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[发明专利]用于表达限制性内切酶FspI的甲基化保护菌株的筛选方法-CN201710765015.0在审
发明人：张坤晓;韩挺翰;龚雪梅;许恒皓 -专利权人：江苏愚公生命科技有限公司
申请日： 2017-08-30 - 公布日： 2018-03-06 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：一种用于表达限制性内切酶FspI的甲基化保护菌株的筛选方法，通过甲基转移酶M.HhaI基因的获取，构建甲基转移酶M.HhaI的重组表达菌株，甲基化保护菌株的筛选，限制性内切酶FspI基因的获取，构建限制性内切酶FspI的重组表达菌株；再限制酶FspI的重组表达，获得限制酶FspI的重组表达菌株。本发明方法实现了限制酶FspI的高效重组表达；利用乳糖操纵子表达系统进行限制酶FspI的重组表达；抵抗限制酶FspI对宿主基因组DNA的酶切，相对无甲基化保护的表达系统，可稳定且高效进行限制酶FspI的重组表达；筛选出的M.HhaI甲基化保护菌株同样可应用于其他具有类似识别位点的限制酶的重组表达。
用于表达限制性内切酶 fspi 甲基化保护菌株筛选方法

[发明专利]一种快捷高通量的体外DNA序列修改方法-CN201310202937.2无效
发明人：李阳;李阳生;卢楠;李杨 -专利权人：武汉大学
申请日： 2013-05-28 - 公布日： 2013-09-04 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种体外DNA序列修改方法，该方法通过设计合成针对修改位置的突变引物，该突变引物的一端具有识别位点和酶切位点不重合的限制性内切酶识别序列，用待修改的目标DNA做模板，扩增并酶切，该突变引物包括：保护碱基、酶切识别位点、酶切位点、模板识别退火位点、DNA编辑位点，所述DNA编辑位点位于粘末端位点内或者模板识别退火位点内。本发明与常规PCR点突变法相比更为高效，快捷简单的DNA序列修改方法，此方法不仅适用于DNA的点突变，更适合于更大DNA片段的插入，缺失，修改。实现本方法的策略主要使用PCR扩增，typeIIS限制性内切酶酶切和连接酶连接来实现，该方法简捷，高效，每次可以对DNA上的多个位点同时进行突变。
一种快捷通量体外 dna 序列修改方法

[发明专利]一种重组载体CAR-CD244-antiPSMA的制备方法-CN201810984124.6有效
发明人：顾雨春;尹乐 -专利权人：国健呈诺生物科技（北京）有限公司
申请日： 2017-03-31 - 公布日： 2021-09-07 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组载体CAR‑CD244‑antiPSMA的制备方法，包括以下步骤：步骤1、将特异性抗体编码基因使用末端带有BfuAI限制性内切酶识别位点的引物进行PCR扩增；所述特异性抗体编码基因序列为PSMA抗体的部分序列，为序列表序列3；步骤2、将步骤1的PCR产物分别进行纯化；步骤3、将步骤2纯化的PCR产物在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切，并同时将含有改造的CD244骨架的克隆载体在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切；步骤4、将酶切后产物进行纯化；步骤5、将纯化后的产物按抗体片段与含有改造的CD244骨架的克隆载体摩尔比为3:1配比后，使用T4连接酶进行连接、转化、涂板、挑取单克隆提取质粒测序
一种重组载体 car cd244 antipsma 制备方法

[发明专利]一种重组载体CAR-CD244-antiCD19的制备方法-CN201810984136.9有效
发明人：顾雨春;尹乐 -专利权人：国健呈诺生物科技（北京）有限公司
申请日： 2017-03-31 - 公布日： 2021-09-07 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组载体CAR‑CD244‑antiCD19的制备方法，包括以下步骤：步骤1、将特异性抗体编码基因使用末端带有BfuAI限制性内切酶识别位点的引物进行PCR扩增；所述特异性抗体编码基因序列为CD19抗体的部分序列，为序列表序列2；步骤2、将步骤1的PCR产物分别进行纯化；步骤3、将步骤2纯化的PCR产物在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切，并同时将含有改造的CD244骨架的克隆载体在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切；步骤4、将酶切后产物进行纯化；步骤5、将纯化后的产物按抗体片段与含有改造的CD244骨架的克隆载体摩尔比为3:1配比后，使用T4连接酶进行连接、转化、涂板、挑取单克隆提取质粒测序
一种重组载体 car cd244 anticd19 制备方法

