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[发明专利]一种质粒DNA分子标准物质的量值修正方法-CN201810641569.4有效
发明人：李亮;金芜军;宛煜嵩;郑子繁;刘卫晓;胡晓颖;柳方方;董美 -专利权人：中国农业科学院生物技术研究所
申请日： 2018-06-21 - 公布日： 2021-09-17 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明公开了一种质粒DNA分子标准物质量值修正的方法。该方法通过质粒分子DNA标准物质中加入非靶标DNA作为填充物，采用微滴数字PCR技术确定最佳填充物的种类，以此消除质粒DNA分子标准物质的理论值与实际测量值的偏倚问题。质粒DNA分子标准物质是核酸量值传递的重要载体，采用本发明的修正方法，可以为医疗诊断、司法鉴定、物种鉴定、基础生物学研究及转基因检测等核酸分析领域提供量值准确、稳定性良好、测量结果具有可靠性、可比性和溯源性的质粒DNA分子标准物质。
一种质粒 dna 分子标准物质量值修正方法

[发明专利]重组仙台病毒的构建方法及其应用-CN202010313056.8有效
发明人：张曦;萧哲 -专利权人：梅尔顿（深圳）生物医药技术有限公司
申请日： 2020-04-20 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供一种重组仙台病毒的构建方法，包括：构建质粒pCAGGS‑NP/P/L；以仙台病毒逆转录样品为模板扩增SeV‑01/02 DNA；扩增线性化pUC57‑insert质粒收集pUC‑insert DNA；将SeV‑01/02 DNA片段和pUC‑insert DNA融合，获得Sev‑full质粒，酶切得到Sev‑full‑Not1；合成pUC57‑A质粒，酶切收集A‑Not1，与Sev‑full‑Not1连接得到Sev‑A质粒；提供293T细胞，加入pCAGGS‑NP/P/L、Sev‑A和T7‑opt三种质粒，转染得到重组仙台病毒。
重组仙台病毒构建方法及其应用

[发明专利]具氨苄青霉素抗性的质粒T5与DNA序列及构建方法-CN200910111325.6有效
发明人：曾润颖;陈兴麟 -专利权人：国家海洋局第三海洋研究所
申请日： 2009-03-20 - 公布日： 2009-08-26 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：具氨苄青霉素抗性的质粒T5与DNA序列及构建方法，涉及一种具有氨苄青霉素抗性的质粒T5。提供一种来源于深海的具氨苄青霉素抗性的质粒T5与DNA序列及其构建方法。质粒来源于海底沉积物，将质粒转化至大肠杆菌感受态细胞中，可使该细胞具有抗氨苄青霉素的特性；质粒T5能在各种E.coli细胞中稳定增殖，可采用常规的质粒提取技术获得。构建时，提取深海沉积物样品宏基因组DNA，不完全酶切，检测，对1-5kb片段回收；使酶切后的DNA片段自连；将连接后的DNA片段转化至感受态细胞中，筛选，挑取长出的单菌落，提取质粒，并验证；以质粒做模板，设计引物进行PCR扩增，得质粒的部分序列，反向测序，得全序列。
氨苄青霉素抗性质粒 t5 dna 序列构建方法

[发明专利]一种快速质粒抽提纯化试剂盒及其应用-CN200410047132.6无效
发明人：李乐攻;李东屏;黄咏 -专利权人：李乐攻;李东屏;黄咏
申请日： 2004-12-31 - 公布日： 2005-08-17 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速质粒抽提纯化试剂盒及进行细菌质粒抽提纯化的方法，其试剂盒包括下列独立存在的液体：无碱含酶菌体裂解液，DNA结合柱前处理液，DNA质粒结合液，清洗液，洗脱液。使用本试剂盒进行细菌质粒抽提纯化的方法包括如下步骤：裂解菌体；前处理DNA结合柱；结合质粒DNA；清洗；洗脱。使用本发明试剂盒及质粒抽提纯化方法，可在3－5分钟内快速有效地完成质粒抽提纯化工作，大大缩短抽提时间；所得到的质粒DNA，经使用分光光度计检测，A₂₆₀/A₂₈₀值达1.7－2.0；还可以用于大批量样品抽提，在紧急情况下抽提纯化质粒；并为质粒抽提的自动化和大规模化奠定了技术基础。
一种快速质粒提纯试剂盒及其应用

[发明专利]一种质粒DNA工业化分离纯化方法及其应用-CN202210911987.7在审
发明人：陈阳雪;梁笑荣;金百胜;朱建波 -专利权人：苏州纳微科技股份有限公司;常熟纳微生物科技有限公司
申请日： 2022-07-29 - 公布日： 2022-09-30 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种质粒DNA工业化分离纯化方法及其应用，所述方法包括如下步骤：将含有质粒DNA的细菌裂解液依次进行离子交换层析和疏水层析处理得到纯化的质粒DNA。本发明将离子层析和疏水层析两步法纯化工艺用于质粒DNA产品的纯化，不仅操作简便易放大，减少了操作步骤，同时提高了纯化质粒的总回收率，并符合药用标准。本发明所述分离纯化方法纯化效果好，重复性强，操作简单，可满足工业上产业化纯化生产要求，大大降低了生产成本，所述方法在质粒DNA工业化分离纯化中具有重要应用价值。
一种质粒 dna 工业化分离纯化方法及其应用

