[发明专利]核酸组合物、肠道致病菌的检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明涉及一种核酸组合物、肠道致病菌的检测试剂盒及其使用方法。该核酸组合物包括检测引物对，所述检测引物对包括如下引物对中的至少两种：沙门氏菌引物对、序金黄色葡萄球菌引物对、艰难梭菌引物对、志贺氏菌引物对、肺炎克雷伯菌引物对和序铜绿假单胞菌引物对。上述核酸组合物能够一次性同时检测至少两种肠道致病菌，引物对的特异性好，引物对之间的干扰低、且检测灵敏度能够达到100copies/μL。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种核酸组合物、肠道致病菌的检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

肠道菌群的平衡与人类健康有着密切的关系，肠道致病菌则严重威胁着人类的健康，同时肠道致病菌引起的传染病是危害公共卫生安全的主要因素。常见的肠道致病菌有沙门氏菌(Salmonella)、志贺氏菌(Shigella)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)及大肠埃希氏菌(Escherichia coli)等。

沙门氏菌是一种常见的人畜共患病原菌，可导致伤寒、肠胃炎、食物中毒和败血症等，在食品中毒事件中，由沙门氏菌导致的病例数名列前茅。志贺氏菌作为主要的食源性致病菌之一，可引起急性肠炎，严重时可导致休克、脑水肿和呼吸衰竭。金黄色葡萄球菌普遍存在于环境和食品中，具有季节性分布，春夏季易发感染，能引起金黄色葡萄球菌肠炎等一系列疾病。金黄色葡萄球菌可产生大量毒素，并可对机体产生耐药性。即使在低浓度下，金黄色葡萄球菌也可危及人与动物的生命健康，比如会引起急性肺炎、败血症、中毒性休克等。肺炎克雷伯菌是肠杆菌科，该菌主要引起人和多种动物的肺炎、呼吸道感染、肠炎、腹泻，甚至败血症。铜绿假单胞菌在生命有机体的皮肤、呼吸道、肠道等广泛分布，感染后可引发皮肤病、肺炎、肠道疾病、脑膜炎和败血症等。在日常食品检测中，铜绿假单胞菌虽然不作为食品微生物检验的常规指标项目，但铜绿假单胞菌已被确认为食源性和水源性致病菌。艰难梭菌是一种分离培养比较困难的肠道条件致病菌，长期使用抗生素会导致肠道菌群失调，使耐药型艰难梭菌大量繁殖而引起相关性腹泻和肠炎。

目前，肠道致病菌感染性疾病流行面广，季节性发病率高，具有一定的传染性。因此，建立早期快速检测方法对肠道致病菌感染的预防和控制具有十分重要的意义。

肠道致病菌的检测方法分为培养法和分子生物学检测法。培养法需要将细菌培养一天或几天，时间较长。分子生物学检测方法，包括核酸杂交方法、基因芯片技术以及聚合酶链式反应技术等。然而传统的检测方法往往是针对一种致病菌进行特异检测，多种致病菌的混合物的检测过程繁琐，往往是针对不同病原体分别检测、耗时长；而将多种致病菌的多种引物混合后同时检测多种致病菌时，多种致病菌的多种引物之间又容易产生干扰，特异性差，灵敏度也不高。

发明内容

基于此，有必要提供一种检测简便、特异性好和灵敏度高的检测肠道致病菌的核酸组合物。

此外，还提供一种检测简便、特异性好和灵敏度高的检测多种肠道致病菌的试剂盒及一种简捷的检测多种肠道致病菌的试剂盒的使用方法。

一种核酸组合物，包括检测引物对，所述检测引物对包括如下引物对中的至少两种：

序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的沙门氏菌引物对、序列如SEQ ID No.4及SEQ ID No.5所示的金黄色葡萄球菌引物对、序列如SEQ ID No.7及SEQ ID No.8所示的艰难梭菌引物对、序列如SEQ ID No.10及SEQ ID No.11所示的志贺氏菌引物对、序列如SEQID No.13及SEQ ID No.14所示的肺炎克雷伯菌引物对、和序列如SEQ ID No.16及SEQ IDNo.17所示的铜绿假单胞菌引物对。