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[发明专利]一种合成2’-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用-CN201910093684.7有效
发明人：刘龙;邓洁莹;陈春梅;吕雪芹;李江华;堵国成;陈坚 -专利权人：光明乳业股份有限公司
申请日： 2019-01-30 - 公布日： 2022-04-01 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供了一种合成2'‑岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用，所述重组芽孢杆菌是通过在枯草芽孢杆菌168的基因组中强化表达乳糖运输酶基因，并表达外源岩藻糖基转移酶、岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因得到的。本发明通过在基因组上强化表达乳糖运输酶基因，有效强化了乳糖运输酶的表达，提高了外源乳糖转移至细胞质中的效率，增加了细胞质中乳糖的浓度，促进了2'‑岩藻糖基乳糖的合成。本发明重组枯草芽孢杆菌的构建方法简单，便于使用，具有很好的应用前景。
一种合成岩藻糖基乳糖重组枯草芽孢杆菌及其构建方法应用

[发明专利]一种高效合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用-CN201910093694.0有效
发明人：刘龙;邓洁莹;陈春梅;吕雪芹;李江华;堵国成;陈坚 -专利权人：光明乳业股份有限公司
申请日： 2019-01-30 - 公布日： 2022-04-01 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供了一种高效合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用，所述重组芽孢杆菌是通过在枯草芽孢杆菌168的基因组中强化表达鸟苷酸激酶和核苷二磷酸激酶基因，并表达外源岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因得到的。本发明通过改造枯草芽孢杆菌168获得了可高效合成鸟苷二磷酸岩藻糖的菌株，其胞内积累量高达196.15g/L。本发明通过强化表达鸟苷酸激酶和核苷二磷酸激酶基因，强化胞内GDP‑L‑fucose合成辅因子GTP的供应，促进了鸟苷二磷酸岩藻糖的合成。本发明重组枯草芽孢杆菌的构建方法简单，便于使用，具有很好的应用前景。
一种高效合成二磷酸岩藻糖重组枯草芽孢杆菌及其构建方法应用

[发明专利]一株拮抗马铃薯疮痂链霉菌的枯草芽孢杆菌-CN201911173079.7有效
发明人：张娟;李江华;周英俊;陈坚;堵国成;杨佩珊 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-11-26 - 公布日： 2022-03-25 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一株拮抗马铃薯疮痂链霉菌的枯草芽孢杆菌，属于农业环境微生物技术领域。本发明的生防枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis YPS‑7，该菌株已于2019年9月2日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：M2019678；该生防菌可对马铃薯疮痂链霉菌具有高效的拮抗活性，在马铃薯疮痂病的防治中具有良好的应用前景。
拮抗马铃薯疮痂霉菌枯草芽孢杆菌

[发明专利]一株嗜盐四联球菌及其在酱油生产中的应用-CN202010057085.2有效
发明人：方芳;刘佳乐;陈坚;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-01-19 - 公布日： 2022-03-25 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一株嗜盐四联球菌及其在酱油生产中的应用，该菌株具有很好的增香效果，可以提升酱油的风味，酱油中的挥发性物质总量提高了154.5％，其中醇类、酸类、酯类、酚类、醛类和杂合类分别提高了159.2％、206.4％、373.8％、123.6％、62.3％和269.48％。酱油中总氨基酸含量提高了14.6％，甜味氨基酸提高了13.4％。
一株嗜盐四联球菌及其酱油生产中的应用

[发明专利]淫羊藿来源半乳糖基转移酶及其在制备金丝桃苷中的应用-CN202010348949.6有效
发明人：周景文;陈坚;吕云斌;曾伟主;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-04-28 - 公布日： 2022-03-25 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了淫羊藿来源半乳糖基转移酶及其在制备金丝桃苷中的应用，属于基因工程及生物医药技术领域。本发明提供了半乳糖基转移酶及表达半乳糖基转移酶的重组酿酒酵母在催化合成黄酮类化合物方面的应用，可以使构建的重组酿酒酵母在不添加UDP糖基供体的情况下，催化UDP‑半乳糖转移至槲皮素、山奈酚、杨梅素、二氢槲皮素、二氢山奈酚、二氢杨梅素、非瑟酮、桑色素以及淫羊藿素等多种黄酮底物。
淫羊藿来源半乳糖转移酶及其制备金丝中的应用

