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[发明专利]一种以Pro-BDNF的形式制备人脑源性神经营养因子的方法-CN201410387234.6在审
发明人：张文宇;阮卡;章永垒;陈星;黄奋飞;白羊;陈胜亮 -专利权人：厦门北大之路生物工程有限公司
申请日： 2014-08-08 - 公布日： 2014-12-10 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：人工合成pro-hBDNF序列后克隆入载体得到含有pro-hBDNF的重组载体；再转化到大肠杆菌中，得到工程菌；包涵体表达；包涵体的复性：包涵体裂解、洗涤、溶解、复性；的分离纯化；质量比pro-rhBDNF：胰蛋白酶=250:1的胰蛋白酶酶切去除pro-rhBDNF前导肽获得rhBDNF成熟肽；rhBDNF成熟肽的纯化；最后获得纯度超过95%的重组人脑源性神经营养因子。利用胰蛋白酶酶切pro-rhBDNF，在该比例下可以完全消化pro-rhBDNF的导肽，而不会消化rhBDNF成熟肽。同时该方法制备简单易行，便于实施。
一种 pro bdnf 形式制备人脑神经营养因子方法

[发明专利]一株产人胃乙醇脱氢酶的工程菌及其酶的制备方法-CN201610980083.4有效
发明人：陆健;孙军勇;常开霞;蔡国林;李晓敏;吴殿辉 -专利权人：江南大学(如皋)食品生物技术研究所
申请日： 2016-11-08 - 公布日： 2020-02-14 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：E.coli BL21(DE3)经异丙基硫化‑β‑D‑半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白，目的蛋白以包涵体形式存在。收集并破碎菌体后离心，取沉淀获得包涵体，用低浓度尿素溶液或其缓冲液溶解包涵体获得有活性的δδ‑ADH粗酶液。经HisTrap
一株产人胃乙醇脱氢酶工程及其制备方法

[发明专利]重组人PAI-1蛋白包涵体复性的复性缓冲液以及方法-CN202310958007.3在审
发明人：贾江花;赵金华;邹继华;杨克群;周海涛;毛美波;朱跃骅;何进军 -专利权人：美康生物科技股份有限公司
申请日： 2023-08-01 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C07K14/81 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组人PAI‑1蛋白包涵体复性的复性缓冲液以及方法，复性缓冲液包括：10～50mM乙酸钠，100～500mM NaCl，1～10mM Triton X‑100，1～10％甘油，0.5～1.5M本发明解决了现有重组人PAI‑1蛋白分子复性产率低，导致生产成本高的技术问题，实现了提升PAI‑1蛋白包涵体的复性产率，节约生产成本的技术效果。
重组 pai 蛋白包涵复性缓冲液以及方法

[发明专利]一种提高重组蛋白包涵体形成的方法-CN201510106291.7有效
发明人：李云亮;马海乐;何华纲;任晓峰 -专利权人：江苏大学
申请日： 2015-03-11 - 公布日： 2018-06-26 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进重组蛋白在基因表达时形成包涵体的方法。此方法特征在于，在不提高诱导物浓度的前提下，低强度短时间的超声处理加速诱导物渗透至细胞内，使重组蛋白高表达时更容易形成包涵体。不仅可以通过降低诱导物的使用量来降低对宿主细胞的毒害作用，还适用于在较低的诱导温度下才能表达重组蛋白的工程菌。此方法操作简便，成本低。
重组蛋白包涵体诱导物表达重组蛋白超声处理基因表达宿主细胞高表达工程菌诱导毒害细胞

[发明专利]重组新型冠状病毒亚单位疫苗的制备方法-CN202011216187.0有效
发明人：毕胜利;侯云德;毛江森;高福;武桂珍;秦川;许文波;毛子安;苏秋东;伊瑶;高孟;陈刚;庄昉成;吕杭军;陆绍红 -专利权人：浙江普康生物技术股份有限公司;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;杭州医学院;中国医学科学院医学实验动物研究所
申请日： 2020-11-04 - 公布日： 2021-04-02 - 主分类号： A61K39/215 文献下载
摘要：该方法包括将插入有RBD‑TT重组蛋白所对应的核酸片段的质粒转染到大肠杆菌；培养所述大肠杆菌，使其表达所述RBD‑TT融合蛋白，破碎菌体并分离所述RBD‑TT重组蛋白的包涵体粗提物；将所述包涵体粗提物用含尿素的变性液溶解后，通过阴离子交换色谱层析进行纯化，得到RBD‑TT重组蛋白粗纯样品；将所述RBD‑TT重组蛋白粗纯样品用稀释液稀释；过滤、用复性液进行复性，得到复性蛋白；将所述重组蛋白复性蛋白通过阴离子交换色谱层析进行纯化
重组新型冠状病毒单位疫苗制备方法

