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[发明专利]一种提高聚合酶链式反应特异性的方法-CN201510926040.3有效
发明人：罗凯;贺智敏;王倩;张志杰;郑国沛 -专利权人：广州医科大学附属肿瘤医院
申请日： 2015-12-11 - 公布日： 2019-04-30 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：其次，还可将5’端加尾引物与复合PCR反应条件结合使用进一步提高反应特异性；所述复合PCR反应条件为：（1）5～10循环的常规PCR反应条件，（2）高温的退火和延伸步骤合并的两步法PCR条件。与普通PCR引物相比，上述加尾引物可有效提高PCR反应特异性但不影响灵敏度，同时引物工作浓度与常规引物一致甚至更低，在使用常规PCR反应条件时即可显著提高PCR特异性，与复合PCR反应条件的组合模式可进一步提高反应特异性本发明适用于常规PCR、巢式PCR等各类PCR，具有广泛的应用价值。
一种提高聚合链式反应特异性方法

[发明专利]用于NFC橙汁和FC橙汁鉴别的引物、方法和试剂盒-CN201911064812.1有效
发明人：陈颖;韩建勋;张九凯;邢冉冉;孙瑞雪 -专利权人：中国检验检疫科学研究院
申请日： 2019-11-04 - 公布日： 2022-04-12 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明还涉及用于鉴别NFC橙汁和FC橙汁的PCR检测方法，所述方法包括使用针对NFC橙汁与FC橙汁的特异性寡核苷酸引物。本发明还涉及用于准确鉴别NFC橙汁和FC橙汁的常规PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括用于常规PCR检测NFC橙汁和FC橙汁的特异性寡核苷酸引物。使用本发明的常规PCR检测方法和试剂盒，能够特异、灵敏、准确地鉴别市售NFC橙汁和FC橙汁。
用于 nfc 橙汁 fc 鉴别引物方法试剂盒

[发明专利]一种荧光定量PCR技术检测意大利蜜蜂王浆主蛋白MRJP 2基因表达的方法-CN201710551453.7有效
发明人：舒蕊;范涛;代君君;刘健;章玉萍;张丽丽;陈明 -专利权人：安徽省农业科学院蚕桑研究所
申请日： 2017-07-07 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明公开了一种荧光定量PCR技术检测意大利蜜蜂王浆主蛋白MRJP2基因表达的方法，具体涉及生物技术领域，本发明中意大利蜜蜂MRJP 2实时荧光RT‑PCR检测方法的建立，包括以下步骤：(1)使用引物进行基因的检测和获得；(2)总RNA的提取；(3)cDNA合成；(4)实时荧光PCR；(5)苯菌灵处理前后意大利蜜蜂MRJP 2的相对表达量计算；本发明采用的实时荧光RT‑PCR与常规PCR相比，实时荧光PCR技术由自动化仪器收集荧光信号，避免了肉眼判断的主观性，进一步提高灵敏度；且RT‑PCR无须PCR后处理，避免污染，保证结果的可靠性和重复性，实时荧光RT‑PCR技术也免除常规PCR中电泳、定量扫描等后续繁琐步骤，大大缩短了实验时间
一种荧光定量 pcr 技术检测意大利蜜蜂王浆蛋白 mrjp 基因表达方法