[发明专利]一种酸胁迫能力得到提高的大肠杆菌工程菌及应用-CN202011258998.7有效
发明人：张娟;杨谨华;堵国成;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-11-12 - 公布日： 2022-03-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种酸胁迫能力得到提高的大肠杆菌工程菌及应用，属于微生物工程技术领域。本发明以镍离子ABC转运蛋白周质结合蛋白NikA的基因为目的基因，以大肠杆菌为表达宿主，成功构建了一类可广泛应用于制备食品、药品、饲料以及化学品的大肠杆菌工程菌；该菌株酸胁迫能力得到了显著的提高，其对衣康酸的抗性是对照菌株的6.3倍；对D‑乳酸的抗性是对照菌株的3.3倍；对琥珀酸的抗性是对照菌株的1.6倍。
一种胁迫能力得到提高大肠杆菌工程应用

[发明专利]一种氧化葡萄糖酸杆菌中基因敲除的方法-CN202010978779.X有效
发明人：周景文;秦志杰;杨宇彤;陈坚;曾伟主;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-09-17 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种氧化葡萄糖酸杆菌中基因敲除的方法，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明将相应靶基因crRNA及活性Cas3在氧化葡萄糖酸杆菌中进行表达。通过验证对氧化葡萄糖酸杆菌中目的基因的敲除作用，表明本发明的这种敲除方法能够有效敲除氧化葡萄糖酸杆菌中目的基因，与现有的在氧化葡萄糖酸杆菌中敲除基因的方法相比，操作更加简便、快捷、高效。
一种氧化葡萄糖杆菌基因方法

[发明专利]齐整小核菌内源小核菌胶水解酶及应用-CN202011172161.0有效
发明人：曾伟主;周景文;谭润卿;陈坚;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-10-28 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12N9/24 文献下载
摘要：本发明公开了齐整小核菌内源小核菌胶水解酶及应用，属于酶工程技术领域。本发明从齐整小核菌中挖掘出14个潜在的β‑葡聚糖酶基因，在毕赤酵母中对潜在的水解酶基因进行异源表达并进行功能验证，筛选获得了对小核菌胶具有正向水解效果的小核菌胶水解酶及其编码基因。该小核菌胶水解酶能够在pH 6.0的条件下对小核菌胶进行水解，使数均分子量由2.748×107Da降低至1.923×107Da，克服小核菌胶三维结构的束缚直接对糖苷键进行切割。
齐整小核菌内源胶水应用

[发明专利]用于基因表达的氧化葡萄糖酸杆菌穿梭载体-CN202010788755.8有效
发明人：周景文;陈坚;刘立;曾伟主;堵国成;李江华 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-08-07 - 公布日： 2022-03-04 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了用于基因高效率表达的氧化葡萄糖酸杆菌穿梭载体，属于基因工程领域。本发明筛选了氧化葡萄糖酸杆菌内源质粒可能的复制蛋白，并利用该类内源复制蛋白构建一系列的穿梭载体，将其转入氧化葡萄糖酸杆菌内进行验证，发现其转化效率和广宿主质粒pBBR‑MCS相比有较大的提高；并将穿梭载体用于蛋白的表达，使氧化葡萄糖酸杆菌的L‑山梨糖产量比广宿主载体的表达量提高7.8％，并使底物转化时间缩短了27.2％。本发明大大提高了对氧化葡萄糖酸杆菌遗传改造的效率，实现对氧化葡萄糖酸杆菌遗传改造的不同需求。
用于基因表达氧化葡萄糖杆菌穿梭载体

[发明专利]一种低温酶解性能提高的角蛋白酶突变体及其应用-CN202110101443.X有效
发明人：张娟;李江华;周冠宇;陈坚;堵国成;冒鑫哲 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-01-26 - 公布日： 2022-03-04 - 主分类号： C12N9/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种低温酶解性能提高的角蛋白酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明对角蛋白酶基因的前肽与主酶进行易错PCR突变，构建筛选得到低温酶解活性突变重组菌，得到角蛋白酶突变体T3I/V45D/S100D。研究结果显示角蛋白酶突变体T3I/V45D/S100D在20℃的剩余酶活提升至野生亲本角蛋白酶的2.28倍，在30℃的剩余酶活提升至野生亲本角蛋白酶的1.95倍。
一种低温性能提高角蛋白突变体及其应用

