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[发明专利]可进行单分子核酸扩增的颗粒、其制备方法及应用-CN201110291304.4有效
发明人：陆祖宏;杨琦;葛芹玉;潘旻;涂景 -专利权人：东南大学
申请日： 2011-09-29 - 公布日： 2012-07-11 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及可进行单分子核酸扩增的颗粒、其制备方法及应用。所述可进行单分子核酸扩增的颗粒，表面结合有多条单链核酸和一条双链核酸，所述双链核酸通过其中一条序列的一端与颗粒表面连接，并可作为双链接头与待测序核酸、以及末端双链接头顺序连接，然后变性形成一条单链核酸分子模板，所述单链核酸分子模板可以以颗粒表面的单链核酸作为引物进行有效PCR扩增，在颗粒表面形成多条双链测序模板，再将所述多条双链测序模板转化为多条单链测序模板后用于检测待测序核酸的信息。所述可进行单分子核酸扩增的颗粒的制备方法为：(1)使单链核酸连接到所述颗粒表面；(2)使所述每颗颗粒表面至多连接一条双链核酸。
进行分子核酸扩增颗粒制备方法应用

[发明专利]一种环形阻滞探针、含有所述环形阻滞探针的扩增阻碍突变系统及其应用-CN202011228392.9有效
发明人：程雪涛;王洁;焦柔;张亚飞 -专利权人：迈杰转化医学研究（苏州）有限公司
申请日： 2020-11-06 - 公布日： 2021-02-05 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明提供了一种环形阻滞探针、含有所述环形阻滞探针的扩增阻碍突变系统及其应用，所述环形阻滞探针按照5’‑3’方向为第一结合序列、环状序列和第二结合序列，所述第一结合序列和第二结合序列互为反向重复序列；所述环形阻滞探针的3’端末1位碱基与模板的野生型位点互补；所述环形阻滞探针的3’末端修饰有阻滞基团；所述环形阻滞探针的环状序列与模板互补。本发明向扩增阻碍突变系统中加入环形阻滞探针，在PCR开始前环形阻滞探针优先结合在野生型模板上，对野生型模板进行封闭，随后采用特异性引物对突变模板进行PCR扩增，显著提高了PCR扩增的特异性，扩大了线性范围
一种环形阻滞探针有所扩增阻碍突变系统及其应用

[发明专利]一种IL-6基因的快速扩增检测方法-CN201810865421.9在审
发明人：黄韫平;王涛;梁志宝 -专利权人：新开源鸿辉(广州)生物科技有限公司
申请日： 2018-08-01 - 公布日： 2018-12-07 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明公开了一种IL‑6基因的快速扩增检测方法，所述扩增方法在同一扩增体系中同时扩增IL‑6基因的174位点和597位点，174位点作为扩增模板的序列如序列表SEQ ID NO:1所示，597位点作为扩增模板的序列如序列表本发明采用多重PCR的扩增方法，同时扩增IL‑6的多个重要SNP位点，且可以根据实际需要灵活选择扩增的位点组合，可以起到一盒多用的作用，试剂盒中的引物特异性高，错配率低，引物长度和T_m值设计合理，扩增产物便于检测分离。一次扩增多条目的产物，不仅大大提高了扩增效率，降低了扩增成本。这种检测试剂盒可以扩展延伸到其他的SNP位点检测中，具有良好的推广价值。
扩增位点扩增检测扩增模板引物特异性检测试剂扩增产物扩增体系扩增效率灵活选择一盒多用多重PCR 试剂盒基因错配引物条目检测延伸

[发明专利]一种区分病原体DNA/RNA的核酸检测方法及试剂盒-CN202310173971.5在审
发明人：丁佳女;郑宜文;赵梦茹 -专利权人：杭州百迈生物股份有限公司
申请日： 2023-02-28 - 公布日： 2023-06-09 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种区分病原体DNA/RNA的核酸检测方法及试剂盒，在引物5’端引入一段人工序列以提高引物特异性，所述人工序列与模板不互补，所述人工序列与引物3’端序列互补形成茎环结构，当模板与引物3’端不完全互补时引物以茎环结构存在，当模板与引物3’端完全互补时，茎环结构解链进行逆转录；在扩增RNA时，使合成的cDNA带有所述人工序列，在扩增时引物与cDNA完全互补，引物3’端有7‑11个碱基与模板互补，引物3’端使用脱氧尿嘧啶替代脱氧胸腺嘧啶碱基本发明在一定的退火温度下，在扩增DNA时由于引物结合的Tm值较低使DNA无法扩增，而在扩增RNA时，由于逆转录引物5’端带有人工的序列，使合成的cDNA带有该人工序列，在扩增时引物可与cDNA完全互补，
一种区分病原体 dna rna 核酸检测方法试剂盒