[发明专利]质粒载体-CN201910600065.2在审
发明人：薛博夫;杨银辉;单骁越;刘杰;马墨 -专利权人：深圳市深研生物科技有限公司
申请日： 2019-07-04 - 公布日： 2019-11-12 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本文中提供一种基础质粒载体，所述基础质粒载体的功能元件按5’端到3’端顺序由多克隆位点序列、用于原核细胞的抗性基因序列及其启动子和Ori序列组成，所述多克隆位点序列包含多个哺乳动物细胞稀有的限制性内切酶位点，所述多克隆位点序列按5’端到3’端顺序至少包括SpeI位点和AvrII位点或至少包括MluI位点和AscI位点，在至少包括SpeI位点和AvrII位点的情况下，AvrII位点不是所述多克隆位点序列中的最后一个限制性内切酶位点，在至少包括MluI位点和AscI位点的情况下，AscI位点不是所述多克隆位点序列中的最后一个限制性内切酶位点，并且在所述基础质粒载体中，除了Ori序列和用于原核细胞的抗性基因序列及其启动子以外，不存在来自原核生物的调控序列
位点多克隆位点序列质粒载体限制性内切酶位点抗性基因序列原核细胞启动子哺乳动物细胞调控序列功能元件原核生物

[发明专利]一种制备限制性内切酶类产品的方法-CN202111067406.8在审
发明人：朱化星;邹媛华;汤玉洁;徐志豪;颜怀肖 -专利权人：苏州近岸蛋白质科技股份有限公司
申请日： 2021-09-13 - 公布日： 2021-11-16 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备限制性内切酶类产品的方法，涉及生物技术领域。本发明公开的制备限制性内切酶的方法采用表达载体改造实现真核表达细胞作为宿主细胞表达生产限制性内切酶。本发明提供的制备方法通过采用真核表达细胞共转甲基转移酶保护表达生产限制性内切酶，省略了原核表达系统生产限制性内切酶过程中甲基化保护菌株的筛选制备过程，本发明真核细胞培养产物经过简单的纯化工艺即可获得高产的限制性内切酶本发明为限制性内切酶在mRNA等大量需求的技术领域应用提供了便利，克服了传统制备方法中表达菌株筛选过程复杂等问题。
一种制备限制性内切酶类产品方法

[发明专利]一种BAC末端测序的方法-CN201510778451.2在审
发明人：李广存;金黎平;杨煜;郭晓;杨晓慧;徐建飞;马伟清;庞万福;卞春松;段绍光;刘杰 -专利权人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所;山东省农业科学院蔬菜花卉研究所;百博明创（北京）生物科技有限公司
申请日： 2015-11-13 - 公布日： 2016-02-24 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明的方法包括如下步骤：1)将目的片段与克隆载体连接，得到重组载体；2)用限制性内切酶酶切所述重组载体，回收大于所述克隆载体的线性DNA片段，得到含有目的片段2个末端的DNA片段；所述目的片段上至少含有2个所述限制性内切酶的酶切识别位点，且在所述克隆载体上没有所述限制性内切酶的酶切识别位点；3)连接所述含有目的片段2个末端的DNA片段，使其环化形成含有目的片段末端的质粒，测序所述质粒，实现目的片段的末端测序
一种 bac 末端方法