[发明专利]一种荧光定量PCR技术检测意大利蜜蜂6-丙酮酰四氢蝶呤合酶PTS基因表达的方法-CN201810326195.7在审
发明人：舒蕊 -专利权人：安徽省农业科学院蚕桑研究所
申请日： 2018-04-12 - 公布日： 2018-08-10 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明公开了一种荧光定量PCR技术检测意大利蜜蜂6‑丙酮酰四氢蝶呤合酶PTS基因表达的方法，具体涉及生物技术领域，本发明中意大利蜜蜂PTS实时荧光RT‑PCR检测方法的建立，包括以下步骤：(1)使用引物进行基因的检测和获得；(2)总RNA的提取；(3)cDNA合成；(4)实时荧光PCR；(5)意大利蜜蜂工蜂、雄蜂和蜂王PTS基因的相对表达量计算；本发明采用的实时荧光RT‑PCR与常规PCR相比，实时荧光PCR技术由自动化仪器收集荧光信号，避免了肉眼判断的主观性，进一步提高灵敏度；实时荧光RT‑PCR技术全封闭反应，无须PCR后处理，避免污染，保证结果的可靠性和重复性。同时，免除常规PCR中电泳、定量扫描等后续繁琐步骤，大大缩短实验时间。
蜜蜂实时荧光实时荧光PCR 荧光定量PCR 技术检测四氢蝶呤常规PCR 丙酮合酶生物技术领域全封闭反应相对表达量自动化仪器后处理电泳避免污染繁琐步骤肉眼判断荧光信号灵敏度主观性总RNA 蜂王工蜂雄蜂引物扫描基因检测保证

[发明专利]一种基于简易大规模PCR高效制备线性DNA的方法-CN201210519276.1无效
发明人：余晓岚;马立新;卞璐;廖峰;金梅林;王飞;赵慧;陈全娇 -专利权人：湖北大学;北京伟嘉人生物技术有限公司
申请日： 2012-12-05 - 公布日： 2013-05-01 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提出了一种大规模PCR快速制备线性DNA的方法，它是在中国专利（ZL201010229160.5）低成本获得高特性DNA聚合酶RKOD的基础上，利用优化的PCR程序建立了高于常规PCR体积50-1200倍的大规模PCR方法，利用本发明获得PCR产物的浓度可达300μg/mL。在该发明中，PCR体系中的dNTPs、引物和PCRbuffer参照常规PCR浓度加样，质粒模板的浓度为1μg/mL，DNA聚合酶的用量为10U/mL，大规模PCR步骤为：(1)将反应体系置于98℃水浴0.5min；(2)72℃水浴1min；(3)将步骤(1)(2)进行40个循环，回收PCR产物。
一种基于简易大规模 pcr 高效制备线性 dna 方法

[发明专利]一种采用荧光RT-PCR技术检测意大利蜜蜂气味结合蛋白基因OBP6表达的方法-CN201810373865.0有效
发明人：代君君;范涛;舒蕊;刘健;章玉萍;张丽丽;陈明 -专利权人：安徽省农业科学院蚕桑研究所
申请日： 2018-04-24 - 公布日： 2019-12-17 - 主分类号： C12Q1/6888 文献下载
摘要：本发明公开了一种采用荧光RT‑PCR技术检测意大利蜜蜂气味结合蛋白基因OBP6表达的方法，具体涉及生物技术领域，本发明中意大利蜜蜂气味结合蛋白基因OBP6表达检测方法的建立，包括以下步骤：(1)使用引物进行OBP6基因的检测；(2)总RNA的提取；(3)cDNA合成；(4)实时荧光PCR；(5)苯菌灵处理前后意大利蜜蜂OBP6的相对表达量计算；本发明采用的实时荧光RT‑PCR与常规PCR相比，实时荧光PCR技术由自动化仪器收集荧光信号，避免了肉眼判断的主观性，进一步提高灵敏度；实时荧光RT‑PCR技术全封闭反应，无须PCR后处理，避免污染，保证结果的可靠性和重复性。同时，免除常规PCR中电泳、定量扫描等后续繁琐步骤，大大缩短实验时间。
蜜蜂气味结合蛋白基因实时荧光PCR 实时荧光常规PCR 生物技术领域全封闭反应相对表达量荧光RT-PCR 自动化仪器后处理电泳避免污染表达检测繁琐步骤技术检测肉眼判断荧光信号苯菌灵灵敏度主观性检测总RNA 荧光引物扫描保证

