[发明专利]实时荧光定量PCR检测外源GhCAD6基因在棉花纤维中表达量的方法在审
| 申请号： | 201810706577.2 | 申请日： | 2018-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN110616250A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 胡文冉;苏秀娟;李晓荣;周小云;杨洋;李波;范玲;樊国全;刘建喜;邓晓娟 | 申请（专利权）人： | 新疆农业科学院核技术生物技术研究所(新疆维吾尔自治区生物技术研究中心);新疆农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 830091 新疆维吾尔自*** | 国省代码： | 新疆;65 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种采用实时荧光定量PCR检测外源GhCAD6基因在棉花纤维中的表达量的方法，首先采用热硼酸‑蛋白酶K法提取出棉花纤维的RNA，反转录成cDNA，利用特异性引物和内参基因，在特定的反应条件和反应程序下进行荧光RT‑PCR，检测外源GhCAD6基因在不同发育阶段棉纤维中的表达量，该方法自动收集荧光信号，避免了肉眼判断的主观性，提高了实验的灵敏度，保证了结果的可靠性和重复性，免除了常规PCR中的电泳、定量扫描等后续繁琐步骤，大大缩短了实验时间；本发明中棉花GhCAD6基因实时荧光RT‑PCR检测方法的建立，为研究棉花GhCAD6基因表达调控机理及利用其改良棉花纤维品质的研究奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 棉花纤维 表达量 外源 基因 实时荧光定量PCR 硼酸 基因表达调控 棉花纤维品质 特异性引物 蛋白酶K法 电泳 发育阶段 繁琐步骤 反应程序 反应条件 内参基因 肉眼判断 实时荧光 荧光信号 自动收集 棉花 常规PCR 反转录 灵敏度 棉纤维 主观性 检测 荧光 扫描 改良 研究 保证 | ||
【主权项】：
1.一种实时荧光定量PCR检测外源GhCAD6基因在棉花纤维中表达量的方法，其特征是采用符合荧光PCR反应特点的目标基因及内参基因的特异性上、下游引物，利用实时荧光定量PCR检测目标基因在不同发育阶段棉花纤维中的表达量，其具体步骤为：/na、棉花纤维总RNA提取：采用热硼酸-蛋白酶K法提取不同发育阶段棉花纤维的RNA；/nb、cDNA第一链合成：以棉花RNA为模板合成cDNA第一链，反应体系为20μL；/nc、实时荧光PCR：以上述合成的cDNA第一链为模板，利用如下引物作为特异性引物，进行实时荧光PCR扩增反应，每个样品设3个平行管，扩增后所得3个平行管的Ct值取平均数；/n符合荧光PCR反应特点的该目的基因GhCAD6序列特异性上下游引物：/nGhCAD6-F：5’-GTTCCTGGGCATGAAGTGGT-3’/nGhCAD6-R：5’-TGCAACATCCAACAAGACAACC-3’/n以及作为内参基因的棉花GhUBQ7基因特异性上下游引物：/nGhUBQ7-F：5’-AGAGGTCGAGTCTTCGGACA-3’/nGhUBQ7-R：5’-GCTTGATCTTCTTGGGCTTG-3’/n其荧光定量定量PCR的反应体系为：总体积为20μL，内含
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于新疆农业科学院核技术生物技术研究所(新疆维吾尔自治区生物技术研究中心);新疆农业大学，未经新疆农业科学院核技术生物技术研究所(新疆维吾尔自治区生物技术研究中心);新疆农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810706577.2/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 一种精确测定病源细胞的试剂盒及其应用-201610861587.4
- 杨国华;吕娟;陈倩;徐景祥 - 河南乾坤科技有限公司
- 2016-09-28 - 2020-02-14 - C12Q1/6851