[发明专利]一种单管原位嵌套式聚合酶链式反应方法及其应用-CN200510025634.3无效
发明人：徐定邦;谢文凯;府雷宇 -专利权人：徐定邦;徐文慧
申请日： 2005-04-30 - 公布日： 2006-11-08 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：内套引物与原始模板的最高允许退火温度低于第一轮反应的退火温度，而内套引物与匹配模板的解链温度高于外套引物的最高允许退火温度。控制第一轮PCR循环的退火温度使外套引物能退火扩增但内套引物不能退火扩增。提高第二轮PCR循环的退火温度使外套停止退火扩增而内套引物能退火扩增。在第一和第二轮之间有二至若干循环退火温度低于二者的过渡阶段，使内套引物能与原始模板退火扩增形成匹配模板启动第二轮反应。整个PCR反应过程中不开管盖反应管也不移离基因扩增仪。
一种原位嵌套聚合链式反应方法及其应用

[发明专利]用于基因组应用和治疗应用的核酸分子的克隆复制和扩增的系统和方法-CN202110947582.4在审
发明人： M·L·梅兹可;C·A·威尔 -专利权人：雷德沃特生物科学公司
申请日： 2015-04-11 - 公布日： 2021-10-22 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本申请涉及用于基因组应用和治疗应用的核酸分子的克隆复制和扩增的系统和方法。具体提供了复制或扩增至少一个核酸分子的方法，包括：(a)使多个发夹结构连接到至少一个双链核酸分子的每一个末端以形成至少一个哑铃状模板，其中该双链核酸分子从样品中分离具有大于5千碱基的最小长度；(b)使该至少一个哑铃状模板在复制方法中与至少一种基本上互补的引物接触，或者在扩增方法中与至少两种基本上互补的引物接触；其中该至少一种基本上互补的引物与至少一种基质连接；和(c)在与该至少一种基本上互补的引物接触的该至少一个哑铃状模板上进行滚环复制以形成至少一个复制的或扩增的哑铃状模板本申请还涉及检测至少一个复制的或扩增的哑铃状模板的方法。
用于基因组应用治疗核酸分子克隆复制扩增系统方法

[发明专利]一种基于高通量测序检测人RNA TCR免疫组库的方法及其专用引物组-CN201811611087.0在审
发明人：姬晓雯;冯越 -专利权人：北京迈基诺基因科技股份有限公司
申请日： 2018-12-27 - 公布日： 2019-03-19 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明还保护一种方法：(1)以待测样本的RNA为模板，采用引物组中的引物组一进行PCR扩增；(2)以步骤(1)的产物为模板，采用引物组中的引物组二进行PCR扩增，回收扩增产物；(3)以步骤(3)的扩增产物为模板，采用测序平台的通用上游引物和测序平台的通用下游引物进行PCR扩增，回收扩增产物，即为DNA文库。本发明中提供的引物组可以实现在一管中进行多重PCR扩增。采用本发明提供的引物组或方法获得人RNA TCR免疫组库，具有灵敏度高、特异性高、可重复性高、实验成本低的优势。
引物组扩增产物免疫组库高通量测序测序平台专用引物通用下游引物多重PCR扩增待测样本可重复性上游引物实验成本回收灵敏度检测引物通用

[发明专利]实时荧光恒温指数扩增方法-CN201510604571.0有效
发明人：黄庆;府伟灵 -专利权人：中国人民解放军第三军医大学第一附属医院
申请日： 2015-09-22 - 公布日： 2018-10-30 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明提供了一种实时荧光恒温指数扩增方法，使用荧光标记的“茎‑环‑尾”结构寡核苷酸信号扩增模板，或者荧光标记的单纯线性结构寡核苷酸信号扩增模板，能够在恒定温度条件下，在具有切割双链核酸分子中一条链的缺口剂和具有链替换活性的DNA聚合酶共同作用下，重复进行“切割‑延伸‑链置换”过程，以指数形式扩增靶分子特异性寡核苷酸且能释放荧光信号。通过不同靶分子特异性寡核苷酸对应的信号扩增模板释放的荧光信号种类和丰度，可在单个反应管、检测池或检测孔中实现多个靶分子的平行检测，靶分子特异性寡核苷酸扩增10⁶倍以上，能够有效解决现有恒温扩增技术无法在单个检测体系中同时检测多种靶分子的技术难题
实时荧光恒温指数扩增方法