[发明专利]基于高效液相色谱技术同时检测清香型酒醅中乳酸、乙酸及其衍生酯的方法-CN202111433550.9在审
发明人：赵鑫锐;赵欣怡;韩英;甄攀;周景文;堵国成;李江华;陈坚;蔚慧欣;王军燕 -专利权人：江南大学;山西杏花村汾酒厂股份有限公司
申请日： 2021-11-29 - 公布日： 2022-02-18 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明公开了基于高效液相色谱技术同时检测清香型酒醅中乳酸、乙酸及其衍生酯的方法，属于食品检测技术领域。该方法包括以下步骤：酒醅样品浸提、酒醅浸提液离心并重复上述步骤、收集两次酒醅浸提液的离心上清液、酒醅浸提液的离心上清液稀释、液相色谱分析，其中，所述浸提采用的溶剂为0％vol～100％vol乙醇溶液。通过对酒醅浸提过程中乙醇浓度的优化，建立了基于高效液相色谱技术的酒醅中乳酸、乙酸、乳酸乙酯、乙酸乙酯的定性定量检测方法。该方法操作简便，检测快速，精确性和准确性高，为白酒酒醅检测技术提供了科学的指导意义。
基于高效色谱技术同时检测香型酒醅中乳酸乙酸及其衍生方法

[发明专利]一种合成胭脂红酸的重组酿酒酵母的构建及其应用-CN202010888117.3有效
发明人：周景文;张倩;高松;陈坚;曾伟主;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-08-28 - 公布日： 2022-02-15 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种合成胭脂红酸的重组酿酒酵母的构建及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在酿酒酵母中异源表达环化酶zhuI、芳香化酶zhuJ、Octaketide synthase 1的OKS、C‑葡萄糖基转移酶UGT2、单加氧酶aptC和4’‑磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶npgA，获得能够合成胭脂红酸的重组酿酒酵母菌CA‑B2。所述重组酿酒酵母能够通过基于自身合成的乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A作为前体合成胭脂红酸，因而所述重组酿酒酵母在化妆品、纺织品、食品领域具有重要作用。
一种合成胭脂红重组酿酒酵母构建及其应用

[发明专利]一种谷氨酰胺转氨酶复合酶及其在人造肉加工中的应用-CN201910702850.9有效
发明人：刘松;王兴隆;周景文;陈坚;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-07-31 - 公布日： 2022-02-15 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种谷氨酰胺转氨酶复合酶及其在人造肉加工中的应用，属于生物工程和食品工程技术领域。本发明提供了一种谷氨酰胺转氨酶复合酶，是将枯草芽孢杆菌、Acetanaerobacterium elongatum、Marasmitruncus massiliensis、Sporobacter termitidis、茂源链霉菌来源的谷氨酰胺转氨酶进行混合或在细胞中共表达得到的。在人造肉加工中加入该酶可解决人造肉质地疏松的问题。
一种谷氨酰胺转氨酶复合及其人造加工中的应用

[发明专利]一种提高枯草芽孢杆菌核酸含量的方法-CN202010284509.9有效
发明人：刘延峰;刘龙;宿安琪;堵国成;李江华;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-04-13 - 公布日： 2022-02-15 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌核酸含量的方法，属于基因工程领域。本发明通过敲除ATP结合蛋白基因oppD、鞭毛钩帽组件蛋白基因flgD和鞭毛蛋白基因Hag，并结合在特定筛选压力下的适应性进化方法，获得比生长速率提高的菌株，使枯草芽孢杆菌的生长速率提高24.18～75.05％甚至更高，并使核酸含量提高10.31～37.56％甚至更高。本发明的方法可缩短菌株的发酵周期，提高核糖核酸的生产力，并有助于提高市场竞争力。
一种提高枯草芽孢杆菌核酸含量方法

[发明专利]一种可高效吸附铅离子的基因工程菌及其应用-CN202110637415.X有效
发明人：房峻;张娟;赵丹丹;陈坚;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-06-08 - 公布日： 2022-02-15 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种可高效吸附铅离子的基因工程菌及其应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明以大肠杆菌BL21(DE3)作为表达宿主，成功构建了一种表达功能化淀粉样纤维的重组菌。本发明还将此基因工程菌应用于重金属离子吸附中，在初始铅离子浓度为50mg/L时，反应6h后铅离子去除率达到98.26％，具有较优的金属离子去除率；同时，本发明提供的基因工程菌对除铅离子外的其他重金属离子废液也具有较好的除去能力，其中对于终浓度为80mg/L的铜离子溶液，去除率为59.7％；对于1mg/L的汞离子溶液，去除率可达96.2％，因此，本发明的菌株在水环境中金属离子吸附处理领域具有较好的工业应用价值。
一种高效吸附离子基因工程及其应用