- 本发明涉及一种精确测定病源细胞的试剂盒及其应用。本发明提供了一种检测病源细胞的试剂盒，包括：检测病源细胞的靶向性分子和非特异性信号监测寡核苷酸探针。所述非特异性信号监测寡核苷酸探针可监测靶向性分子的寡核苷酸部分与细胞结合产生的非特异性信号。本发明的方法有效降低非特异性结合导致的干扰，提高了检测病源细胞的准确性。
- 一种检测高度片段化样本的变性增强数字微滴PCR方法-201911221006.0
- 陈谦;刘弘扬;刘泓;李新新;贾海雪 - 苏州索真生物技术有限公司
- 2019-12-03 - 2020-02-11 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种检测高度片段化样本的变性增强数字微滴PCR方法。本发明有助于提高痕量高度片段化游离DNA检测灵敏度和特异性。并提供了几组检测游离DNA的寡核苷酸的序列。
- 数字化定量的多靶标共同、生物检测-201910790298.3
- 许潇楠;宋汝渊;姚舒怀;周国辉 - 浙江达普生物科技有限公司
- 2019-08-26 - 2020-02-07 - C12Q1/6851
- 本发明包括的一些方法和装置，用于利用集成液滴微流体系统在单分子水平检测和量化多种生物分子。在一个实施例中，本发明提供样品中多种生物分子的实时和数字检测，从而以绝对和即时的方式量化多种生物分子。在一种实施例中，本发明提供一种疾病的诊断方法，包括使用这里所述的方法或装置对样品中的多种生物分子进行实时和数字检测。
- 一种用于检测人脐带间充质干细胞表面分子标记方法和试剂盒-201911230423.1
- 薛松磊;沈晖;崔恒宓 - 江苏易诺维生物医学研究院有限公司
- 2019-12-04 - 2020-02-07 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种用于检测人脐带间充质干细胞表面分子标记方法和试剂盒，包括以下步骤：1)收集、分离培养人脐带间充质干细胞；2)将上述人脐带间充质细胞培养至对数生长期，使用重组胰酶消化2‑3min后收集至EP管中；3)使用试剂盒提供总RNA，合成cDNA；4)根据CD105、CD90、CD73、CD19、CD34、CD45、CD116和HLA‑DR的基因设计引物序列，并以上述cDNA为模板进行PCR扩增；5)通过全自动核酸分析系统对步骤4)得到的PCR产物进行定性定量检测。本发明选用三种阳性表面分子标记CD105、CD90、CD73和五种阴性表面分子标记CD19、CD34、CD45、CD116、HLA‑DR来快速检测人间充质干细胞的表面分子标记，从而确定培养的干细胞的质量。
- 一种检测秦川牛FGF13基因拷贝数变异的方法及其应用-201511030627.2
- 陈宏;蔡含芳;白跃宇;蓝贤勇;石涛;徐瑶;张良志;雷初朝 - 西北农林科技大学
- 2015-12-31 - 2020-02-07 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种检测秦川牛FGF13基因拷贝数变异的方法及其应用：基于实时定量PCR，以秦川牛基因组DNA为模板，利用一对特异性PCR引物扩增牛FGF13基因的拷贝数变异区域，同时利用另外一对特异性PCR引物扩增牛通用转录因子3基因作为对照，最后利用2
- 一种多形微眼藻荧光定量PCR检测方法-201610055659.6
- 甄毓;乔玲;米铁柱 - 中国海洋大学
- 2016-01-28 - 2020-02-07 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种多形微眼藻荧光定量PCR检测方法，其中，包括A、藻种培养及收集，B、藻类总DNA的提取，C、核糖体18S rDNA的PCR扩增，D、电泳检测及测序，其特征在于，进一步包括如下步骤：E、多形微眼藻荧光定量PCR特异性引物的设计和验证，F、多形微眼藻18S rDNA质粒标准品制备，G、多形微眼藻细胞‑质粒标准曲线的建立，H、环境样品中多形微眼藻的定量。本发明利用多形微眼藻的特异性引物通过荧光定量PCR技术对海水中的多形微眼藻进行检测，在确保准确性的基础上，不仅提高了灵敏度，而且实现了样品在短时间内进行大批次处理的目的，大大缩短了工作时间，为实现对多形微眼藻进行快速、准确的定性定量研究提供了强大的工具。
- 一种从动物血浆中分离外泌体并进行纯度检测的方法-201511000193.1
- 龙科任;马继登;李明洲;李学伟;顾以韧 - 四川农业大学
