本发明公开了一种新型马来酸异构酶突变体，对应于如SEQ ID NO.1所示的马来酸异构酶的氨基酸序列，所述马来酸异构酶突变体的氨基酸序列具有F39L，A224G的突变。本发明发现新型马来酸异构酶以及其突变体相对于具有提高的酶活力和稳定性，突变体更为突出。此外，本发明还公开了马来酸异构酶或其突变体以任何形式与L‑天冬氨酸氨裂解酶组合应用于天冬氨酸的生产，包括二者耦合在一起的共表达的一菌双酶形式。
本发明公开了氨基酸脱氢酶突变体及其应用。该氨基酸脱氢酶突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列发生突变得到的氨基酸序列，突变至少包括如下突变位点之一：第64位、第94位、第133位、第137位、第148位、第168位、第173位、第183位、第191位、第207位、第229位、第248位、第255位和第282位；或者氨基酸脱氢酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点，且与发生突变的氨基酸序列具有80％以上同源性的氨基酸序列本发明的氨基酸脱氢酶突变体具有酶活性大幅度提高的优势，其酶活相对于野生型氨基酸脱氢酶提高了大于50倍，并且酶特异性也有相应提高。
本发明公开了一种β‑淀粉酶突变体及其应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的β‑淀粉酶突变体是对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β‑淀粉酶的第252位和/或第503位的氨基酸进行定点突变获得的。本发明在天然β‑淀粉酶的基础上，通过理性设计，结合定点突变生物技术改造β‑淀粉酶分子结构，分析了突变后残基对酶热稳定性的影响，并最终获得了稳定性提高的突变体G252T、F503S及组合突变体G252T/F503S，本发明的β‑淀粉酶突变体在热稳定显著提高的同时酶的活性不受影响，本发明的β‑淀粉酶突变体比野生型更适合于催化淀粉生成麦芽糖的应用，更利于生产工艺的灵活性。
本发明公开了一种酶活提高的NADH脱氢酶突变体SlNOX及其应用。NADH脱氢酶的突变体SlNOXR161A，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明提供了一种NADH脱氢酶的突变体SlNOXR161A，所述突变体SlNOXR161A的氨基酸序列如SEQ ID本发明所述突变体SlNOXR161A是对序列如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列进行定点突变，将第161位的Arg突变成Ala，从而提高NADH脱氢酶的活性，使NADH脱氢酶的酶活提高了36%。本发明所得到的NADH脱氢酶突变体SlNOXR161A可以作为一种可以显著提高酶催化活力的突变体材料为NOX的进一步研究提供参考。
本发明提供了一种3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域；所述3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体的构建方法，包括以下步骤：1)将3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶基因与表达载体连接获得野生型重组载体；2)以获得的野生型重组载体为模板，通过反向PCR定点突变获得3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体重组载体；3)将获得的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体重组载体转化到表达菌株获得重组菌株，培养所述重组菌株获得3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体。所述3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体比酶活为85217.08U/mg，较野生型提高了227.35％。
