[发明专利]一次性鉴别羊肉、鸡肉、鸭肉、猪肉的PCR检测方法及试剂盒

摘要

针对市场上用猪肉、鸭肉、鸡肉下脚料经过加工冒充羊肉的现象，需要一个统一的检测方法，以鉴别羊肉、鸭肉、猪肉、鸡肉，以及混合或加工过的肉制品中的这四种肉的成分。曾经提出或使用过的方法，如红外线光谱检测、蛋白质指纹方法、免疫学方法、随机扩增多态性DNA分析(RAPD)、限制性片段长度多态性分析(RFLP)和扩增片段长度多态性分析(AFLP)等均存在某些缺点，如检测结果不稳定、难以区分混合肉样、难以鉴别熟肉制品等。本发明利用动物种属间特异性较强的线粒体DNA序列设计种属特异性引物，通过PCR反应得到长度各不相同的特异性扩增片段，对扩增产物电泳检测，能够一次性、准确、稳定、简单快捷的鉴别羊肉、鸭肉、猪肉、鸡肉，以及混合或加工过的肉制品中的这四种肉的成分。

主权项

为了鉴别羊肉、鸭肉、猪肉、鸡肉，利用动物种属间特异性较强的线粒体DNA序列，针对每种动物分别设计各自的种属特异性引物，分别以羊、猪、鸡、鸭4种动物的全基因组DNA为模板，通过PCR反应得到4种长度各不相同的特异性扩增片段，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，4种长度不同的条带可以在电泳图中分辨出来。4种动物对应的4对引物序列为： 羊： S‑1:5′‑GGCTCTCTCCTAGGCATTTGCTT‑3′ S‑2:5′‑AGTTGTCTGGGTCTCCGAGTAA‑3′扩增片段大小为667bp 猪： P‑1:5′‑ACCCAGCAAGCCCAGAATCAACCG‑3′ P‑2:5′‑CGAGATTGTGCGGTTATTAATGAGTCG‑3′扩增片段大小为196bp 鸡： C‑1:5′‑AATCGCAGGTATTACTATCATCCAC‑3′ C‑2:5′‑GGTGAGTATGAGAGTTAAGCCCAG‑3′扩增片段大小为148bp 鸭： D‑1:5′‑CTCATCTATCCTGCTAGCCGC‑3′ D‑2:5′‑GCCTAGTTCGGGGGTTGGTA‑3′扩增片段大小为226bp。