[发明专利]接头组合物及其应用-CN201810473515.1有效
发明人：宗亮;黄斌斌;陈成;田志坚;唐美芳 -专利权人：武汉华大医学检验所有限公司
申请日： 2018-05-17 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12Q1/6876 文献下载
摘要：该接头组合物包括：第一接头；以及第二接头，其中，所述第一接头的3’末端序列与所述第二接头的5’末端序列在所述第一接头和第二接头自连时形成限制性内切酶识别位点。根据本发明实施例的接头组合物在自连时可以被限制性内切酶特异性切割和降解，进而将该接头组合物应用于文库构建时，自连的接头在限制性内切酶的作用下无法进入下游实验，有效提高了测序数据的利用率。
接头组合及其应用

[发明专利]一种SFRP2甲基化检测试剂盒及其应用-CN202110012090.6在审
发明人：徐宏;杨浩;徐高连;古宏晨 -专利权人：上海慧众同康生物科技有限公司
申请日： 2021-01-06 - 公布日： 2022-07-08 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明提供了一种SFRP2甲基化检测试剂盒及其应用，所述试剂盒包括甲基化依赖型限制性内切酶、捕获寡核苷酸和通用引物；所述捕获寡核苷酸从5’端到3’端依次包括第一通用序列、折叠序列和结合捕获序列；所述折叠序列与SFRP2甲基化位点经甲基化依赖型限制性内切酶酶切后的5’末端序列至少部分相同；所述结合捕获序列与所检测的SFRP2甲基化位点所在的片段区域特异性结合。本发明基于甲基化依赖型限制性内切酶和通用引物荧光定量PCR技术，不需要重亚硫酸盐转化，实现了准确特异的SFRP2甲基化检测。
一种 sfrp2 甲基化检测试剂盒及其应用

[发明专利]一种表达限制性内切酶SapⅠ的重组表达载体、重组菌及表达纯化方法-CN202310681137.7在审
发明人：薛愿超;王若言;李生;赵幸会 -专利权人：中国科学院生物物理研究所
申请日： 2023-06-09 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达限制性内切酶SapⅠ的重组表达载体、重组菌及表达纯化方法，属于外源表达技术领域。本发明公开了表达限制性内切酶SapⅠ的重组表达载体，以及表达限制性内切酶SapⅠ的重组菌，利用所述重组菌生产限制性内切酶SapI。本发明的制备方法能够在较短时间内制备得到高纯度、高活性的SapⅠ限制性内切酶，极大地降低了SapⅠ的制备成本，提高了制备效率。
一种表达限制性内切酶 sap 重组载体纯化方法

[发明专利]鉴定文心兰品种的CAPS分子标记、筛选方法与应用-CN202110903428.7有效
发明人：孔兰;钟淮钦;樊荣辉;林榕燕;方能炎;林兵;罗远华;黄敏玲 -专利权人：福建省农业科学院作物研究所
申请日： 2021-08-06 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种鉴定文心兰品种的CAPS分子标记，包括SEQIDNO.1～SEQIDNO.12所示的序列，序列的筛选方法包括：基于文心兰6个品种的转录组数据获得SNP位点，并寻找可引起限制性内切酶识别位点改变的SNP位点，根据SNP位点的不同设计CAPS引物对；提取文心兰的基因组DNA；以所述CAPS引物对文心兰不同品种基因组DNA进行PCR扩增，获得目的片段；以限制性内切酶对所述目的片段进行酶切，并对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测和酶切产物多态性分析，如果品种间存在酶切产物多态性，则该SNP位点可作为鉴定文心兰品种的CAPS标记，该分子标记可应用于鉴定文心兰品种中。
鉴定文心兰品种 caps 分子标记筛选方法应用

