[发明专利]在大肠杆菌构建5-氨基乙酰丙酸C4生物合成途径的基因及其构建方法有效

专利信息
申请号: 201310063233.1 申请日: 2013-02-28
公开(公告)号: CN103146694A 公开(公告)日: 2013-06-12
发明(设计)人: 冯惠勇;刘天佳;李天明;戴宝新;刘静文 申请(专利权)人: 河北科技大学
主分类号: C12N15/11 分类号: C12N15/11;C12N15/60;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21
代理公司: 石家庄科诚专利事务所 13113 代理人: 张红卫
地址: 050018 *** 国省代码: 河北;13
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摘要: 发明公开了在大肠杆菌构建5-氨基乙酰丙酸C4生物合成途径的基因及其构建方法,通过分析5-氨基乙酰丙酸C4生物合成途径的限速步骤、中间体供给及产物分泌等问题,克隆Rhodobactersphaeroides来源的ALA合成酶基因(hemA)、Propionibacteriumshermanil来源的辅酶A转移酶基因(Cat)以及Escherichiacoli来源的ALA分泌基因(YBi),借助pETDuet-1共表达载体,共表达了合成5-氨基乙酰丙酸的hemA、生成5-氨基乙酰丙酸合成的中间体琥珀酸COA的Cat和促进5-氨基乙酰丙酸的分泌的Ybi,三个基因的共表达加强了5-氨基乙酰丙酸的生物合成,通过本发明所制备的具有C4生物途径的基因,提高了Escherichiacoli的5-氨基乙酰丙酸产量,分泌到细胞外的ALA达到1124mg/L。
搜索关键词: 大肠杆菌 构建 氨基 乙酰 丙酸 c4 生物 合成 途径 基因 及其 方法
【主权项】:
一种在大肠杆菌构建5‑氨基乙酰丙酸C4生物合成途径的基因,其特征在于借助pETDuet‑1载体,共表达三个基因:ALA合成酶基因hemA、辅酶A转移酶基因cat和ALA分泌基因YBi,所述基因序列如下:ggggaattgt gagcggataa caattcccct ctagaaataa ttttgtttaa ctttaagaag    gagatatacc atgggcagca gccatcacca tcatcaccac agccaggatc cgaattcatg    gactacaatc tggcactcga taccgctctg aaccggctcc ataccgaggg ccggtaccgg    accttcatcg acatcgagcg gcgcaagggt gccttcccga aagccatgtg gcgcaagccc    gacgggagcg agaaggaaat caccgtctgg tgcggcaacg actatctcgg catgggccag    catccggtgg tgctgggggc catgcacgag gcgctggatt cgaccggcgc cgggtcgggc    ggcacgcgca acatctcggg caccacgctc tatcacaagc gcctcgaggc cgagctcgcc    gacctgcacg gcaaggaagc ggcgctggtc ttctcgtcgg cctatatcgc caacgacgcg    accctctcga cgctgccgca gctgatcccg ggcctcgtca tcgtctcgga caagttgaac    cacgcttcga tgatcgaggg catccgccgc tcgggcaccg agaagcacat cttcaagcac    aatgacctcg acgacctgcg ccggatcctg acctcgatcg gcaaggaccg tccgatcctc    gtggccttcg aatccgtcta ttcgatggat ggcgacttcg gccgcatcga ggagatctgc    gacatcgccg acgagttcgg cgcgctgaaa tacatcgacg aggtccatgc cgtcggcatg    tacggccccc gcggcggcgg cgtggccgag cgggacgggc tgatggaccg gatcgacatc    atcaacggga cgctgggcaa ggcctatggc gtgttcggcg gctatatcgc ggcctcgtca    aagatgtgcg acgcggtgcg ctcctacgcg ccgggcttca tcttctcgac ctcgctgccg    cccgtcgtgg cggccggtgc ggcggcctcg gtgcgccacc tcaagggcga tgtggagctg    cgcgagaagc accagaccca ggcccgcatc ctgaagatgc gcctcaaggg gctcggcctg    ccgatcatcg accacggctc gcacatcgtg ccggtccatg cgggcgaccc cgtgcactgc    aagatgatct cggacatgct gctcgagcat ttcggcatct atgtccagcc gatcaacttc    