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[发明专利]一种基于双探针特异性分离的DNA杂交信息存储加密方法-CN202110809967.4有效
发明人：肖祖颖;张翼飞;王海华;赵椰;成鹏飞;刘翟 -专利权人：湖南科技大学
申请日： 2021-07-17 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： G16B20/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于双探针特异性分离的DNA存储加密方法，本发明包括一套带双荧光基团与限制性内切酶识别位点的DNA双探针链和限制性内切酶组合。其中，特定的限制性内切酶可将特定双探针链切开，将双探针分离。在DNA杂交存储信息读取过程中，如直接使用未经分离的双探针链，则因探针链上双荧光基团的存在而导致检测信号错误。该方法实施时，从双探针链组合中选取一组发给数据接收方，并通过另一保密途径将密钥(即正确的内切酶信息)发送。本发明实现了DNA存储技术硬加密，能有效提高安全性，促进该存储技术的应用。
一种基于探针特异性分离 dna 杂交信息存储加密方法

[发明专利]一种外源基因DNA片段克隆到质粒载体相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点的方法-CN201610219972.9有效
发明人：廖东庆;黄日波;李晓明;韦航;韦旭钦;王青艳 -专利权人：南宁中诺生物工程有限责任公司
申请日： 2016-04-07 - 公布日： 2019-01-11 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种外源基因DNA片段克隆到质粒载体相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点的方法。质粒载体用限制性内切酶A\B、A\C分别酶切，得到AB、BA及AC、CA四个DNA片段。(B、C为质粒载体上相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点)。外源基因DNA片段用限制性内切酶B、C酶切，得到BC片段。本发明的优点是：使用本发明构建的质粒载体，无法进行双酶切的相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点也可作为克隆外源基因DNA片段的选择；另外，外源基因DNA片段连入载体的两个方向也可实现。
一种基因 dna 片段克隆质粒载体相邻重叠限制性内切酶酶切位点方法

[发明专利]一种基于编码链发卡结构添加与移除的DNA杂交信息存储加密方法-CN202110809958.5有效
发明人：肖祖颖;王海华;张翼飞;张东裔;成鹏飞;刘翟 -专利权人：湖南科技大学
申请日： 2021-07-17 - 公布日： 2022-07-08 - 主分类号： G16B50/40 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于编码链发卡结构特异性移除的DNA存储加密方法，包括一套带发卡结构与限制性内切酶识别位点的DNA编码链和限制性内切酶组合。其中，特定的限制性内切酶可将特定编码链的发卡结构切断，使编码区暴露而将其激活。在信息读取过程中，如果DNA编码链未经正确激活，则因发卡结构阻碍杂交而导致信息无法有效读取。该方法实施时，发送方从编码链组合中选取一组进行数据写入，将存储盘发给接收方，并用另一保密途径将密钥(即正确的内切酶信息)发送。
一种基于编码发卡结构添加 dna 杂交信息存储加密方法

[发明专利]细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1B基因多态分型新技术-CN201510618306.8在审
发明人：张文娟;荆春霞;吴赤蓬;杨光;纪卫东;胡大林;杨淋清;王威 -专利权人：暨南大学
申请日： 2015-09-24 - 公布日： 2016-02-03 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1B基因多态分型新技术。该方法包括：提供待测人基因组DNA；提供扩增人CDKN1B基因rs34329位点附近序列的上游引物和下游引物，其中下游引物具有错配碱基G；以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含SATTC片段的扩增产物，或含AGSATTC的扩增产物，其中S为人CDKN1B基因rs34329位点上的待定碱基C或G；提供限制性内切酶；利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及根据所得酶切产物来确定人CDKN1B基因rs34329位点上的待定碱基S是C还是G。
细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子基因多态分型新技术

[发明专利]一种利用RFLP鉴定蛋白与DNA结合互作的方法-CN201510214886.4在审
发明人：陈乐天;谢勇尧;张雅玲;赵秀彩;刘耀光 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2015-04-30 - 公布日： 2015-08-19 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用RFLP鉴定蛋白与DNA结合互作的方法：S1.分析待测DNA序列中所有的限制性内切酶位点；S2.选择限制性内切酶，使其能切割N个被靶蛋白覆盖的DNA序列（包括核心序列和侧翼序列）中自然存在的酶切位点或通过突变得到的酶切位点，和M个被靶蛋白覆盖的DNA序列以外的序列中存在的酶切位点；N>0；M≥0，M、N均为整数；S3.将待测DNA序列和靶蛋白混合反应后，加入选择的限制性内切酶进行酶切反应和结果判定：若出现M+1条条带
一种利用 rflp 鉴定蛋白 dna 结合方法