[发明专利]快速检测柑橘全爪螨拟除虫菊酯抗性的分子标记方法-CN201510038036.3在审
发明人：王进军;蒋玄赵;丁天波;廖重宇 -专利权人：西南大学
申请日： 2015-01-26 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明一种快速检测柑橘全爪螨拟除虫菊酯抗性的分子标记方法，包括如下步骤1)制备PCR扩增模板以单头柑橘全爪螨为样品；2)进行巢式PCR扩增第一轮PCR以步骤1制备的样品作为扩增模板，使用引物A、B进行PCR扩增；第二轮PCR以第一轮PCR产物作为扩增模板，使用引物C、D进行PCR扩增；3)酶切取第二轮PCR产物用BclI酶进行酶切反应；4)电泳将步骤3中酶切后的反应液用1.5％的琼脂糖凝胶进行电泳，观察307bp
快速检测柑橘全爪螨拟除虫菊抗性分子标记方法

[发明专利]循环肿瘤DNA靶向基因高通量检测文库及其检测方法和应用-CN201610380008.4在审
发明人：李志广;马兆奎;刘强;陈骏;吕德康;陈志盛;张霞;张宇 -专利权人：大连医科大学
申请日： 2016-06-01 - 公布日： 2017-12-08 - 主分类号： C40B40/08 文献下载
摘要：以肿瘤患者循环体液为生物样本，提取低浓度游离核酸，并以其生物样本的为样品模板，利用多重PCR形式扩增样品模板的靶向基因外显子，而后对获得的扩增子进行末端修复及3’端连接“A”碱基，修饰后扩增子连接Illumina测序接头，再利用含有index的引物进行文库PCR，扩增产物即为循环肿瘤DNA靶向基因突变多样化的文库。本发明以肿瘤患者离体循环体液为生物样本实现无创检测；以低浓度游离核酸为模板高灵敏检测；以多重PCR形式对多个靶向基因外显子同时扩增增加检测效率；构建扩增子文库、高通量测序及数据分析，可以极大的降低检测成本
循环肿瘤 dna 靶向基因通量检测文库及其方法应用

[发明专利]一种硝化细菌的PCR鉴定方法-CN201910781333.5在审
发明人：车树刚;马娜娜;马韵升;吴文雷;杨传伦;傅英旬;孔凡衡;魏征;韩立霞;吴书超 -专利权人：黄河三角洲京博化工研究院有限公司
申请日： 2019-08-22 - 公布日： 2019-11-08 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，提供了一种硝化细菌的PCR鉴定方法，以硝化细菌的专属特征性基因—亚硝酸还原酶基因(NiR)为模板设计合成一对特异性引物，并以硝化细菌基因组DNA为模板进行PCR扩增，通过对PCR扩增条件优化，然后对PCR扩增产物进行琼脂糖水平电泳，根据电泳泳道中条带的有无及大小，判断该细菌菌株是否属于硝化细菌或者混合菌群中是否含有硝化细菌。本方法是以用亚硝酸还原酶基因为模板设计的特异引物为PCR扩增引物，实验结果特异性强，实验操作简单，结果可靠性高，并通过优化PCR扩增条件缩短了硝化细菌的鉴定周期，较常规PCR扩增时间缩短了45％，为硝化细菌种群的鉴定提供了一个方便
硝化细菌模板设计生物工程技术领域亚硝酸还原酶基因亚硝酸还原酶结果可靠性特异性引物基因组DNA 电泳泳道混合菌群鉴定周期时间缩短实验操作水平电泳特异性强特异引物条件优化细菌菌株常规PCR 琼脂糖特征性扩增条带种群合成基因优化