ccgaccgtgc cgcgcgggac cgagcggctg cgcttcaccc cgtcgcccgt gcatgattcc    ggcatgatcg atcacctcgt gaaggccatg gacgtgctct ggcagcactg tgcgctgaat    cgcgccgagg tcgttgcctg agcggccgcg ccgcataatc gaaattaata cgactcacta    taggggaatt gtgagcggat aacaattccc catcttagta tattagttaa gtataagaag    gagatataat gcctggttca ttacgtaaaa tgccggtctg gttaccaata gtcatattgc    tcgttgccat ggcgtctatt cagggtggag cctcgttagc taagtcactt tttcctctgg    tgggcgcacc gggtgtcact gcgctgcgtc tggcattagg aacgctgatc ctcatcgcgt    tctttaagcc atggcgactg cgctttgcca aagagcaacg gttaccgctg ttgttttacg    gcgtttcgct gggtgggatg aattatcttt tttatctttc tattcagaca gtaccgctgg    gtattgcggt ggcgctggag ttcaccggac cactggcggt ggcgctgttc tcttctcgtc    gcccggtaga ttccgtctgg gttgtgctgg cggttcttgg tctgtggttc ctgctaccgc    tggggcaaga cgtttcccat gtcgatttaa ccggctgtgc gctggcactg ggggccgggg    cttgttgggc tatttacatt ttaagtgggc aacgcgcagg agcggaacat ggccctgcga    cggtggcaat tggttcgttg attgcagcgt taattttcgt gccaattgga gcgcttcagg    ctggtgaagc actctggcac tggtcggtta ttccattggg tctggctgtc gctattctct    cgaccgctct gccttattcg ctggaaatga ttgccctcac ccgtttgcca acacggacat    ttggtacgct gatgagcatg gaaccggcgc tggctgccgt ttccgggatg attttcctcg    gagaaacact gacacccata cagctactgg cgctcggcgc tatcatcgcc gcttcaatgg    ggtctacgct gacagtacgc aaagagagca aaataaaaga attagacatt aattaagcgg    ccgcataatg cttaagtcga acagaaagta atcgtattgt acacggccgc ataatcgaaa    ttaatacgac tcactatagg ggaattgtga gcggataaca attccccatc ttagtatatt    agttaagtat aagaaggaga tatacatatg atgaacgaac gcatctccaa cgagaagttg    cgcggaaaga tcatgaccgc cgatgaggcc gcagccctta tccccaatgg agcccagatc    ggcttcggcg gtttcaccgg ctcgggttac ccgaaggaac tgccccaggc cctggccaac    aggatcaagg cagcccacga gcgcggcgag gaattcaccg tcaacgcgtt caccggtgcg    tccaccgctc ccgagctcga tggtgccctg gccggcgtcg atggcatgca ctaccgcatg    ccgtaccagt cggatccgac gctgcgcaag aagatcaacg acggcaccac gctgtacacc    gacatccacc tgtcgcactc ggcccagctg gtggccgagg gcttcatggg caagctcgac    ttcgccgtgg tcgaggccgt gcgcatcacc gaggacggga acatcgttcc cacctcgtcg    gtgggcaaca acaagaccta cctcgacatg gccgagaaga tcatcatcga ggtgaactcc    tggcagtcgc ccgacctcga gggaatgcac gatatctgga atggatatct gactcccccg    aaccgtccga tcatcccgat caacaatgtg ggcgaccgca tcggcgacac cttcctgacc    atcgattccg acaaggtcgt ggcggtcatc gagaccaccg accgtgaccg caactcgccg    