[发明专利]用于保护限制性内切酶BspQ I表达的保护基因、组成型质粒、重组菌及其应用-CN202310298412.7在审
发明人：谢渊;徐灿;王赛赛;罗漫杰;王梁;施婧妮 -专利权人：武汉瀚海新酶生物科技有限公司
申请日： 2023-03-24 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明涉及用于保护限制性内切酶BspQ I表达的保护基因、组成型质粒、重组菌及其应用。本研究对BspQ I限制性内切酶的表达进行大量研究，意外发现，M1.EarI基因和M2.EarI基因序列同时存在，且M1.EarI基因序列和M2.EarI基因序列的密码子适应指数均小于或者等于0.61，能够高效保护BspQ I限制性内切酶的重组表达。经试验验证，含有限制性内切酶BspQ I的编码序列和上述保护基因的重组菌能够可溶性表达具有较高酶活力的限制性内切酶BspQ I。
用于保护限制性内切酶 bspq 表达基因组成质粒重组及其应用

[发明专利]一种限制性内切酶介导的引物自生成滚环扩增方法-CN201910752112.5有效
发明人：梁兴国;安然;王晨儒;张伯颖;于姝婷 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2019-08-15 - 公布日： 2022-07-22 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明涉及一种限制性内切酶介导的引物自生成滚环扩增方法，包括如下步骤：1)将单链DNA在限制性内切酶的酶切位点进行硫代修饰；2)将硫代修饰后的单链DNA进行环化，得到硫代修饰的单链环状DNA；3)以步骤2)所得的硫代修饰的单链环状DNA为扩增模板，将扩增模板加入到含有待检测的目标DNA引物、具有链置换作用的DNA聚合酶和限制性内切酶的反应体系中进行多轮滚环扩增反应，目标DNA的分子信号被放大。本发明滚环扩增方法的有益效果是：1)利用限制性内切酶引发引物的自生成反应，构建出限制性内切酶介导的滚环扩增技术，可保证高扩增效率并拓宽其应用范围；操作简单、在恒温条件下即可实现核酸扩增反应。
一种限制性内切酶介导引物生成扩增方法

[发明专利]一种维生素A代谢相关基因突变位点的检测方法-CN201910860239.9在审
发明人：张立波;张宇 -专利权人：杭州云鼎基因生物科技有限公司
申请日： 2019-09-11 - 公布日： 2019-11-12 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种维生素A代谢相关基因突变位点的检测方法，涉及生物医学技术领域，通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。本发明所述的检测基因突变的方法与传统的SNP位点检测技术相比，可以在一个反应中实现多个SNP位点的检测，具有较高的应用价值。
目标片段单碱基延伸技术限制性内切酶检测双向延伸突变位点相关基因种维生素代谢单碱基延伸引物生物医学技术多重PCR扩增消化特异性引物测定目标基因突变基因位点质谱分析传统的目标位再利用单管核酸组对应用

[发明专利]一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法-CN201910860263.2在审
发明人：张立波;张宇 -专利权人：杭州云鼎基因生物科技有限公司
申请日： 2019-09-11 - 公布日： 2019-11-29 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法，涉及生物医学技术领域，通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸；本发明所述的检测基因突变的方法与传统的SNP位点检测技术相比，可以在一个反应中实现多个SNP位点的检测，具有较高的应用价值。
目标片段单碱基延伸技术限制性内切酶双向延伸检测单碱基延伸引物生物医学技术多重PCR扩增消化特异性引物测定目标基因突变基因位点突变位点相关基因质谱分析种维生素传统的目标位再利用单管核酸组对吸收应用

[发明专利]一种乳糖代谢能力相关基因突变位点的检测方法-CN201910860905.9在审
发明人：张立波;张宇 -专利权人：杭州云鼎基因生物科技有限公司
申请日： 2019-09-11 - 公布日： 2019-11-29 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种乳糖代谢能力相关基因突变位点的检测方法，涉及生物医学技术领域，通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸；本发明所述的检测基因突变的方法与传统的SNP位点检测技术相比，可以在一个反应中实现多个SNP位点的检测，具有较高的应用价值。
目标片段单碱基延伸技术限制性内切酶双向延伸检测单碱基延伸引物生物医学技术多重PCR扩增消化特异性引物测定目标基因突变基因位点乳糖代谢突变位点相关基因质谱分析传统的目标位再利用单管核酸组对应用