[发明专利]一种鱼用DNA疫苗及其制备方法与应用-CN202210007548.3在审
发明人：徐小文;叶作城;黎美凤;毛慧玲;胡成钰 -专利权人：南昌大学
申请日： 2022-01-06 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： A61K39/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种鱼用DNA疫苗及其制备方法与应用，属于生物医药技术领域。所述的鱼用DNA疫苗为含有Z‑DNA序列的重组质粒与含有PKZ开放阅读框序列的重组质粒的混合物；其中所述的含有Z‑DNA序列的重组质粒与所述的含有PKZ开放阅读框序列的重组质粒之间的质量比为1：1；所述的含有Z‑DNA序列的重组质粒的序列如SEQ ID NO.1所示；所述的含有PKZ开放阅读框序列的重组质粒的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明制备的DNA疫苗能显著激活鱼体先天免疫反应，对GCRV病毒引起的鱼体死亡具有良好的保护效果，免疫保护率达60.2%，为后期DNA疫苗的应用及产业化提供理论基础和科学依据。
一种 dna 疫苗及其制备方法应用

[发明专利]制备质粒DNA的碱裂解系统及组合系统-CN201110089982.2有效
发明人：张庆林;胡春生;卢育新;程晓晨;吴祖泽 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所
申请日： 2011-04-11 - 公布日： 2011-10-12 - 主分类号： C12M1/12 文献下载
摘要：本发明提供了一种制备质粒DNA的碱裂解系统及组合系统，制备质粒DNA的碱裂解系统包括：细菌悬液储罐；碱裂解液储罐；中空超滤柱，包括由超滤膜分开的第一腔体和第二腔体，碱裂解液储罐与第一腔体相连通，细菌悬液储罐与第二腔体相连通本发明提供的制备质粒DNA的碱裂解系统通过采用中空超滤柱将细菌悬液和碱裂解液混合均匀，避免了局部pH值过高问题和由于使用搅拌等常规混合方法而带来的剪切力过大的问题，提供了一种稳定性好、效率高和可重复性强的质粒DNA的碱裂解系统。同时，采用本发明所提供的制备质粒DNA的碱裂解系统制得的质粒DNA中超螺旋DNA的含量较高，能达到90％以上。
制备质粒 dna 裂解系统组合

[发明专利]一种聚乙烯亚胺修饰的碳纳米管及其复合物、制备方法及用途-CN200810201238.5无效
发明人：于伯章;马继飞;黄庆 -专利权人：中国科学院上海应用物理研究所
申请日： 2008-10-15 - 公布日： 2009-05-13 - 主分类号： C01B31/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种聚乙烯亚胺修饰的碳纳米管及其质粒DNA的复合物，本发明采用的质粒DNA包括：P53DNA，绿色荧光蛋白表达(JPC)以及人未甲基化寡聚脱氧核苷酸质粒DNA。本发明的聚乙烯亚胺修饰的碳纳米管与质粒DNA的复合物，具有转染效率高和对细胞毒性小的优点，尤其在浓度为30g/ml时，转染效率大于90％，细胞有效性大于80％。该聚乙烯亚胺修饰的碳纳米管的质粒DNA复合物在制备转染骨肉瘤细胞体外及动物体内的基因治疗的药物中有广阔的应用前景，而聚乙烯亚胺修饰的碳纳米管/质粒DNA/阿霉素纳米复合物在制备抑制肿瘤生长的药物中也有着广泛应用
一种聚乙烯亚胺修饰纳米及其复合物制备方法用途

[发明专利]大型质粒DNA的纯化方法-CN202110683540.4有效
发明人：焦鹏;徐琦;项涛;余齐明;林文龙 -专利权人：上海碧博生物医药科技有限公司
申请日： 2021-06-21 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开一种大型质粒DNA的纯化方法，包括以下步骤：S1：向含大型质粒DNA的上清液中加入磷酸盐至浓度为10～50mM，并调节溶液电导率为82～89mS/cm(25℃)，得到上样溶液；大型质粒DNA是指大于20KB的质粒DNA；S2：将上样溶液上样至Poros HQ阴离子层析进行洗脱，收集洗脱液。本发明的方法能够有效而稳定地将大型质粒DNA从大肠杆菌裂解中和后的上清液中纯化出来，可用于大规模GMP生产。
大型质粒 dna 纯化方法