[发明专利]限制性内切酶和核酸外切酶Ⅲ的无标记荧光检测DNA甲基化和甲基转移酶活性的检测方法-CN201410220070.8有效
发明人：卫伟;高春燕;刘松琴 -专利权人：东南大学
申请日： 2014-05-22 - 公布日： 2014-08-20 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开一种基于限制性内切酶HpaⅡ和核酸外切酶Ⅲ的DNA甲基化及甲基化转移酶活性的检测方法。制备了无标记的DNA探针，该探针序列包含了限制性内切酶的切割位点和甲基化的CpG位点,通过该无标记的DNA探针与目标DNA杂交，用甲基化转移酶进行甲基化处理，再用限制性内切酶HpaⅡ的特异性切割以及作用于双链DNA的3'→5'外切酶活性的核酸外切酶Ⅲ作用，然后利用荧光信号分子噻唑橙对单双链DNA不同信号实现检测甲基化及甲基转移酶活性的目的。本发明无需制备复杂材料和标记DNA探针，可避免材料制备及标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。
限制性内切酶核酸外切酶标记荧光检测 dna 甲基化甲基转移酶活性方法

[发明专利]一种用BccI鉴定人乳腺癌RAD51基因rs7180135多态性的方法-CN201610250091.3在审
发明人：宋春花;夏宗江;蔡建有;侯瑞生;曹晶晶;闫芮;彭瑞 -专利权人：郑州大学
申请日： 2016-04-20 - 公布日： 2016-06-22 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种用BccI鉴定人乳腺癌RAD51基因rs7180135多态性的方法，采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法，是采用聚合酶链式反应扩增目的DNA片段，然后将待检测的DNA片段用限制性内切酶酶切，限制性内切酶识别并切割特异的序列，然后将酶切后的产物进行电泳，再由限制酶图谱分析此段序列的特异切位点，藉由片段的多样性来比对不同来源基因序列的差异性。简而言之，就是先PCR扩增相应目的片断，而后进行限制性内切酶切反应，电泳后观察比较限制性图谱来分析序列之间的差异。此方法重复性好，操作较简单，成本低，酶切结果容易辨识。因此，本发明的目的是提供一种操作简单、成本低、适用范围广泛的检测人乳腺癌易感基因RAD51rs7180135多态性的方法及检测试剂盒。
一种 bcci 鉴定人乳腺癌 rad51 基因 rs7180135 多态性方法

[发明专利]一种双荧光素酶报告基因载体、其构建方法及其应用-CN202211596591.4在审
发明人：付元磊;李亚平;于文君;曹海强;于海军;杜雅婷;徐梅霞;李燕 -专利权人：烟台药物研究所
申请日： 2022-12-12 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明涉及一种双荧光素酶报告基因载体、其构建方法及其应用，属于基因工程技术领域；该双荧光素酶报告基因载体，其为在psiCHECK‑2质粒的海肾荧光素酶3’UTR区域上增加了IIS型限制性内切酶的位点、ccdB基因以及氯霉素抗性基因的psiCHECK‑CcdB载体；所述IIS型限制性内切酶的位点至少有2个。本发明提供的双荧光素酶报告基因载体具有连接效率更高、操作更简单、可一次性实现多片段组装的优势。
一种荧光报告基因载体构建方法及其应用

[发明专利]一种突变型限制性内切酶BsaI及其制备方法和应用-CN201911408602.X有效
发明人：张坤晓;程槐旭;胡梦竹;燕东平;聂尚海 -专利权人：莫纳（武汉）生物科技有限公司
申请日： 2019-12-31 - 公布日： 2021-07-06 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明提供了一种突变型限制性内切酶BsaI及其制备方法和应用，所述突变型限制性内切酶BsaI具有(I)、(II)或(III)所示的氨基酸序列中任意一个：(I)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；(II)与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有≥98％同源性的多肽；(III)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经过1～20个氨基酸残基的取代、缺失或添加而获得的氨基酸序列，且获得的氨基酸序列具有限制性内切酶的活性本发明通过对野生型限制性内切酶BsaI及进行多位点氨基酸突变，得到突变型限制性内切酶BsaI，所得酶稳定性好，酶活和纯度满足市场需要，且价格低廉。
一种突变型限制性内切酶 bsai 及其制备方法应用