本发明公开了一种高活性酪氨酸酚裂解酶突变体，是在SEQ ID NO.1所示的酪氨酸酚裂解酶的氨基酸序列的第206位丙氨酸突变为丝氨酸，第202位谷氨酸突变为苏氨酸和第201精氨酸突变为酪氨酸；所述一种高活性的酪氨酸酚裂解酶突变体的氨基酸序列如本发明的高活性的酪氨酸酚裂解酶突变体，其酶活相较于野生型酪氨酸酚裂解酶提高了153％，可以节约成本。
本发明涉及一种突变的海藻糖合酶及其表达基因与应用。突变的海藻糖合酶的表达基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。突变的海藻糖合酶，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次根据(Pseudomonas stutzeri)Qlu3预测的三维结构为基础，对其活性中心进行关键氨基酸的定点突变，获得了海藻糖合酶的突变体蛋白，该突变的海藻糖合酶制备方法简便，产量大，纯度高，热稳定性好，较野生型海藻糖合酶，突变体的海藻糖转化率提高了4.5％，副产物葡萄糖的生成量降低了69.4％。
本发明属于酶学技术领域，具体涉及一种β‑葡萄糖苷酶的突变体W233D及其应用。一种β‑葡萄糖苷酶的突变体W233D，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。它是通过将S‑bgl6的233位的色氨酸Trp，W突变成天冬氨酸Asp，D，改造得到的。这个突变体酶相对于突变前的酶具有更高的葡萄糖耐受性的功能。它在酶反应中的葡萄糖的耐受能力是突变前的209.9倍，对纤维二糖的水解能力与突变前的一致，能够在降解纤维二糖中应用。
本发明公开了热稳定性提高的低温淀粉酶突变体及其应用。本发明将低温淀粉酶进行定点突变最终筛选得到了热稳定性显著提高的3个低温淀粉酶突变体，其氨基酸序列分别为SEQ ID No.3、SEQ ID No.4或SEQ ID No.5所示；Tm值测定结果表明三个突变体的Tm值均比野生型淀粉酶有明显提升，其中SEQ ID No.5所示突变体的Tm值相比野生型提高了4.77℃；残余酶活力比较试验结果发现，三个突变体的残余酶活力相比野生型淀粉酶分别提高了1.6倍，2.4倍和2.6倍；酶动力学参数测定结果表明，本发明低温淀粉酶突变体不仅可显著提高淀粉酶的热稳定性还可有效提高淀粉酶的催化效率。
本发明公开了葡萄糖氧化酶突变基因及其表达和应用。本发明将葡萄糖氧化酶基因通过密码子优化、GC含量改变等方式，改变了272个碱基，将GC含量由55.54％降为48.44％，得到葡萄糖氧化酶突变基因，其碱基为SEQ ID NO.2所示。本发明将葡萄糖氧化酶突变基因转入到毕赤酵母中进行表达，试验结果表明，相比于突变前，葡萄糖氧化酶突变基因在毕赤酵母中的分泌表达量有显著提高，与国内外部分研究比较，本发明葡萄糖氧化酶突变基因的最终表达量达到较高的表达水平葡萄糖氧化酶酶学性质测定表明，采用本发明葡萄糖氧化酶突变基因所表达的重组葡萄糖氧化酶蛋白具有良好的热稳定性和较高酶活力。
本发明公开了一种热稳定性提高的脂肪酶突变体及其应用。该脂肪酶突变体为脂肪酶TTL增加二硫键得到的脂肪酶突变体；其中，脂肪酶TTL的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过构建二硫键得到了热稳定性提高的脂肪酶突变体TTL‑108/162，突变体TTL‑108/162在75℃和80℃热处理30分钟后的酶活保留率为65％和48％，即本发明的获得的脂肪酶突变体TTL‑
本发明公开了一种耐热植酸酶突变体及其应用，属于酶工程领域。通过随机突变的方法对来源于大肠杆菌Escherichia coli植酸酶基因appA进行改造，多轮筛选得到一种突变体蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:3。本发明筛选得到的植酸酶突变体appA‑M最适pH为4.5，最适温度为65℃，在90℃处理10min后保留30％的酶活。与野生酶相比，植酸酶突变体appA‑M的热稳定性得到显著提高。所述植酸酶突变体可以广泛应用于猪禽饲料中，从而有利于减少饲料制粒过程中酶活力的损失，降低饲料成本，同时还能降低磷排放对环境的污染。
本发明提供了一种κ‑卡拉胶酶突变体及其应用，突变体是由如SEQ ID NO.1所示序列编码的野生型κ‑卡拉胶酶分别经过其第42、51、155或198位氨基酸突变而产生的突变体。与野生型κ‑卡拉胶酶相比，这些突变体的热稳定性得到了一定的提高，野生型酶(WT)在60℃热处理40min后仅保留了3.90％的相对酶活力，而突变酶Q42V、I51H、K155A、G198S分别保留了29.23％、6.12％、18.50％、19.77％的相对酶活力。从而使κ‑卡拉胶酶在卡拉胶寡糖工业生产中具有良好的应用前景。
