[发明专利]一种提高米曲霉发酵淀粉合成L-苹果酸的方法有效
| 申请号： | 201710036762.0 | 申请日： | 2017-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN106591158B | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;陈坚;刘晶晶;向玉;堵国成;李江华;房峻 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/15 | 分类号： | C12N1/15;C12P7/42;C12P7/46;C12R1/69 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 曲霉 发酵 淀粉 合成 苹果酸 方法 | ||
1.一种基因工程菌，其特征在于，以米曲霉A.oryzae PN5为宿主，共表达编码淀粉酶的基因amyB和编码葡萄糖苷酶的基因agdA。
2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因amyB是NCBI Gene ID为5996200的基因，所述基因agdA是NCBI Gene ID为5992274的基因。
3.根据权利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，以pBg32为表达载体，以淀粉诱导型强启动子PamyB表达基因amyB，以PagdA表达基因agdA。
4.根据权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，以过表达了葡萄糖淀粉酶基因glaA的米曲霉为宿主。
5.构建权利要求2所述基因工程菌的方法，其特征在于，将Gene ID为5996200的基因amyB、Gene ID为5992274的基因agdA与载体连接，转化至米曲霉细胞中。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述载体为pBg32。
7.一种以淀粉为底物生产L-苹果酸的方法，所述方法是将权利要求1所述基因工程菌接种至发酵培养基中，30～34℃，200～250rpm发酵48～96h。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，先将32～34℃恒温培养3-7天的孢子接至种子培养基中，使得孢子终浓度≥1.5×106个/mL，30～34℃，200～250rpm培养12～16h，再按体积5～10％的接种量转接至发酵培养基中，30～34℃，200rpm培养48～96h。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基每L含有：可溶性淀粉100g，胰蛋白胨12g，K2HPO4 0.15g，KH2PO4 0.15g，MgSO4.7H20 0.1g，CaCl2.H20 0.1g，CaCO390g，0.005g NaCl，0.005g FeSO4.7H20。
10.权利要求1-2,4任一所述基因工程菌在发酵领域制备L-苹果酸方面的应用。
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