本发明涉及体外诊断技术领域，尤其是一种果糖赖氨酸氧化酶突变体FODt及其制备方法和应用，其蛋白序列如SEQ ID No：1所示，编码该果糖赖氨酸氧化酶突变体FODt的基因核酸序列如SEQ ID No：2所示。本发明的果糖赖氨酸氧化酶突变体FODt，其催化能力较野生型提高了2倍左右，使其用量降低约50％，大大降低了人体血糖检测成本，将有利于改进果糖赖氨酸氧化酶的人体血糖水平的检测水平，提高试剂的反应灵敏度，提升试剂的在机稳定性，延长了试剂使用的寿命，提高了检测终端的试剂利用率，大大降低了使用成本，实现了产品高效环保生产。
本发明公开了一种L‑氨基酸脱氢酶突变体及其编码基因、基因工程菌及其在制备L‑草铵膦中的应用，该L‑氨基酸脱氢酶突变体包括：以SEQ ID NO.1所示野生型的L‑氨基酸脱氢酶为模板，第354位的V替换为G所得突变体；第152位的A替换为G所得突变体；第152位和第354位联合突变形成的突变体；第156位的N突变成A与第152位、第354位联合突变形成的突变体。本发明通过分子改造，获得了一类在催化2‑羰基‑4‑(羟甲基膦酰基)丁酸制备L‑草铵膦工艺中具有高酶活的L‑氨基酸脱氢酶突变体，使用全细胞对500mM底物PPO进行转化时，底物转化率在4小时内可以达到99％以上，具有很强的工业应用前景。
本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其在制备L‑苯甘氨酸中的应用。该亮氨酸脱氢酶突变体为：以SEQ ID NO.1所示的野生型亮氨酸脱氢酶MsLDH为模板，第332位的天冬氨酸D突变为谷氨酸E，第333位的甘氨酸G突变为谷氨酸E，第334位的亮氨酸L突变为精氨酸R所得的突变体MsLDH‑EER，氨基酸基序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过分子改造获得一种催化活力和pH稳定性均提高的亮氨酸脱氢酶突变体MsLeuDH，相较于野生型MsLeuDH在200mM底物浓度下4h时转化率为68.0％，根据本发明提供的突变体MsLDH‑EER在3h时转化率达到99.5％，产物e.e.值大于99％。
本发明提供了一种胺脱氢酶突变体、核酸、表达载体、制备方法和应用，该胺脱氢酶突变体包含SEQ ID NO：2第40、68、113、261、291、294位氨基酸中至少一个突变。该胺脱氢酶突变体可以催化高浓度前手性酮和游离氨为底物的不对称还原反应合成手性胺，产率高且满足99％+立体选择性的要求，具有广阔的应用前景。
本发明公开一种亚胺还原酶突变体、重组基因工程菌及其在(R)‑2‑甲基吡咯烷合成中的应用。所述亚胺还原酶突变体以SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的野生型亚胺还原酶IR23为模板，第249位缬氨酸突变获得的突变体V249T，第249位缬氨酸和第224位色氨酸突变获得的突变体V249T/W224F。本发明通过半理性设计的分子改造方法，显著提高了亚胺还原酶催化环状亚胺2‑甲基吡咯啉生成相应环状胺的能力。突变体V249T/W224F催化2‑甲基吡咯啉时，底物转化率为93.3％，与野生型相比提高了49.8％。本发明有效提高了亚胺还原酶不对称合成手性胺的能力，对手性胺化合物的绿色催化合成具有重要意义。
本发明公开了一种桑树硝酸还原酶、其核酸或基因在植物抗镁胁迫中的应用。所述桑树硝酸还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述核酸或基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明通过桑树在镁胁迫下相关生理生化指标的分析，以及桑树MmNIA基因的研究，利用亚细胞定位技术，推测该基因所表达的蛋白质位于细胞质，利用VIGS沉默技术，将桑树MmNIA基因转入根瘤农杆菌GV3101，利用病毒沉默原理减少基因的表达，观测转基因的抗逆能力降低，完善了桑树基因组并且提供了桑树在镁胁迫条件下的表达分析和应用。为研究桑树抗金属胁迫调控机制和培育新品种提供了重要的分子依据。
本申请涉及一种酸性D‑氨基酸氧化酶的突变体，构建方法及其在酶法拆分草铵膦中的应用。所述酸性D‑氨基酸氧化酶突变体是在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列基础上包含以下至少一个突变位点：H70S、I74A、G244Q、Q337G。本发明构建的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET30a‑DAAO具有高产酸性D‑氨基酸氧化酶的性质，用于催化外消旋型D，L‑PPT的氧化反应，在300mM底物浓度下可于6h内达到最高49.8％的转化率，转化效率远高于野生型DAAO的转化效率，可应用于微生物酶法拆分外消旋型草铵膦以及绿色高效生产L‑草铵膦。
