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[发明专利]一种可以利用葡萄糖高效合成2-KLG的氧化葡萄糖酸杆菌的构建及其应用-CN202310229184.8在审
发明人： 周景文;陈坚;李光;曾伟主;李江华 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-03-10 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种可以利用葡萄糖高效合成2‑KLG的氧化葡萄糖酸杆菌的构建及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在氧化葡萄糖酸杆菌ATCC9937中敲除醛酮还原酶psAKR，整合表达2,5‑DKG转运蛋白KgtpA、基因组水平增加了2,5‑DKG还原酶DKGRA的拷贝数，同时强化了工程菌株的葡萄糖转运系统，获得能够通过葡萄糖直接合成2‑KLG的重组氧化葡萄糖酸杆菌GKLG11。所述氧化葡萄糖酸杆菌能够通过通过葡萄糖直接一步发酵合成2‑KLG，因而所述重组氧化葡萄糖酸杆菌在化妆品、纺织品、食品领域具有重要作用。
一种可以利用葡萄糖高效合成 klg 氧化杆菌构建及其应用

[发明专利]合成阿福豆素和儿茶素的酿酒酵母菌株及其应用-CN202111106294.2有效
发明人： 周景文;孙程程;徐沙;曾伟主;余世琴;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-09-22 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了合成阿福豆素和儿茶素的酿酒酵母菌株及其应用，属于基因工程技术领域。将F3H，F3’H和CPR整合至酿酒酵母基因组，得到了阿福豆素和儿茶素前体的从头合成菌株，筛选了最好催化活性的FaDFR和的VvLAR，通过连接肽的使用极大地促进了向阿福豆素和儿茶素的代谢通量，利用GAL7p和ERG1p启动子启动基因的表达，最后在阿福豆素从头合成菌株AF12中过表达TYR1，在儿茶素从头合成菌株AF13中过表达TYR1、ARO8和ZWF1，在摇瓶水平上产量分别为64 mg/l、41 mg/L，经过5 L发酵罐的优化，最终可使阿福豆素与儿茶素的产量分别达到500.5 mg/L、321.3 mg/L。
合成阿福豆素儿茶素酿酒酵母菌株及其应用

[发明专利]一组用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包-CN202110659681.2有效
发明人： 周景文;高松;曾伟主;陈坚;沐万孟 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-06-11 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一组用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包，属于基因和代谢工程领域。本发明构建和验证的多拷贝整合质粒工具包，可以通过一次转化在酿酒酵母基因组上实现多个外源基因的多拷贝、稳定的、整合型表达。并且可以通过选择不同的筛选标签在不同的Ty位点，实现多批次、多基因、稳定的、整合型表达外源基因。
一组用于酿酒酵母拷贝整合质粒工具包

[发明专利]一种适用于谷氨酸棒杆菌的高强度启动子及应用-CN202010263319.9有效
发明人： 周景文;陈坚;李宁;曾伟主;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-04-07 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种适用于谷氨酸棒杆菌的高强度启动子及应用，属于生物工程技术领域。本发明从谷氨酸棒杆菌中筛选获得了18个可提高蛋白表达强度的启动子。本发明筛选获得的启动子可导入至生产氨基酸的微生物中，经证实，在谷氨酸棒杆菌中，该启动子可强化基因的表达量，使其涉及的目标产物产量提高2～10倍甚至更高，具有重要的工业化应用价值。
一种适用于谷氨酸杆菌强度启动子应用

[发明专利]一种夹持装置、撕料装置、原料撕裂设备及加工方法-CN202010568537.3有效
发明人： 周景文;宁萌;陈坚;陈洁;王召君 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-06-19 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： B26F3/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种夹子、夹排移动装置、撕料装置、撕裂设备及方法，通过模块升降装置、自动加料机械臂、原料肉丝成型模块、撕原料肉装置、植物蛋白肉原料传送装置之间的相互配合工作，实现了对肉的加工处理，将植物蛋白肉原料进行分割处理同时不破坏拉丝蛋白的纤维结构。同时还将原料肉丝与辅料进行混合处理，进而加工为特定形状的植物蛋白肉。
一种夹持装置原料撕裂设备加工方法

[发明专利]一种自诱导表达系统及其在促进基因表达中的应用-CN202110957797.4有效
发明人：刘松;徐奎栋;陈坚;周景文 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-08-19 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明公开了一种自诱导表达系统及其在促进基因表达中的应用，属于基因工程及酶工程技术领域。本发明以枯草芽孢杆菌为宿主，通过对枯草芽孢杆菌内源启动子PS1E进行核心区域的重构以及重要区域的随机突变，然后借助流式细胞仪的高通量筛选选择高荧光值的单克隆，经测序鉴定后，突变启动子后，将变体接种到摇瓶发酵验证，得到能使荧光强度显著提高的信号肽变体序列，在既能保持自诱导特性的同时，也具有强转录特性。使用其驱动普鲁兰酶的胞外表达，可使其胞外酶活提高至对照的5.66倍，从而为基因的过量表达提供一种新的策略。
一种诱导表达系统及其促进基因中的应用