- 2015-12-28 - 2020-02-07 - C12Q1/6851
- 本发明提供了一种从动物血浆中分离外泌体并进行纯度检测的方法，主要步骤为：首先用PBS溶液以1:1的比例稀释血浆；通过离心去除血浆中的细胞成分和细胞碎片；通过超高速离心沉淀外泌体；使用250μl PBS溶液悬浮外泌体；使用Trizol LS抽提外泌体悬浮液中的总RNA；对抽提出的总RNA进行poly(A)反转和相关基因的定量，并对纯度进行检测。该发明有利于日后对血浆外泌体内容物和外泌体相关功能的研究。
- 一种用于制备微滴式数字PCR中液滴的油相组合物及其应用-201810813085.3
- 宋小慧;张菁 - 领航基因科技(杭州)有限公司
- 2018-07-23 - 2020-02-04 - C12Q1/6851
- 本发明涉及生物技术领域，公开了一种用于制备微滴式数字PCR中液滴的油相组合物及其应用。本发明所述油相组合物包括油相1、油相2、油相3以及表面活性剂1；其中，油相1为矿物油或烷烃，油相2为烷烃或酯油，油相3为烷烃，所述油相1‑3有两个以上为烷烃时互不相同；表面活性剂1为硅氧烷类油包水活性剂。本发明联合使用特定的油相和表面活性剂，组成一种性能优异的油相组合物，使其应用在液滴式数字PCR中可使形成的液滴更加均匀，彼此间的偏差较小，同时可充分的扩增目标序列，更加接近目标序列的初始拷贝数，使PCR结果更加准确。
- 一种PCAT1实时荧光定量PCR检测方法-201810819921.9
- 鞠少卿;申娴娟;丛辉;王旭东;戚菁;施维 - 南通大学附属医院
- 2018-07-24 - 2020-02-04 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种PCAT1实时荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：A、血清中总RNA的提取；B、逆转录合成cDNA；C、荧光定量PCR扩增；D、对上述建立荧光定量PCR检测PCAT1的方法进行特异性、重复性方法学评价，本发明易操作、准确，所采用的实时荧光定量PCR检测方法，巧妙的运用PCR技术的DNA高效扩增，高效、灵敏的检测PCAT1。
- 一种β-内酰胺类抗生素抗性基因blaTEM的特异性引物、检测方法及应用-201910905955.4
- 赵化冰;任璐;路福平;董萌;刘东青;师三媛;杨柳;杨晨;史婷婷;王晓康;李子翼 - 天津科技大学
- 2019-09-24 - 2020-02-04 - C12Q1/6851
- 本发明涉及一种β‑内酰胺类抗生素抗性基因blaTEM的特异性引物，所述引物的核苷酸序列为：F1：SEQ ID NO:1；R1：SEQ ID NO:2。本引物具有较高的特异性，检测方法的检测过程无需依靠标准曲线来测定核酸量，而是可以直接读取DNA分子的拷贝数，大大简化操作步骤，该方法结果判读直观准确、精确度高、灵敏度高，重复性好，同时具有高效性，最低可检测25.5个拷贝数。
- 一种四环素类抗生素抗性基因tetX的特异性引物、检测方法和应用-201910905969.6
- 赵化冰;董萌;路福平;师三媛;任璐;刘东青;史婷婷;李子翼 - 天津科技大学
- 2019-09-24 - 2020-02-04 - C12Q1/6851
- 本发明涉及一种四环素类抗生素抗性基因tetX的特异性引物，所述引物的核苷酸序列为：F1：SEQ ID NO:1；R1：SEQ ID NO:2。本引物具有较高的特异性，检测方法的检测过程无需依靠标准曲线来测定核酸量，而是可以直接读取DNA分子的拷贝数，大大简化操作步骤，该方法结果判读直观准确、精确度高、灵敏度高，重复性好，同时具有高效性，最低可检测17个拷贝数。
- POCT的PCR结果快速获得方法及装置-201911077378.0
- 罗海贝;王臣 - 上海千履基因科技有限公司
- 2019-11-06 - 2020-01-31 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种POCT的PCR结果快速获得方法，将待检测样品平均分成N份，将各个平分后的样品于相同的条件下同时进行荧光定量PCR扩增，并实时监测各个平分后的样品的荧光值，N为不小于100的自然数，平分后的样品分别位于不同的反应容器内且均被放置于相同的空间内并处于同样的反应条件进行PCR扩增，各个反应容器的高宽比大于1。利用本发明的方法，能够将利用PCR进行POCT的检测时间缩短至15分钟以内，实现分子诊断真正的即时化，本发明采用分液扩增模式、多点背景对比寻找突破阈线、增加光路检测距离三个方面进行PCR扩增设计和检测模式实现快速扩增的目标，具备稳定、快速、准确的特点。
