本发明提供了一种热稳定性得到改善的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶的突变体及其应用，具体地，本发明提供了一种突变的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶，所述突变的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶在野生型的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶的对应于SEQ ID NO.:1的第122位赖氨酸(K)、第195位甘氨酸(G)发生突变，本发明的突变的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶具有非常优异的热稳定性，此外，本发明的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶还具有很高的催化效率(高达29％)。
本发明公开了一种胞外分泌表达D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的枯草芽孢杆菌，以枯草芽孢杆菌为宿主，以质粒pST为表达载体，表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶。本发明通过构建D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的枯草芽孢杆菌分泌表达系统，胞外酶活达130.74U/mL，不仅实现D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的胞外分泌表达，且酶活高于现有报道的绝大多数D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶
本发明提供了一种催化活性得到提高的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶的突变体及其应用，具体地，本发明提供了一种突变的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶，所述突变的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶在包括选自下组的至少3个位点发生突变：在野生型的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶的对应于SEQ ID NO.:1的第73位天冬氨酸(D)、第111位酪氨酸(Y)、第188位天冬酰胺(N)、第250位甘氨酸(G)。本发明的突变的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶具有非常高的催化活性，此外，本发明的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶还具有很高的催化效率(高达29.6％)。
本公开涉及一种具有改良的己糖醛酸酯C4‑差向异构酶转化活性的己糖醛酸酯C4‑差向异构酶变异体、编码所述糖醛酸酯C4‑差向异构酶变异体的核酸和用它制造D‑塔格糖的方法。在己糖醛酸酯C4‑差向异构酶变异体中，由氨基酸序列SEQ ID NO：1组成的己糖醛酸酯C4‑差向异构酶(Hexuronate C4‑epimerase)的N端的酪氨酸(Y)‑403氨基酸残基发生突变。
