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[发明专利] 一种重组沃氏菌的天门冬酰胺酶的制备法 -CN201110178452.5 无效
发明人：
范铭琦
- 专利权人：
范铭琦
申请日：
2011-06-29
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公布日：
2013-01-02
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主分类号：
C12N15/55 文献下载
摘要： 本发明涉及生物医药的基因重组领域，具体地说是一种重组沃氏菌的天门冬酰胺酶的制备法；其特征在于包括以下步骤：采用PCR技术从沃氏菌的基因组DNA 中扩增出天门冬酰胺酶的全长或部分片段的DNA ，将上述DNA 用DNA 连接酶连接到克隆质粒 中，从克隆质粒 中切割出天门冬酰胺酶的全长或部分片段的DNA ，再连接到原核细胞表达质粒 中，表达质粒 转染到大肠杆菌中，在抗生素选择培养基中培养此转染的细菌以扩增含有天门冬酰胺酶的全长或部分片段的DNA 的表达质粒 ，收集转染的菌体，离心分离出菌体；破碎细菌，释放重组天门冬酰胺酶；用二步柱层析法分离精制重组沃氏菌天门冬酰胺酶；本发明具有工艺步骤少，可控制质量且大量制备的优点。一种 重组 沃氏菌 天门冬 酰胺酶 制备
[发明专利] 嵌合质粒 文库的构建方法 -CN202080026680.8 在审
发明人：
柘植谦尔 ;石井纯 ;近藤昭彦
- 专利权人：
国立大学法人神户大学
申请日：
2020-03-24
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公布日：
2021-11-30
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主分类号：
C40B40/06 文献下载
摘要： 本发明的课题为提供能够高效地构建长链DNA 的组合文库、容易确认所得克隆的基因型的新型微生物细胞转化用DNA 片段制备方法。本发明为微生物细胞转化用DNA 片段的制备方法，其中，所述微生物细胞转化用DNA 片段具有至少1个插入DNA 单元，所述插入DNA 单元包含含有在宿主微生物中有效的复制起点的DNA 、和单位DNA 连接而成的插入DNA ，所述方法的特征在于包括下述步骤：步骤(A)，通过OGAB方法制备多种含有插入DNA 单元的质粒 ，所述插入DNA 单元是使能够以特定的连接顺序进行连接的多种单位DNA 连接而成的；步骤(B)，将通过步骤(A)制备的多种质粒 用适合各质粒 的限制性内切酶处理，分解为单位DNA ，制备多种单位DNA 混合液；和步骤(C)，使用通过步骤(B)得到的多种单位DNA 混合液，通过OGAB法重新组装单位DNA ，制备长链DNA 片段嵌合 质粒 文库 构建 方法
[发明专利] 一种运载质粒 及其构建及其使用方法 -CN201611174645.2 有效
发明人：
李十中 ;张治宇 ;仉磊
- 专利权人：
清华大学
申请日：
2016-12-19
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公布日：
2020-02-21
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主分类号：
C12N15/74 文献下载
摘要： 本发明公开了一种关于鱼腥藻7120三亲转化系统中运载质粒 的构建及其使用方法，通过序列与连接不依赖的克隆(SLIC)方法一步将核酸元件重组形成质粒 pPT27。连接目的核酸序列后生成运载质粒 ，同帮助和结合质粒 一起将外源DNA 序列转移至宿主细胞内，通过标记基因筛选到目的突变株。本发明还公开了pPT27质粒 的使用方法，转入绿色荧光蛋白(GFP)和一种融合蛋白(FdnifK)。本发明构建所得的运载载体(pPT27)可以用于目的DNA 片段的功能分析和蛋白表达，应用所构建的质粒 可以快速、高效、省时的构建运载质粒 并且可以避免DNA 序列的限制，在基因功能研究方面有着重要的意义。一种 运载 质粒 及其 构建 使用方法
