本发明提供了一种ω转氨酶及其突变体、重组质粒、基因工程菌及其应用。该ω转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示,ω转氨酶突变体由ω转氨酶的氨基酸序列突变得到,与SEQ ID No:2具有至少90%的同源性。本发明从瘤状伯克霍尔德菌中提取了ω转氨酶基因,实现了该ω转氨酶基因的异源表达,所产生的ω转氨酶菌株对一系列芳基烷基类底物展示了优良的催化活性。本发明还将该ω转氨酶进行突变获得一系列ω转氨酶突变体,通过将该ω转氨酶突变体偶联不同的酶,应用于生物酶法不对称合成(S)‑1‑苯丙胺和其它手性胺类产品的生产中,具有经济环保、手性选择性高的特点,为转氨酶的工业应用提供了一个潜在的选择
本发明提供了R型ω‑转氨酶,包括ω‑转氨酶TA‑R1、ω‑转氨酶TA‑R2或ω‑转氨酶TA‑R3的至少一种,所述ω‑转氨酶TA‑R1的氨基酸序列如Seq ID NO:1所示,ω‑转氨酶TA‑R2的氨基酸序列如Seq ID NO:2所示,ω‑转氨酶TA‑R3的氨基酸序列如Seq ID NO:3所示。本发明提供的R型的ω‑转氨酶TA‑R1、TA‑R2、TA‑R3及其基因,解决了现有手性胺不对称生物合成技术中R型的ω‑转氨酶资源相对不足的问题,并基于新酶资源开发了新的R型手性胺化合物不对称生物合成方法
本发明涉及标准品制备,具体讲,涉及一种重组人谷丙转氨酶蛋白标准品和重组人谷草转氨酶蛋白标准品及其制备方法。编码重组人谷丙转氨酶蛋白标准品的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,编码重组人谷草转氨酶蛋白标准品的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。本发明还涉及重组人谷丙转氨酶蛋白标准品或重组人谷草转氨酶蛋白标准品的制备方法,包括:目的基因的获得、构建基因表达菌株、目的蛋白的表达与纯化、基质血清的处理、标准品的评价、标准品的定值以及不确定度的评估。本发明通过基因重组的技术制备出人谷丙转氨酶和人谷草转氨酶标准品,可用于临床检验实验室以及试剂盒的质量控制。
本发明涉及一种转氨酶TSTA,所述转氨酶TSTA的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。本发明转氨酶TSTA的最适温度40℃,最适pH为9.0。在最适温度和最适pH下,本发明转氨酶TSTA对HFB1的降解率为100%。本发明转氨酶TSTA性质优良,该酶可以应用于农业、饲料和食品等工业,减少伏马毒素FB1对动物及人类健康的危害。
本发明公开了一种ω‑转氨酶突变体及其应用,所述ω‑转氨酶突变体是将SEQ ID NO.1所示野生型ω‑转氨酶氨基酸序列的第54位色氨酸、第411位精氨酸经单点或多点突变所得。相比野生型ω‑转氨酶,本发明的ω‑转氨酶突变体催化前手性酮生成手性胺的催化效率高,其中突变体R411A催化4‑(三氟甲基)苯乙酮的转化产率为野生型ω‑转氨酶的2.39倍,所得产物对映体过量值(enantiomeric