- 维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法-201910869317.1
- 庞全海;李振;王天元;陈昱筱;王帅;秦红;张娟;梁睿;李颖平;赵礼军;谢莹;赵红霞;赵敏;王栋梁;李候梅;禹波;杨平 - 山西农业大学
- 2019-12-07 - 2020-01-24 - C12Q1/6851
- 本发明公开了维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法，包括以下步骤：步骤一，试验动物分组与饲养；步骤二，绵羊组织取样；步骤三，绵羊组织总RNA提取；步骤四，cDNA合成；步骤五，细胞凋亡相关基因及VDR的引物设计；步骤六，荧光定量PCR；步骤七，数据统计与分析；对照组维生素D3的添加量为0IU/kg，试验组维生素D3的添加量分别为300IU/kg、600IU/kg、900IU/kg和1200IU/kg；该维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法，通过微贮豆秸中添加不同浓度维生素D3饲喂绵羊探索研究维生素D3对绵羊细胞凋亡的作用机制，最后得出维生素D3添加水平在300IU/kg时有利于提高绵羊免疫力及降低组织细胞凋亡，实验过程严谨，结果可靠。
- 一种在多重PCR体系内加入内参定量核酸拷贝数的方法-201911152307.2
- 浦浩;黄文潘;张亚楠;李阳 - 上海冰缘医疗科技有限公司
- 2019-11-22 - 2020-01-24 - C12Q1/6851
- 本发明提供了一种在多重PCR体系内加入内参定量核酸拷贝数的方法，属于核酸分子生物学检测技术领域；所述方法，包括以下步骤：1）构建内参和目标基因扩增效率系数训练集，获得内参与目标基因扩增系数之间的关系；2）在目标基因的多重PCR体系中添加确定拷贝数的内参以及扩增内参的引物后，进行两轮多重PCR扩增后获得测序文库；3）对所述测序文库进行测序，获得测序数据；4）分析所述测序数据获得内参和目标基因的reads数，利用步骤1）中获得的内参与目标基因扩增效率系数之间的关系，计算目标基因的拷贝数。本发明所述方法能够快速的定量样品中特定核酸基因的拷贝数，准确度高。
- 石油污染厌氧环境中石油烃厌氧降解基因bamA含量的测定方法-201810767132.5
- 宋本如;唐景春;甄梅楠;刘小妹 - 南开大学
- 2018-07-13 - 2020-01-21 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种石油污染厌氧环境中石油烃厌氧降解基因bamA含量的测定方法,方法以石油污染厌氧环境中烷烃、苯系物为目标降解组分，采用非培养的分子生物学技术实时荧光定量PCR对两种降解基因进行定量。方法主要包括DNA的提取，设计特异性扩增两种降解基因的简并引物，确定PCR条件，制作荧光定量PCR标准曲线，样品测定。本发明所述方法是一种能够检测厌氧条件下微生物降解石油烃活性的新型方法，同时能准确反映微生物的降解代谢途径和区域石油污染状况，在环境污染监测和治理方面有重要的应用价值。
- 石油污染厌氧环境中石油烃厌氧降解基因masD含量的测定方法-201810767133.X
- 宋本如;唐景春;甄梅楠;刘小妹 - 南开大学
- 2018-07-13 - 2020-01-21 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种石油污染厌氧环境中石油烃厌氧降解基因masD含量的测定方法,方法以石油污染厌氧环境中烷烃、苯系物为目标降解组分，采用非培养的分子生物学技术实时荧光定量PCR对两种降解基因进行定量。方法主要包括DNA的提取，设计特异性扩增两种降解基因的简并引物，确定PCR条件，制作荧光定量PCR标准曲线，样品测定。本发明所述方法是一种能够检测厌氧条件下微生物降解石油烃活性的新型方法，同时能准确反映微生物的降解代谢途径和区域石油污染状况，在环境污染监测和治理方面有重要的应用价值。
