本发明提供的鉴定待测样品中结核杆菌的耐药性的专用引物和专用探针,其中,所述专用引物包括多个引物组,每个所述引物组包括多条用于扩增同一目的基因的每个突变位点对应的等位基因的特异性引物和一条共用引物;所述专用探针包括多种探针,所述每种探针与对应所述引物组中的所述共用引物和所有所述特异性引物的靶序列特异结合。本发明的实验证明,本发明提供的专用的引物和专用的探针,可以通过高效灵敏的双重Taqman实时荧光PCR技术和序列特异性引物扩增技术(Sequence specific primer,SSP)相结合,在较短时间内检测待测样品中结核杆菌的耐药性