[发明专利]一种农杆菌质粒DNA的提取方法-CN201811175551.6在审
发明人：赵建阳;王世凯;韦小艳 -专利权人：安徽欣伯玉生物科技有限公司
申请日： 2018-10-10 - 公布日： 2019-03-08 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种农杆菌质粒DNA的提取方法，包括如下步骤：（1）农杆菌菌液培养；（2）菌体收集；（3）农杆菌细胞破裂；（4）质粒DNA的提取。本发明提供了一种农杆菌质粒DNA的提取方法，方法科学合理，缩短了提取的时间，提高了提取的效率，提高了质粒DNA的纯度和含量，并且安全性高，具有很好的市场推广应用价值。
质粒DNA 农杆菌农杆菌菌液农杆菌细胞菌体收集市场推广破裂应用

[发明专利]在无RNA酶和有机溶剂的条件下应用切向流过滤来纯化质粒DNA的方法-CN00813109.0无效
发明人：米歇尔·D·巴特勒;达里恩·L·科恩;戴维·卡恩;马乔里·E·温克勒 -专利权人：杰南技术公司
申请日： 2000-07-21 - 公布日： 2002-11-06 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明描述了从含有质粒DNA的原核细胞中纯化该质粒DNA的方法。该方法包括如下步骤(a)消化所述细胞;(b)将细胞培养约4到24小时以进行裂解并溶解,但不对RNA进行酶促消化;(c)除去来自细胞的裂解物杂质以提供一种质粒DNA溶液;(d)使该溶液流经切向流过滤装置而过滤,以获得含有该质粒DNA的回流液;(e)回收该回流液。
rna 有机溶剂条件下应用流过纯化质粒 dna 方法

[发明专利]一种闭合线性DNA制备方法-CN202310705124.9在审
发明人：喻明军;崔康乐;纪世春;何丽丽 -专利权人：通用生物（安徽）股份有限公司
申请日： 2023-06-14 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种闭合线性DNA制备方法，涉及核酸技术领域。本发明制备方法包括如下步骤：S1：质粒构建：质粒为含有目的基因、质粒骨架的质粒，所述质粒骨架含有诱导型启动子、端粒酶序列，所述目的基因两端均有端粒酶识别位点；S2：诱导培养，得到闭合线状DNA分子混合物；S3：闭合线状DNA分子混合物进行纯化回收，得到Target gene闭合线性DNA。本发明公开的制备方法用于在大肠杆菌中通过诱导剂促使其表达端粒酶直接切割质粒，形成闭合线性DNA分子，可减少商业化酶的使用，大大节约成本，提高产量。
一种闭合线性 dna 制备方法

[发明专利]一种提高CRISPR/Cas基因编辑效率的方法-CN202210981325.7在审
发明人：刘嵘明;梁丽亚 -专利权人：大连理工大学
申请日： 2022-08-16 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：首先将pCas质粒及pTox质粒转入宿主菌，pCas质粒中插入有Cas基因和lambda Red基因，pTox质粒中插入有毒性基因，再将pgRNA质粒与外源DNA共同转入上述宿主菌，pgRNA质粒中插入有靶向目标基因gRNA_1和靶向pTox质粒的抗性基因的gRNA_2；pCas质粒表达的Cas蛋白与pgRNA质粒转录的gRNA_1组合对目标靶向位点进行DNA剪切，lambda Red系统结合外源DNA实现基因重组，Cas蛋白与gRNA_1组合后未对目标靶向位点进行DNA剪切，宿主菌中pTox质粒表达有毒物质，从而去除未经基因编辑的宿主菌，保留经基因编辑的宿主菌。此方法不仅可提高单个靶向位点的基因编辑效率，也能提高基因敲除、大片段DNA插入及重组效率，提高高通量基因编辑的效率。
一种提高 crispr cas 基因编辑效率方法

[发明专利]用于提高质粒DNA表达的冻干DNA制剂-CN200980119962.6有效
发明人：金钟默;金水晶;韩熊;俞源善 -专利权人：百疗医株式会社
申请日： 2009-04-09 - 公布日： 2011-05-04 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供了由包含质粒DNA、盐和碳水化合物之组合物冻干的DNA制剂，其中所述质粒DNA包含HGF基因或其变体。
用于提高质粒 dna 表达制剂

[发明专利]一种在大肠杆菌中制备线性单链DNA的方法-CN201610464596.X有效
发明人：张平静;冯文建;杨扬;王晋康;朱远源 -专利权人：百奥迈科生物技术有限公司
申请日： 2016-06-23 - 公布日： 2019-12-06 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于制备线性单链DNA的方法，其包括：构建可表达Cas切口酶的Cas表达元件，整合入质粒；构建可在大肠杆菌细胞中与上述Cas表达元件兼容的sgRNA基因转录表达元件，并构建成质粒，得到sgRNA表达质粒；将Cas切口酶表达质粒和sgRNA表达质粒共同转化到大肠杆菌感受态细胞中；培养大肠杆菌至对数生长期，诱导Cas切口酶基因表达和自杀性sgRNA表达，Cas切口酶协同sgRNA自剪切sgRNA表达质粒的双链DNA并形成单链断裂，产生线性单链DNA；提取线性单链DNA。
一种大肠杆菌制备线性 dna 方法