- 基于Taqman探针的慢性肾脏病相关基因检测荧光定量PCR一步法试剂盒及其应用-201710784821.2
- 刘必成;周乐汀;雷向东 - 东南大学;上海境象生物科技有限公司
- 2017-09-04 - 2020-01-21 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种基于Taqman探针的慢性肾脏病相关基因检测荧光定量PCR一步法试剂盒及其应用，该试剂盒包括检测VIM、BCL2、PODLX和TGFB1基因的上下游引物及探针，还包括检测B2M内参基因的上下游引物及探针。本发明荧光定量PCR试剂盒具有取材量小、操作简便且检测周期短的优点，能够用于慢性肾脏病多种相关发病基因的快速检测。同时在检测过程中mRNA逆转录及荧光定量一步完成，均在单管中进行，勿需打开管盖，荧光信号的产生不仅强烈依赖于靶模板同探针的杂交，而且同时强烈依赖于靶模板的扩增，故不存在非特异性扩增现象。从而可快速、特异、灵敏地检测慢性肾脏病相关基因的mRNA表达水平。
- 一种快速同时定量检测多种抗生素抗性基因的试剂盒及其检测方法-201911076198.0
- 谢冰;王盼亮;李许南 - 华东师范大学
- 2019-11-06 - 2020-01-17 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种快速同时定量检测环境中多种抗生素抗性基因的试剂盒及其检测方法，所述检测方法包括：(1)以环境样品中的DNA为模板，加入Solution I、Solution II、Solution III。(2)标准质粒(Solution IV)稀释后，加入Solution I、Solution II、Solution III。(3)调节StepOne
- 一种用于PD-L1表达水平检测的试剂盒-201911088209.7
- 金鑫浩;刘一博;隋硕;任鲁风;张未来;俞育德;于军 - 宁波胤瑞生物医学仪器有限责任公司
- 2019-11-08 - 2020-01-17 - C12Q1/6851
- 本发明属于PD‑L1表达检测技术领域，具体涉及一种用于PD‑L1表达水平检测的试剂盒。所述试剂盒包括PD‑L1特异性引物、GAPDH特异性引物、PD‑L1探针、GAPDH探针。与现有技术相比，本发明提供的试剂盒是基于数字PCR检测系统，上样后全自动检测，减少人为操作干扰，结果稳定，准确度高，数据扩增效果好，能够更便捷的用于辅助诊断与临床治疗指导。
- 基于子宫颈脱落细胞基因检测的宫颈癌分期方法与检测试剂盒-201911121787.6
- 曾新;柳宇;许争峰;李萍;胡平;毛鹏远;张根;芮璨;栾婷 - 南京市妇幼保健院
- 2019-11-15 - 2020-01-14 - C12Q1/6851
- 本发明公开了基于子宫颈脱落细胞基因检测的宫颈癌分期方法，采集子宫颈脱落细胞和活体组织、提取全基因组DNA、基因检测以及免疫组化检查；本发明还公开了基于子宫颈脱落细胞基因检测的宫颈癌分期检测试剂盒，包括含有特异性引物的PCR反应液；本发明对正常子宫颈、癌前病变子宫颈、子宫颈癌的脱落细胞进行DNA定量检测，从脱落细胞的角度阐明了P53、P16与子宫颈癌发生发展的相关性，为宫颈癌的分期诊断提供了新的依据；提取宫颈脱落细胞中的DNA进行检测，具有采样量低的优势；取材简便无创且患者无不适感，可在妇产科常规检查生殖系统疾病时获得待检样本，本发明还具有取材无创、副作用小、患者依从性好的优势。
- 转化DNA回收率的检测方法及引物-201911153500.8
- 刘蕊;王辉 - 上海鹍远健康科技有限公司
- 2019-11-22 - 2020-01-10 - C12Q1/6851
- 本发明提供一种检测DNA回收率的方法，包括：1)用引物对DNA样品进行qPCR，获得转化的Ct值，其中所述DNA样品经转化以使未经修饰的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶碱基，所述引物识别所述DNA样品中的无胞嘧啶碱基DNA片段；和2)使用所述Ct值以及用所述引物对未转化的DNA样品进行qPCR所获得的Ct值计算DNA回收率。所述方法还包括：用识别转化后DNA的引物对经转化的DNA样品进行qPCR，获得Ct值，然后评估步骤2)中的DNA回收率。
- 一种拷贝数变异的检测方法-201810685549.7
