[发明专利]一种适用于水产病害核酸检测试纸条的样品前处理工艺在审
| 申请号： | 201910299645.2 | 申请日： | 2019-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN110029148A | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 张力支;王磊;王宏新;石雪燕;吴桂芬;李玉洁;肖雨晴;马新冉;吴红艳 | 申请（专利权）人： | 鲁东大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6834;C12Q1/689;C12Q1/04;C12R1/63 |
| 代理公司： | 烟台双联专利事务所(普通合伙) 37225 | 代理人： | 牟晓丹 |
| 地址： | 264000 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种适用于水产病害核酸检测试纸条的样品前处理工艺，属于生物技术领域。包括以下步骤：（1）针对不同样品采取不同方法进行细胞破碎，释放核酸，得到含有核酸的处理液；（2）通过核酸吸附柱吸附步骤（1）所释放的核酸，使核酸附着并富集于核酸吸附柱的核酸吸附膜上；（3）去除核酸吸附膜上的杂质；（4）洗脱核酸吸附膜上的核酸，得到核酸洗脱液；（5）将核酸洗脱液滴加于核酸试纸条上进行检测。本发明能最大化的简化核酸提取和纯化步骤，使核酸试纸条的检测效果进一步提高，且能提高检测限和检测成功率。 | ||
| 搜索关键词： | 核酸吸附 核酸 核酸试纸条 样品前处理 检测 核酸检测 核酸洗脱 水产病害 试纸条 生物技术领域 核酸提取 细胞破碎 释放 处理液 柱吸附 最大化 富集 附着 洗脱 液滴 去除 成功率 | ||
【主权项】：
1.一种适用于水产病害核酸检测试纸条的样品前处理工艺，其特征在于包括以下步骤：（1）对样品进行细胞破碎，释放核酸，得到含有核酸的处理液；（2）通过核酸吸附柱吸附步骤（1）所释放的核酸，使核酸附着并富集于核酸吸附柱的核酸吸附膜上；（3）去除核酸吸附膜上的杂质；（4）洗脱核酸吸附膜上的核酸，得到核酸洗脱液；（5）将核酸洗脱液滴加于核酸试纸条上进行检测。
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- 示例方法包括通过使第一溶液流过在流动池上的扩增位点使第一溶液在流动池上反应以及随后使不同的第二溶液流过扩增位点使第二溶液在流动池上反应。第一溶液包含靶核酸和第一试剂混合物，该第一试剂混合物包含核苷三磷酸和复制酶。第一溶液中的靶核酸以一个转运速率转运至扩增位点并且与扩增位点结合。第一试剂混合物扩增与扩增位点结合的靶核酸，以产生源自对应的靶核酸的扩增子的克隆群体。扩增子以超过转运速率的扩增速率产生。第二溶液包含第二试剂混合物，并且缺乏靶核酸。第二溶液用于增加扩增位点处的扩增子的数目。
- 基于杂交、延伸连接反应的核酸捕获文库制备方法-201910318823.1
- 马晓玲;刘冬梅 - 上海三誉华夏基因科技有限公司
- 2019-04-19 - 2019-09-17 - C12Q1/6806
- 本发明公开了基于杂交、延伸连接反应的核酸捕获文库制备方法，属于核酸检测技术领域。本发明通过设计捕获探针引物，然后与基因组DNA进行杂交反应，得到目的DNA片段后进行延伸、连接反应，后对目的DNA片段进行PCR扩增，纯化后即可进行文库测序。本发明的靶向区域捕获建库方法比较灵活，特异性高，捕获效率高，操作简单，耗时较短，并且能够尽量减少因PCR扩增效率差异造成的捕获区域均一性很差的现象。
- 一种液态产品中外源DNA内标物的保护方法及其应用-201611043650.X
- 安然;梁兴国;王鹏飞 - 青岛千卓分子生物科技有限公司
- 2016-11-24 - 2019-09-10 - C12Q1/6806
- 本发明涉及一种液态产品中外源DNA内标物的保护方法，具体如下：将聚阳离子化合物溶液与目的DNA溶液按照氨基磷酸比≥10:1的比例混合，混匀后2‑20℃放置0.5‑12小时，得到稳定的DNA复合物溶液，可直接添加至液态产品中；所述的氨基磷酸比为聚阳离子所携带的氨基摩尔数与DNA携带的磷酸基团摩尔数的比值。该方法中聚阳离子化合物可以提高外源DNA对核酸酶、酸和自由基等条件的耐受性，使其可作为溯源和防伪的内标物在液态产品或商品中长期稳定存在。
- 一种新的基因组甲基化文库的构建方法和应用-201810162430.1
- 戴珩;柴燕群;章扬;黄炳顶;史耀舟;张伟 - 上海鲸舟基因科技有限公司
- 2018-02-27 - 2019-09-03 - C12Q1/6806
- 本发明提供了一种甲基化测序文库的构建方法。具体地，本发明通过重亚硫酸盐处理构建文库，可同时检测经CT转化的原始链和未经CT转化的互补链序列，直接找出甲基化位点；本发明构建的文库保留了一半未经CT转化的碱基，可大大提高文库碱基平衡性，大幅提高测序质量。
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