[发明专利]一种基于巢式复合COLD-PCR的T790M突变检测方法-CN201610075841.8有效
发明人：罗凯;贺智敏;王倩;张志杰;郑国沛;仇秦威;刘浩;邱霓 -专利权人：广州医科大学附属肿瘤医院
申请日： 2016-02-03 - 公布日： 2019-04-30 - 主分类号： C12Q1/6848 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于巢式复合COLD‑PCR联合测序的T790M突变检测方法。该方法以待测样本核酸为模板，利用SEQ ID NO.1~4和SEQ ID NO.5~8所示的引物组进行巢式复合COLD‑PCR联合测序。巢式复合COLD‑PCR包括外反应和内反应，外反应是COLD‑PCR与常规PCR反应的组合反应，内反应是常规PCR反应。
一种基于复合 cold pcr t790m 突变检测方法

[发明专利]一种CRISPR分型PCR的方法及其应用-CN201810271385.3有效
发明人：王进科;张贝贝 -专利权人：东南大学
申请日： 2018-03-29 - 公布日： 2022-02-11 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明公开了一种CRISPR分型PCR的方法及其应用，该方法为一种进行DNA检测和分型的方法。本方法将Cas9蛋白及靶向目标DNA的sgRNA加入常规PCR反应体系，在PCR反应程序前加入一个短时间恒温孵育程序，之后启动常规PCR扩增程序。本发明公开了的CRISPR分型PCR的方法是一种均相检测技术，即只需一个PCR扩增步骤即可完成检测，本发明利用了CRISPR技术对DNA的特异性识别切割特性，可以简单、均相、快速、灵敏地对目标DNA进行特异性检测和分型
一种 crispr pcr 方法及其应用

[发明专利]绿鲍与皱纹盘鲍杂交种的二步PCR分子鉴定方法-CN201410279120.X有效
发明人：游伟伟;郭勍;柯才焕;任鹏;骆轩;黄妙琴 -专利权人：厦门大学
申请日： 2014-06-20 - 公布日： 2014-08-27 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：绿鲍与皱纹盘鲍杂交种的二步PCR分子鉴定方法，涉及一种鲍的DNA分子标记检测。(1)采用海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取绿鲍、皱纹盘鲍及其杂交子一代基因组DNA；(2)以所提取的基因组DNA为模板进行多重PCR和常规PCR的平行扩增；(3)PCR扩增反应程序为：多重PCR反应程序和常规PCR反应程序；(4)对两个PCR反应扩增产物分别进行凝胶电泳；(5)将电泳图谱与标准图谱进行比对；(6)对电泳结果图谱进行分析。
皱纹杂交种 pcr 分子鉴定方法

[发明专利]结核分枝杆菌快速诊断试剂盒-CN201410137858.2在审
发明人：李剑男;郑敬彤;王放 -专利权人：吉林大学
申请日： 2014-04-08 - 公布日： 2014-06-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：反应体系组成，10×PCR缓冲液2μl，10mmol/L dNTP 1μl，Taq DNA聚合酶0.5μl，Mg2+ 0.5μl，5%甘油2μl，IS6110 0.2μl，Rv3881c 1μl，双蒸水本发明在常规PCR技术的基础之上，运用多重PCR技术，即在同一反应中加入2对引物并分别扩增，得到结核分枝杆菌不同的特异性DNA片段。此技术既保留了常规PCR的特异性和敏感性，又减少了操作步骤和试剂用量。因此多重PCR技术在微生物检测中更适用于临床，拥有更好的发展前景。
结核分枝杆菌快速诊断试剂盒

[发明专利]实时荧光定量PCR检测方法-CN201110444695.9有效
发明人：戴立忠;熊晓燕;邓中平 -专利权人：戴立忠
申请日： 2011-12-27 - 公布日： 2012-04-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供了一种实时荧光定量PCR检测方法，在常规的PCR检测方法的基础上增加了一个面向目的基因同源区段的增补探针，以发挥类似内标的监测作用。采用该法进行实时荧光PCR能避免假阴性的出现。
实时荧光定量 pcr 检测方法