[发明专利]一种生产2-KLG的葡萄糖酸杆菌一步菌底盘细胞库的构建方法-CN202210167094.6有效
发明人： 周景文;秦志杰;李江华;陈坚;曾伟主;余世琴;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-02-23 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产2‑KLG的葡萄糖酸杆菌一步菌底盘细胞库的构建方法，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过对含有SNDHSDH的G.cerinus CGMCC 1.110与G.oxydans WSH‑004进行蛋白组分析，并对葡萄糖酸杆菌WSH‑003、CGMCC 1.49、CGMCC 1.110中SNDHSDH的功能验证，鉴定了SNDHSDH表达量低是多数葡萄糖酸杆菌不产2‑KLG的关键因素，进而通过过表达葡萄糖酸杆菌内源SNDHSDH构建了丰富的一步合成2‑KLG的底盘细胞库，为后续构建高产2‑KLG的葡萄糖酸杆菌提供了可选择的底盘细胞。
一种生产 klg 葡萄糖杆菌一步底盘细胞构建方法

[发明专利]一种提高葡萄糖酸杆菌中2-KLG产量的两阶段发酵方法-CN202210167872.1有效
发明人： 周景文;秦志杰;李江华;陈坚;曾伟主;余世琴;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-02-23 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高葡萄糖酸杆菌中2‑KLG产量的两阶段发酵方法，属于生物工程技术领域。本发明结合葡萄糖酸杆菌最适生长条件与限速酶SDH适宜的催化条件，开发了两阶段发酵策略，本发明通过控制发酵过程的前48h pH为5.8～6.2、温度为28～32℃，第49‑168hpH为6.8～7.2、温度为33～35℃，使得2‑KLG产量相比于单阶段发酵提升了34.2％，达到52.2g/L。
一种提高葡萄糖杆菌 klg 产量阶段发酵方法

[发明专利]一种生产7-O甲基圣草酚的重组大肠杆菌及应用-CN202210190961.8有效
发明人： 周景文;孙秋梦;徐沙;曾伟主;余世琴;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-02-23 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产7‑O甲基圣草酚的重组大肠杆菌及应用，属于基因工程和生物工程技术领域。本发明在大肠杆菌中异源表达来源于Perillafrutescens的甲氧基转移酶基因，实现了7‑O甲基圣草酚的合成。并通过内源强化甲硫氨酸合成途径、动态调控ATP、强化5’‑磷酸吡哆醛的合成进而整体调控转硫路径、分批添加底物等多种方式，提高了7‑O甲基圣草酚的积累量，最佳工程菌株7‑O甲基圣草酚产量达到306mg/L，为工业化生产7‑O甲基圣草酚提供了一种新的方法。
一种生产甲基圣草酚重组大肠杆菌应用

[发明专利]一种可积累莽草酸的大肠杆菌的构建及其应用-CN202210261054.8有效
发明人： 周景文;陈坚;刘东明;曾伟主;余世琴;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-03-16 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种可积累莽草酸的大肠杆菌的构建及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中敲除莽草酸激酶(aroL和aroK)阻止莽草酸的降解，然后再敲除磷酸烯醇式丙酮酸‑糖磷酸转移酶系统操纵子中的基因ptsI、葡萄糖转运酶基因ptsG，同时在基因组上用强的内源启动子Pssra‑infc替换葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶(zwF)的本地启动子，最后再通过质粒表达强化关键基因酶tktA的表达，弱化aroK的表达，进一步提高莽草酸的积累。将本发明构建得到的重组大肠杆菌在发酵罐体系中发酵生产莽草酸，发酵78h，可以积累63.494g/L的莽草酸，对工业化生物法生产莽草酸具有重要的意义。
一种积累莽草大肠杆菌构建及其应用