[发明专利]一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法-CN201910860291.4在审
发明人：张立波;张宇 -专利权人：杭州云鼎基因生物科技有限公司
申请日： 2019-09-11 - 公布日： 2019-11-15 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法，涉及生物医学技术领域；通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸；与传统的SNP位点检测技术相比，可以在一个反应中实现多个SNP位点的检测
目标片段单碱基延伸技术限制性内切酶检测双向延伸单碱基延伸引物生物医学技术多重PCR扩增消化特异性引物测定目标基因位点酒精代谢突变位点相关基因质谱分析传统的目标位再利用单管核酸组对工作量应用

[发明专利]单链寡核苷酸的制备方法-CN201810748988.8有效
发明人：梁兴国;曹娟娟;安然 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2018-07-10 - 公布日： 2021-08-24 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种单链寡核苷酸的制备方法，首先进行PEAR反应，模板为N’‑X’‑R’‑N’‑X’，R’为能产生3’突出末端的耐高温限制性内切酶的识别位点，N’为切刻内切酶的识别位点，经过高温变性、退火、延伸，得到延伸产物双链N’‑X’‑R’‑N’‑X’/N‑X‑R‑N‑X；利用能产生3’突出末端的限制性内切酶对双链进行切割，得到片段(N‑X/N’‑X’)；没有被酶切的双链作为模板直接参与下一轮的扩增，而且模板在退火过程中通过滑动作用而继续延伸然后进行切口引物延伸反应，切刻内切酶对PEAR酶切产物中的N‑X链进行切割，产生单链缺口，另外一条单链保持完整，随后聚合酶以缺口为起点进行延伸，切刻内切酶识别位点重新形成；同时通过置换下游的目的单链X，
寡核苷酸制备方法

[发明专利]一种限制性内切酶FseI的制备方法-CN202011480915.9有效
发明人：董娜;文伟彰 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2020-12-15 - 公布日： 2022-05-24 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种限制性内切酶FseI的制备方法。本发明提供一种重组表达载体，其含有一个或多个拷贝的限制性内切酶FseⅠ的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供含有该重组表达载体的重组大肠杆菌以及利用该重组大肠杆菌制备限制性内切酶FseⅠ的方法。本发明的制备方法能够在较短时间内制备得到高纯度、高活性的FseⅠ限制性内切酶，极大地降低了FseⅠ的制备成本，提高了制备效率。
一种限制性内切酶 fsei 制备方法

[发明专利]PCR高通量构建siRNA全位点分子库制备方法-CN200710024217.6有效
发明人：朱远源 -专利权人：百奥生物技术（南通）有限公司
申请日： 2007-07-23 - 公布日： 2008-02-20 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种PCR高通量构建siRNA全位点分子库制备方法，包括环状磷酸接头－1连接、单引物PCR扩增、III型限制性内切酶消化、粘性补平、与环状磷酸接头－2连接、双引物PCR扩增、FokI消化、克隆到表达载体等步骤本发明解决了以III型限制性内切酶介导的PCR高通量构建siRNA全位点分子库制备方法，由此产生的siRNA功能片断可控性的分布在19－23bp，这样可完全模仿体内自然的siRNA分子长度多样性，适用于RNAi基因治疗最佳靶点的筛选，克服了目前其它siRNA分子库构建方法存在的瓶颈和盲点。
pcr 通量构建 sirna 全位点分子制备方法

[发明专利]一种减少CRISPR-Cas9基因编辑中双链DNA片段串联的方法及其应用-CN202010721640.7在审
发明人：赵金龙;朱石磊;林梓凡 -专利权人：江苏集萃药康生物科技有限公司
申请日： 2020-07-24 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：所述方法包括如下步骤：使用限制性内切酶I和限制性内切酶II酶切载体得到双链DNA，再将所述双链DNA与CRISPR‑Cas9反应体系混合，转入待编辑的细胞中；其中，所述限制性内切酶I和限制性内切酶II为同向突出非同尾酶或非同向突出酶
一种减少 crispr cas9 基因编辑中双链 dna 片段串联方法及其应用