[发明专利]用于马铃薯淀粉真伪鉴别及其掺杂分析的荧光定量PCR检测方法

说明书

本发明公开了一种用于马铃薯淀粉真伪鉴别及其掺杂分析的荧光定量PCR检测方法，包括如下步骤：A、从待测淀粉中提取其DNA；B、荧光定量PCR引物设计；C、荧光定量PCR反应体系和操作程序；D、鉴定分析：如果所得结果中显示有一条扩增曲线，且同时满足两个特定条件，则鉴定被测品被测品为真马铃薯淀粉；如果所得结果显示有多条扩增曲线，且其中一条曲线同时满足两个特定条件，则鉴定被测品为掺假马铃薯淀粉；如果所得结果显示有多条曲线，但是所有曲线均不能同时满足两个特定条件，则鉴定被测品为不含马铃薯淀粉。本发明提供的荧光定量PCR技术对于淀粉及制品中掺假检验具有快速、简单、准确、特异性好和灵敏度高特性，为食品检验分析提供有力的手段。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域一种，尤其涉及淀粉类产品的生物检测技术及应用。

背景技术

淀粉类食品一直是我们日常生活中较为常见的食品，现阶段的淀粉已经不仅仅只为人们日常所食用，更是作为一种工业原料在人类生活中应用广泛。目前常见的淀粉种类有：红薯淀粉、马铃薯淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、苜蓿淀粉等，不同的淀粉之间理化性质都有所不同且原料的成本和加工工艺使得不同的淀粉在价格上有所差异，由于以上原因导致淀粉及制品中掺假现象越发严重。这些掺假的淀粉及制品，不仅会对人的身体健康造成巨大的影响，更是一种商业欺诈行为，严重打乱了市场秩序，所以一种能够快速准确的鉴别出淀粉及制品中掺假成分的方法是十分重要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于马铃薯淀粉真伪鉴别及其掺杂分析的荧光定量PCR检测方法。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。

用于马铃薯淀粉真伪鉴别及其掺杂分析的荧光定量PCR检测方法，包括如下步骤：

A、针对待测淀粉均呈现为干品的特点，淀粉中含有包括糖类在内的多种次生代谢产物对DNA提取造成干扰，采用具有针对性的特定提取方法从待测淀粉中提取其DNA；

B、荧光定量PCR引物设计：以序列表中SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示的人工核苷酸序列为上下游引物；以序列表中SEQ ID NO：3所示的人工核苷酸序列为探针；对待测样品进行检测；

C、根据待测品及所设计引物的特点，设置特定的荧光定量PCR反应体系和操作程序，完成荧光定量PCR；

D、鉴定分析：

D-1、如果所得结果中显示有一条扩增曲线，且同时满足如下两个条件：①曲线的起跳在15-25个循环之前；②扩增浓度数值不低于2-5；则鉴定被测品被测品为真马铃薯淀粉；

D-2、如果所得结果显示有多条扩增曲线，且其中一条曲线同时满足如下两个条件：①曲线的起跳在15-25个循环之前；②扩增浓度数值不低于2-5；则鉴定被测品为掺假马铃薯淀粉；

D-3、如果所得结果显示有多条曲线，但是所有曲线均不能同时满足如下两个条件：①曲线的起跳在15-25个循环之前；②扩增浓度数值不低于2-5；则鉴定被测品为不含马铃薯淀粉；

D-4、如果所得结果显示没有扩增曲线，则鉴定被测品为不含马铃薯淀粉。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤A中，所述从待测淀粉中提取其DNA的特定方法，包括如下步骤：

A-1、称取样品100 mg，放入研钵中，加入定量的液氮进行充分地研磨，制成样品粉末；

A-2、将缓冲液GP1放入水浴锅65 ℃中，进行预热处理，同时加入0.1%浓度体积的巯基乙醇；

A-3、将样品粉末放入经过处理的缓冲液GP1中了，快速地颠倒晃匀，混匀后将离心管迅速地放入水浴锅65 ℃中，并保持20 min，并在这段时间内不断地颠倒晃匀样品；