本发明公开了一种评价公猪精液精子活性的分子标记及应用，属于家畜分子标记制备技术领域。其分子标记为ssc‑miR‑26a‑5p，所述ssc‑miR‑26a‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明发现ssc‑miR‑26a‑5p与猪PTEN基因存在潜在结合位点，利用双荧光素酶报告系统和精液精子细胞转染试验验证了ssc‑miR‑26a‑5p与猪PTEN基因的靶标关系。ssc‑miR‑26a‑5p可作为评价公猪精液精子活性的分子标记，对猪育种改良有较好的应用前景。
本发明公开了一种调控猪Ptrf基因表达的增强子序列的鉴定及其应用，猪Ptrf基因增强子，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。利用双荧光素酶报告系统在293FT细胞中证实了该增强子活性，能显著增强Ptrf启动子的转录活性。后续，公开了在猪间充质干细胞中稳定转染dCas9‑KRAB‑sgRNA，构建Ptrf基因增强子表达抑制细胞株的方法，本发明基于CRIS PR/dCas9‑KRAB系统实现对Ptrf基因增强子的表达抑制，具有操作便利、干扰效率高的优势。这一Ptrf基因增强子序列可为后续制备调控脂肪含量的基因编辑猪提供技术支持。
本发明公开了一种Ptrf基因增强子及其在脂肪沉积调控中的应用，鼠Ptrf基因增强子，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。利用双荧光素酶报告系统证实该增强子，能在293细胞以及3T3‑L1细胞中显著增强鼠Ptrf基因启动子的转录活性。更重要的是，在鼠腹股沟脂肪组织中直接注射慢病毒浓缩液，增强子抑制对于小鼠的脂肪沉积性状产生了显著的改变。本发明基于CRISPR/dCas9‑KRAB系统实现对鼠Ptrf基因增强子的表达抑制，并首次通过慢病毒载体直接获得增强子表达抑制的动物模型，具有操作便利、干扰效率高的优势。