[发明专利]植物土传病害尖孢镰刀菌快速鉴定的引物及方法-CN201510017831.4有效
发明人：伍文宪;刘勇;张蕾;黄小琴;尹全;刘红雨;宋君;王东;周西全 -专利权人：四川省农业科学院植物保护研究所;刘勇
申请日： 2015-01-14 - 公布日： 2015-03-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明采用设计的特异性上游引物序列、下游引物序列、土传病害真菌的DNA稀释液以及Taq Mix和ddH₂O配制成PCR反应体系，进行常规PCR检测。本发明打破了传统的鉴定方法，使得鉴定过程相当简单，无需进行测序，只需将常规PCR反应液进行DNA电泳后，观察是否在1000bp左右有条带即可确定是否为尖孢镰刀菌。
植物病害镰刀快速鉴定引物方法

[发明专利]猪急性腹泻综合征冠状病毒FQ-PCR检测方法-CN202310247612.X在审
发明人：蔡杰;许芳;方桂军;刘明如;张吉;张金超 -专利权人：深圳市绿诗源生物技术有限公司
申请日： 2023-03-15 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了猪急性腹泻综合征冠状病毒FQ‑PCR检测方法，属于猪综合冠状病毒检测技术领域，FQ‑PCR检测方法为病毒RNA提取、标准品的制备、荧光定量PCR反应条件优化、获得最佳qPCR反应条件，荧光定量标准曲线建立、敏感性试验、特异性实验、重复试验和临床样品检测，PDCoVN基因为目的基因建立的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测法，与常规RT‑PCR检测法相比节省了凝胶电泳的时间，便于对样本进行快速的检测，检测准确度高，对临床样品的检测与常规RT‑PCR检测得到的结果一致，并且染料灵敏度高、价格低廉，当PDCoV在不断的变异并出现病毒重组现象时可以进行有效防控，可以有效的对PDCoV变异规律进行预测，并为后续高效疫苗研制奠定了重要基础
急性腹泻综合征冠状病毒 fq pcr 检测方法

[发明专利]一种突变型Pfu DNA聚合酶及其制备方法和应用-CN201810999861.3有效
发明人：胡松青;黄丽芳;刘光毅;黄菁菁;侯轶 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2018-08-29 - 公布日： 2020-12-22 - 主分类号： C12N9/12 文献下载
摘要：该突变型Pfu DNA聚合酶大幅提高了DNA聚合酶的扩增速率、延伸能力和保真性，适用于各类常规PCR、高保真PCR、长片段PCR及高GC模板的PCR。同时，该突变型Pfu DNA聚合酶对血液中存在的PCR抑制剂具有很高的耐受性，可直接利用血液样品进行PCR检测，无需事先提纯DNA，节约了时间且避免了核酸提取过程中的交叉污染现象。本发明的突变型Pfu DNA聚合酶适合在抗凝血或常规滤纸收集的血液中直接扩增DNA，适用于基因型疾病诊断和亲子鉴定分析。
一种突变型 pfu dna 聚合及其制备方法应用

[发明专利]一种检测甘蔗褐锈病菌的实时荧光定量PCR方法-CN201310015760.5无效
发明人：阙友雄;郭晋隆;许莉萍;张玉叶;罗俊;徐景升;黄宁;陈如凯 -专利权人：福建农林大学
申请日： 2013-01-16 - 公布日： 2013-04-24 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种检测甘蔗褐锈病菌的实时荧光定量PCR方法，包括基因组DNA的提取、实时荧光定量PCR检测体系建立、实验有效性判定，以及实时荧光定量PCR检测。本发明的一种检测甘蔗褐锈病菌的实时荧光定量PCR方法，具有灵敏度高，特异性好，所需要的DNA用量少的特点；与常规的根据病菌培养后的孢子形态特征鉴定、根据田间种植后病害表型症状鉴定，以及常规PCR检测技术相比，具有灵敏度高，特异性好，样品消耗少，还能实时直观地监测PCR扩增过程等优点。
一种检测甘蔗锈病实时荧光定量 pcr 方法

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