- 严海生;郭健;丁利杰 - 深圳华大生命科学研究院
- 2018-06-28 - 2020-01-07 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种拷贝数变异的检测方法。该方法包括杂交和连接(同时进行)、定量PCR检测两个步骤。杂交是指探针和DNA单链靶序列通过互补配对进行结合，所述探针为上游探针和下游探针，上游探针5’端为通用序列，3’端为与靶向序列互补的序列，下游探针5’端为与靶向序列互补的序列，3’端为通用序列；连接是利用特异性DNA连接酶将杂交后相邻的两段探针连接成一条完整的核酸单链；定量PCR利用两对通用引物进行，然后根据CT值计算出原始DNA的拷贝数目。本发明方法可实现拷贝数变异的检测。该方法简单、无局限性、成本低、特异性极高，且引物可以通用，可实现大规模检测。
- 一种用于检测microRNA分子表达的检测试剂及检测方法和试剂盒-201910998931.8
- 陈鹏;张永刚;吴义江;李玉林 - 魔方基因科技有限公司;吉林大学
- 2019-10-21 - 2020-01-07 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种用于检测microRNA分子的检测试剂，包括：用于检测miR‑4448，miR‑338‑3p，miR‑190‑5p，miR‑485‑5p和/或miR‑9‑5p的正向检测引物和反向检测引物；其中，所述正向检测引物包括如序列表中的SEQ ID NO.1所示的碱基序列、SEQ ID NO.2所示的碱基序列、SEQ ID NO.3所示的碱基序列、SEQ ID NO.4所示的碱基序列和/或SEQ ID NO.5所示的碱基序列；所述反向检测引物为如序列表中的SEQ ID NO.6所示的碱基序列。本发明公开了一种用于检测microRNA分子的检测方法、试剂盒和应用。
- 镰刀菌病病原菌RT-PCR检测引物和探针组合及试剂盒-201710061639.4
- 龚杰;张雯;吴伟伟;陈见友;陆捷洁;韩娜;张婷婷;黎青山 - 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所
- 2017-01-26 - 2020-01-07 - C12Q1/6851
- 本发明提供一种镰刀菌病病原菌实时荧光定量PCR检测引物和探针组合及试剂盒。所述引物和探针组合的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1‑12所示。本发明的试剂盒能够快速、特异、灵敏、稳定对角膜镰刀菌病病原菌进行分子诊断。在建立了可靠的镰刀菌病病原菌检测体系的基础上，本发明针对性地设计了竞争性内参，确保阴性结果的真实可信。同时，本发明提供的试剂盒包含改良的DNA提取体系，能快速有效地完成DNA提取过程，使检测更为快捷方便。
- 超高通量的单细胞核酸实时荧光定量分析方法-201910912751.3
- 张威;李金泽;周连群;张芷齐;李传宇;郭振;姚佳;李超 - 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
- 2019-09-25 - 2020-01-03 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种超高通量的单细胞核酸实时荧光定量分析方法，包括以下步骤：1)提供一种微孔阵列芯片，所述微孔阵列芯片上设置有至少一个微孔阵列区，所述微孔阵列区包括多个微孔，所述微孔内壁上修饰有至少一个DNA探针；2)将待测样品加入所述微孔阵列芯片中，通过所述微孔捕获单细胞；3)通过所述DNA探针捕获目标核酸分子；4)进行PCR扩增检测，通过荧光定量分析，实现单细胞基因表达水平分析。本发明的方法可以实现十万量级、百万量级的单细胞捕获，通过多种荧光标记可实现多个基因位点的实时定量PCR分析检测，相比于现有产品，极大的提升了检测通量，并且实现了单个细胞的分析而非群体细胞分析。
- 一种数字PCR液滴形成方法-201911065523.3
- 吴炫烨;关一民 - 上海新微技术研发中心有限公司
- 2019-11-04 - 2019-12-31 - C12Q1/6851
