本发明公开了一种PIMT表达质粒、扩增引物、构建方法及应用。所述PIMT表达质粒的序列如SEQ ID NO:1所示。所述PIMT表达质粒的构建方法包括:根据人源PCMT、mRNA和pcDNA3.1(‑)‑Flag‑GFP质粒提供的酶切位点,进行酶切位点选择,所述PCMT的酶切位点包括XhoI和BamHI,获得PIMT表达质粒。用于PIMT表达质粒的扩增引物的序列分别如SEQ ID NO:2~SEQ ID NO:7所示。本发明通过基因技术构建了PIMT表达质粒,可使PIMT在RA‑FLS中的表达量提高,检测量提高,可作为药物用于调控RA‑FLS的凋亡和增殖,实现对类风湿性关节炎的治疗。
本发明提供了一种包括虾青素合成酶融合基因、无筛选标记基因NPTⅡ的重组质粒、重组菌及应用,属于基因工程育种技术领域;所述虾青素合成酶融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述重组质粒以pBI121作为原始质粒;所述重组质粒中删除了筛选标记基因NPTⅡ。本发明将四个虾青素合成关键酶基因用2A短肽序列连接,能够简化重组质粒(表达载体)的构建,并实现各基因的协同表达。另外,本发明的重组质粒中删除了筛选标记基因NPTⅡ,增加了重组质粒用于转基因的安全性。
本发明提供了一种氯代脂肪烃降解性质粒pRC11,其物理图谱见图3,其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,本发明质粒从实验室自行建成的工业废气生物净化微生物资源菌种库中筛选获得。本发明的有益效果主要体现在:提供一种氯代脂肪烃降解性质粒——pRC11,建立了质粒的物理图谱,该质粒遗传背景非常清晰,可利用该质粒进行分子育种,培育高效多功能质粒菌,提高以二氯甲烷为代表的卤代烃类有机污染物的生物降解效果