[发明专利]一种BCR或TCR重排序列模板池及其应用-CN202211511742.1在审
发明人：顾凯丽;刘佳;王霞;尹松松;蒋泽宇;张亚飞 -专利权人：迈杰转化医学研究（苏州）有限公司
申请日： 2022-11-29 - 公布日： 2023-03-17 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明公开了一种BCR或TCR重排序列模板池及其应用。本发明设计分析多重引物组的扩增偏好性的方法，能够大规模地验证多重扩增体系对每种重排序列的检出能力及检测均一性，鉴定扩增较差或有明显扩增偏好的序列，从而锁定需要进行优化的引物对，有利于精准快速地构建均一性较高的多重扩增重排检测体系，成本低，可操作性强；同时，设计特定组成的重排序列模板池，能够有效应用于分析多重引物组的扩增偏好性，适用范围广，并依托高通量DNA合成技术构建模板池，可以同时合成大量的DNA分子，成本低，并且所有的DNA
一种 bcr tcr 重排序列模板及其应用

[发明专利]用于测量和校准多重PCR反应中的扩增偏倚的组合物和方法-CN201710813227.1有效
发明人： H·S·罗宾斯;C·S·卡尔森;R·J·利文斯顿;R·O·埃默森;A·谢伍德 -专利权人：适应生物技术公司
申请日： 2013-05-08 - 公布日： 2021-03-30 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明描述了用于使一组高度异质的寡核苷酸引物的DNA扩增效率标准化的组合物和方法，所述寡核苷酸引物通常可用于扩增一组异质的DNA模板，所述DNA模板含有编码T细胞受体(TCR)或免疫球蛋白(IG)的重排淋巴样细胞本发明所公开的实施例可用于克服在利用扩增引物亚组过程中的非期望的偏倚，所述非期望的偏倚导致对扩增产物进行多重高通量测序以定量样品中的独特TCR或Ig编码基因组时的不精确。本发明提供了供用作扩增引物组的校准用标准品的组合物，所述组合物包含基本上等摩尔量的多种多样性的模板寡核苷酸。本发明还提供了用于在扩增期间识别和修正偏倚引物效率的方法。
用于测量校准多重 pcr 反应中的扩增偏倚组合方法

[发明专利]直用型高GC含量核酸PCR扩增混合试剂-CN201610237453.5有效
发明人：刘翠;刘涛 -专利权人：青岛海大蓝科生物科技有限公司
申请日： 2016-04-15 - 公布日： 2017-07-11 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种适用于高GC含量核酸扩增的直用型PCR扩增混合试剂。该混合试剂包括DNA聚合酶、KCl、Tris‑HCl、MgCl2、dNTPs和甘油，溶剂为ddH2O。在某些优选的实施方案中，该混合试剂中还包括增强剂，可对只含2个拷贝的模板进行有效扩增，所述的增强剂为DMSO、NH4Cl、7H2O·MgSO4、甜菜碱、昆布氨酸、龙虾肌碱、乙二醇和山梨醇中的一种或多种。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染；同时，由于体系内含有增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。该混合试剂能够实现对GC含量超过85％的核酸模板的PCR扩增。
直用型高 gc 含量核酸 pcr 扩增混合试剂

[发明专利]用于测量和校准多重PCR反应中的扩增偏倚的组合物和方法-CN201380022986.6有效
发明人： H·S·罗宾斯;C·S·卡尔森;R·J·利文斯顿;R·O·埃默森;A·谢伍德 -专利权人：适应生物技术公司
申请日： 2013-05-08 - 公布日： 2017-10-03 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明描述了用于使一组高度异质的寡核苷酸引物的DNA扩增效率标准化的组合物和方法，所述寡核苷酸引物通常可用于扩增一组异质的DNA模板，所述DNA模板含有编码T细胞受体(TCR)或免疫球蛋白(IG)的重排淋巴样细胞本发明所公开的实施例可用于克服在利用扩增引物亚组过程中的非期望的偏倚，所述非期望的偏倚导致对扩增产物进行多重高通量测序以定量样品中的独特TCR或Ig编码基因组时的不精确。本发明提供了供用作扩增引物组的校准用标准品的组合物，所述组合物包含基本上等摩尔量的多种多样性的模板寡核苷酸。本发明还提供了用于在扩增期间识别和修正偏倚引物效率的方法。
用于测量校准多重 pcr 反应中的扩增偏倚组合方法