[发明专利]利用大肠杆菌P450酶全细胞催化合成羟基化黄酮化合物的方法及应用-CN202310079752.0有效
发明人：赵鑫锐;胡宝东;周景文;堵国成;陈坚;李江华 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-02-08 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明公开了利用大肠杆菌P450酶全细胞催化合成羟基化黄酮化合物的方法及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过筛选出高产羟基化黄酮化合物的P450sca‑2mut、通过还原伴侣工程、酶工程以及全细胞催化条件优化，使sca‑2mutR88A/S96A催化柚皮素合成圣草酚的效率达到77％；催化二氢山奈酚合成二氢槲皮素的效率达到66％；催化芹菜素合成木犀草素的效率达到32％；催化大豆苷元合成7,3',4'‑三羟基异黄酮的效率达到75％，为提高羟基化化合物的生物合成提供了新的策略。
利用大肠杆菌 p450 细胞催化合成羟基黄酮化合物方法应用

[发明专利]一种合成高活性血红素类蛋白毕赤酵母底盘菌株的构建及应用-CN202310773671.0在审
发明人：赵鑫锐;余飞;周景文;堵国成;陈坚;李江华;钱源;鲁伟 -专利权人：江南大学;泰兴市东圣生物科技有限公司
申请日： 2023-06-28 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明提供了一种合成高活性血红素类蛋白毕赤酵母底盘菌株的构建及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过增强珠蛋白基因转录以及优化血红素辅基供应，提高了血红素类蛋白的合成能力。使构建的毕赤酵母菌株在摇瓶水平，猪肌红蛋白(P‑Mb)、大豆血红蛋白(S‑Hb)、透明颤菌血红蛋白(V‑Hb)与P450‑BM3mut的滴度分别达到了246.95、286.53、66.30与57.27mg/L，并使生产的血红素类蛋白P‑Mb、S‑Hb、V‑Hb和P450‑BM3mut的功能活性分别提高了38.10％、29.31％、85.24％和7.47倍。
一种合成活性血红素蛋白酵母底盘菌株构建应用

[发明专利]一种合成香兰素的重组大肠杆菌及其应用-CN202310859784.2在审
发明人： 周景文;乌仁嘎;曾伟主;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-07-13 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种合成香兰素的重组大肠杆菌及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中敲除编码莽草酸脱氢酶的基因aroE和3个编码醛酮还原酶AKRs的基因dkgA、dkgB和yeaE，3个编码乙醇脱氢酶ADHs的基因yqhD、yahK和yjgB，并异源表达脱氢莽草酸脱水酶DSD、甲氧基转移酶LiOMT和羧酸还原酶NiCAR，获得能够合成香兰素的重组大肠杆菌K2。所述重组大肠杆菌能够通过基于廉价小分子葡萄糖作为前体合成香兰素，在化妆品、纺织品、食品领域具有重要作用。
一种合成香兰素重组大肠杆菌及其应用

[发明专利]一种合成赤霉素4的重组酿酒酵母菌株及其应用-CN202310606614.3在审
发明人： 周景文;李珊;陈坚;曾伟主;高倩 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-05-26 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种合成赤霉素4的重组酿酒酵母菌株及其应用，属于基因工程与生物工程技术领域。本发明将关键基因KS整合于基因组位点表达，并将来源于藤仓赤霉菌的双功能二磷酸合成酶GfKS，来源于拟南芥的贝壳杉烷氧化酶AtKO、贝壳杉烯酸氧化酶AtKAO、GA碳3氧化酶AtC3ox和GA碳20氧化酶AtC20ox用于赤霉素4合成途径的构建，获得了能够生产赤霉素4的重组酿酒酵母。本发明还通过启动子的筛选及引入电子传递系统，并通过融合AtKO和AtKAO进一步提高了重组酿酒酵母的赤霉素4产量，使发酵120h的产量达165.4mg/L，为工业化生产赤霉素4奠定了基础。
一种合成赤霉素重组酿酒酵母菌株及其应用

[发明专利]一种高效且经济的猪肌肉干细胞的分离方法及其应用-CN202210041651.X有效
发明人：关欣;堵国成;李妹;陈坚;周景文 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-01-14 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N9/94 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效且经济的猪肌肉干细胞的分离方法及其应用，属于生物技术领域。本发明通过组合不同消化肌肉组织的酶，确定不同组合酶释放单细胞的能力，选取最高效经济的酶组合消化方式(链霉蛋白酶与分散酶组合)，最后通过差速纯化方法得到了大量的肌肉干细胞。本发明进一步公开了如何高效消化猪肌肉组织的方法，可以在降低成本的同时或许最多的肌肉干细胞。应用本酶组合消化分离方法，可以稳定获得总单细胞数为4.6‑6×106个细胞/g，猪肌肉干细胞数为8‑15×105个细胞/g(以CD29，CD56双阳性比例)。分离得到的肌肉干细胞有较强的分化能力，为细胞培养肉种子细胞的研究与实际生产提供了高效经济的分离方法。
一种高效经济肌肉干细胞分离方法及其应用

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