ttcaagccga ttgacgacga ttcgcgcgcc attgccggct acctgctcga cttctatgcc    aacgaggtca agcacggccg cctgccgaag aacctgctgc cgctgcagtc cggcgtgggc    aatatcccca acgccgtgct cgacggcctg ctgcattccg acctcgagaa cctcaccagc    tacaccgagg tgatccagga cggcatggtc gacctgatcg acgccggcaa gctggccgtc    gcctcggcaa cggccttctc gctgagcccc gattacgcgc acaacatgaa tgagaacgcg    aagaactacc gcaagtcgat cgttcttcgt ccccaggaga tctcgaacca tcctgaggtc    atccgtcgcc tgggcgtgct gtcgtgcaat ggcatgatcg aggccgacat ctacggcaat    gtgaactcca cccacgtgat gggcacccgc atgatgaacg gcatcggtgg ttccggtgac    ttcacgcgca acgcctacat ctcggcattc gtgtcgccgt cgaccgccaa ggacggcgcc    atctcggcga tcgtgccgat ggtgagccac gtcgaccaca ccgagcatga cgtgatggtg    atcatcaccg agcagggcat cgccgacctc cgtggcctgg caccgcgcct gcgcgcccag    aagatcatcg acaattgcgt gcatcccgat ttccgtgcgc agctgcagga gtacttcgac    cactcgctgg tgacgtcgaa ggccaagcac acgccgcacg acctgcgcca ttcctacgat    tggcacctga acttcatcga gaacggcacg atgaagcttt cgcactaccg ttgacatatg   gcagatctca attggatatc ggccggccac gcgatcgctg acgtcggtac cctcgagtct    ggtaaagaaa ccgctgctgc gaaatttgaa cgccagcaca tggactcgtc tactagcgca    gcttaattaa cctaggctgc tgccaccgct gagcaataac tagcataacc ccttggggcc    tctaaacggg tcttgagggg ttttttgctg aaaggaggaa ctatatccgg attggcgaat    g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  • 左永春;李涛;郭树春 - 内蒙古大学
  • 2018-01-12 - 2019-09-20 - C12N15/11
  • 本发明公开了一种组织特异性基因转录调控元件的构建方法,包括以下步骤:步骤1、目标基因序列的筛选;步骤2、多物种直系同源基因启动子序列提取;步骤3、MEME和XXmotif识别DNA结合模体;步骤4、序列一致性核心序列截取;步骤5、序列DNA甲基化,染色质开放状态功能位点优化;步骤6、增强子和第一外显子拼接。本发明的组织特异性基因转录调控元件的构建方法设计合理,能较为精准的优化出组织特异性高效调控下游基因的最优调控启动子元件,有效提高目标基因的组织特异性表达效率。
  • 一种双引物及其应用-201910472273.9
  • 汪雪;金柳;王孟强 - 汪雪;上海索境生物科技有限公司
  • 2019-05-31 - 2019-09-03 - C12N15/11
  • 本发明属于生物技术领域,涉及一种双引物及其应用,具体涉及一种用于滚环扩增/鉴定环形核酸的双引物,其组成的反应体系,其组成的试剂盒及其应用,所述双引物为分散型引物,所述双引物中的第一引物和第二引物的3’端的距离为0‑1000bp,所述双引物能够对环形DNA/RNA进行分子鉴定,所述鉴定方法准确、快速、便捷、直观,为新型环形DNA/RNA的发现提供有效手段。
  • 一种校对活性酶抑制剂及其降低抑制作用的方法-201510937671.5
  • 戴忠敏;朱晓静;孙淑慧;谢冰花;邱猛生 - 杭州师范大学
  • 2015-12-15 - 2019-09-03 - C12N15/11
  • 本发明公开了一种校对活性酶抑制剂及降低所述校对活性酶抑制剂在聚合酶链式反应中对校对活性酶活性抑制的方法,所述抑制剂为含有连续或不完全连续的n个G的寡核苷酸,n为大于4的正整数;所述不完全连续为n个G中间含有1个A、T或C;本发明提供一种校对活性酶抑制剂,富含G碱基的寡核苷酸能够抑制具有校对活性的DNA聚合酶的活性,使PCR扩增失败;通过将降低含有所述抑制剂的寡核苷酸浓度(降低至不大于0.1μM),或者将富含C碱基的寡核苷酸与富含G碱基的寡核苷酸互补配对后能够降低其抑制作用。
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