本发明公开了一种利用酵母菌重组表达限制性内切酶MlyI的方法，具体为：将含有如SEQ ID NO.2所示序列的片段连接至质粒中，再转化至大肠杆菌感受态细胞，挑取单克隆菌落并抽提重组质粒，将重组质粒线性化后转化至酵母感受态细胞中本发明直接以酵母宿主表达生产限制性内切酶，并且MlyI为可胞外分泌型表达于培养基中；该方法制备的限制性内切酶MlyI产量和酶活性较高，且生产成本低，可以快速实现工业化转产，为限制性内切酶对高质量要求和大量要求的制药
PCR-RFLP方法，该方法的PCR扩增采用的引物是由ITS正向引物和反向引物组成，所述的正向引物的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，反向引物的碱基序列如SEQ ID NO：2所示；PCR扩增产物纯化后，分别用限制性内切酶MluC Ⅰ、限制性内切酶Nla Ⅳ酶切，在MluC Ⅰ酶切图谱和NlaⅣ酶切图谱中，文山三七与屏边三七酶切图谱完全不同，可鉴别样品是否为文山三七、是否混入了屏边三七。本发明首次成功建立了文山三七、屏边三七的限制性内切酶酶切图谱，可以准确鉴别文山三七和屏边三七且快速，克服了感官评审难以鉴别文山三七原料的真伪问题。
本发明公开了一种AscI限制性内切酶的制备方法，包括以下步骤：步骤一、合成AscI.M‑R限制‑修饰系统的编码基因，构建至原核表达载体，获得重组载体，所述AscI.M‑R限制‑修饰系统编码基因的DNA序列如SEQ ID NO:5所示；步骤二、将重组载体转入大肠杆菌感受态细胞中，获得重组菌；步骤三、AscI限制性内切酶的诱导表达与纯化。本发明通过密码子优化来调整修饰酶与限制酶的表达量，只需构建一个质粒即可实现两种蛋白等量并同步表达，能够在较短时间内制备得到高纯度、高活性的AscI限制性内切酶，操作流程简化，成本低，成功率高。
