨酸，如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示。本发明证实凝血因子IX突变体Glu340Lys或Glu340Arg可以提升凝血因子IX活性，而且还可以与其他突变体协同提升凝血因子IX活性，具有很好的基因治疗和替代治疗前景。
本发明公开了一种MMP11重组蛋白，所述的重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的重组蛋白密码子优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明同时公开了一种检测MMP11蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括有效量的重组蛋白和有效量的特异性结合所述重组蛋白的单克隆抗体以及配套的检测试剂，所述的特异性结合所述重组蛋白的单克隆抗体为单克隆抗体1B2、单克隆抗体4C8，其中单克隆抗体1B2、单克隆抗体4C8的重链可变区序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；单克隆抗体1B2、单克隆抗体4C8的轻链可变区序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本发明制备的重组蛋白和单克隆抗体以及在此基础上制备的试剂盒，具有良好的敏感性和准确性，适合用于MMP11蛋白的检测。