- 本发明提供一种数字PCR液滴形成方法，包括步骤采用汽化部件使部分数字PCR溶液液体汽化并将剩余所述数字PCR溶液液体快速推入液滴形成油中，以形成数字PCR液滴。本发明使用热泡技术进行高速数字PCR液滴形成，可以实现大于1000个每秒的液滴形成速度，并具有高效的数字PCR油利用率。
- 实时荧光定量PCR检测外源GhCAD6基因在棉花纤维中表达量的方法-201810706577.2
- 胡文冉;苏秀娟;李晓荣;周小云;杨洋;李波;范玲;樊国全;刘建喜;邓晓娟 - 新疆农业科学院核技术生物技术研究所(新疆维吾尔自治区生物技术研究中心);新疆农业大学
- 2018-06-20 - 2019-12-27 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种采用实时荧光定量PCR检测外源GhCAD6基因在棉花纤维中的表达量的方法，首先采用热硼酸‑蛋白酶K法提取出棉花纤维的RNA，反转录成cDNA，利用特异性引物和内参基因，在特定的反应条件和反应程序下进行荧光RT‑PCR，检测外源GhCAD6基因在不同发育阶段棉纤维中的表达量，该方法自动收集荧光信号，避免了肉眼判断的主观性，提高了实验的灵敏度，保证了结果的可靠性和重复性，免除了常规PCR中的电泳、定量扫描等后续繁琐步骤，大大缩短了实验时间；本发明中棉花GhCAD6基因实时荧光RT‑PCR检测方法的建立，为研究棉花GhCAD6基因表达调控机理及利用其改良棉花纤维品质的研究奠定了基础。
- 检测DNA聚合酶活性的方法及检测试剂盒-201710324886.9
- 蔡统聪;邓艳华;杨浩;黄田田;孙康成;王益琼 - 菲鹏生物股份有限公司;广东菲鹏生物有限公司
- 2017-05-10 - 2019-12-27 - C12Q1/6851
- 本发明涉及一种检测DNA聚合酶活性的方法及检测试剂盒。该方法将待测DNA聚合酶与足量的待补平模板混合，在dNTP存在的条件下，通过待测DNA聚合酶诱导待补平模板中的第一DNA片段延伸形成与凸出片段的碱基互补的补平片段得到补平模板。补平模板中的U碱基被足量的UDG酶消化去除，得到适于PCR扩增的模板，正向引物针对凸出片段设计，反向引物针对第一DNA片段的5’端设计，诱导第一模板链扩增。而未经补平的模板经消化酶去除U碱基后则无法与正向引物配对，即不能进行PCR扩增反应。将待测DNA聚合酶的CT值带入由DNA聚合酶标准品建立的标准曲线中，运算即可获得待测DNA聚合酶的酶活性。
- 一种基于Cas9切口酶偶联DNA聚合酶的恒温核酸检测分析方法及试剂盒-201910119855.9
- 叶邦策;尹斌成;王婷 - 华东理工大学
- 2019-02-18 - 2019-12-24 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种基于Cas9切口酶偶联DNA聚合酶的恒温核酸检测分析方法，是在恒温条件下特异性检测靶标核酸；包括以下步骤：以两条分别与靶DNA序列互补的sgRNA序列，两组Cas9n‑sgRNA复合物分别与前间区序列邻近基序毗邻的匹配靶DNA序列结合后，通过Cas9n单口切割酶活性和恒温DNA聚合酶链置换活性，获得一条单链靶DNA序列，该序列在引物1和引物2，DNA聚合酶及Cas9n‑sgRNA复合物的共同作用下，在恒温条件下反复进行引物杂交，延伸，切割，链置换反应，扩增获得大量靶DNA序列，荧光染料与双链DNA产物结合产生荧光信号，实时测定反应体系中的荧光信号强度，与标准工作曲线对比，计算出靶标基因组或DNA序列的浓度。本发明尤其适用于核酸即时检测。
- 一种针对发酵乳中以醋化醋杆菌为主的系列杂菌污染的高精度特异性数字PCR检测方法-201910730701.3
- 周巍;史国华;张岩;李永波;杨岚;陈晨;王赞 - 河北省食品检验研究院(国家果类及农副加工产品质量监督检验中心、河北省食品安全实验室)
- 2019-08-08 - 2019-12-20 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种针对发酵乳中以醋化醋杆菌为主的系列杂菌污染的高精度特异性数字PCR检测方法。本发明的方法首先对待测杂菌进行死菌去干扰处理，然后对细菌DNA进行低杂质高纯度的提取，研发设计待测菌的特异性引物探针，设定ddPCR反应体系、反应程序及其退火温度，使得检测方法满足特异性、灵敏度和定量化的要求。本发明构建的方法特异性好，无非特异性扩增，具有良好的灵敏度及定量化优势。
- 专利分类