[发明专利]一种ELP-Ⅲ型胶原蛋白的纯化方法及应用-CN202011286904.7在审
发明人：张杰 -专利权人：点斗基因科技（南京）有限公司
申请日： 2020-11-17 - 公布日： 2021-03-16 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种类弹性蛋白(Elastin‑like polypeptides，ELPs)和Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)的融合蛋白的纯化和复性的方法。本发明将类弹性蛋白标签ELP100与Ⅲ型胶原蛋白多肽基因连接到原核表达载体pRELPN上，构建成pRELPN‑CLP Ⅲ‑ELP100融合蛋白表达载体，该载体在BL21(DE3)大肠杆菌中高表达。由于该蛋白在大肠杆菌中以胞内包涵体的形式存在，所以我们采用包涵体纯化和复性的方法来对该融合蛋白进行纯化和复性，包括如下步骤：菌种的收集与破碎，洗除杂蛋白、脂质和核酸，蛋白精纯化，滴定稀释法复性，ITC纯化和
一种 elp 胶原蛋白纯化方法应用

[发明专利]一种显著促进膨胀蛋白TgS可溶表达的方法及其应用-CN202211622044.9在审
发明人：沈其荣;刘东阳;陈辰;孔志坚;裴荣华 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-12-16 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明公开一种显著促进膨胀蛋白TgS可溶表达的方法及其应用。本发明利用助溶标签蛋白，并通过改变和优化蛋白表达过程中的发酵条件，从而提高膨胀蛋白TgS的可溶表达。基于前期研究结果和当前可溶蛋白利用优化的需求，发现在大肠杆菌体系的蛋白表达过程中，TRX标签蛋白、低温(12℃)，通气量为0.5(V/V·min‑1)，添加0.02g·L‑1ZnSO4和0.1％丙三醇条件下可以实现膨胀蛋白TgS可溶表达。本发明从包涵体生成特性来组合优化蛋白发酵过程，实现了膨胀蛋白TgS异源表达时的可溶性高效表达，显著增加了其生物活性，同时降低了包涵体变复性成本。
一种显著促进膨胀蛋白 tgs 可溶表达方法及其应用

[发明专利]一种人干扰素-κ的生产方法-CN202011560300.7有效
发明人：彭继先;于海勤;刘翠英;吴桂苹;孟中英;黄明华;韩景花 -专利权人：山东睿鹰制药集团有限公司
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2022-07-12 - 主分类号： C12N15/20 文献下载
摘要：所述包括：构建大肠杆基因工程菌株、培养、收集菌体、离心破碎收集包涵体、包涵体变性、复性和纯化，其中大肠杆基因工程菌株含有密码子优化的IFN‑κ的核苷酸序列。本发明的方法实现了在全水相条件下的包涵体纯化和目标蛋白复性折叠，复性效果好，折叠正确率高，适合工业化生产。
一种干扰素生产方法

[发明专利]基于盲鳗粘液线蛋白EsTKα和EsTKγ的突变体蛋白的自组装功能性水凝胶-CN202310281459.2在审
发明人：曹辉;孙瑞爽;刘珞;郑若楠;朱文龙;孙宇轩 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2023-03-22 - 公布日： 2023-07-07 - 主分类号： C07K14/46 文献下载
摘要：本发明涉及基于盲鳗粘液线蛋白EsTKα和EsTKγ的突变体蛋白的自组装功能性水凝胶。本发明分别对EsTKα和EsTKγ蛋白的部分氨基酸进行了优化更改，使亲水性增强。对EsTKα‑TQQYT和EsTKγ‑QTQTT两种蛋白重组表达，将其包涵体采用两种包涵体洗涤液进行洗涤，加入变性剂溶解，并将所得到的两种蛋白液混合，进行自组装，分离得到组装蛋白凝胶。经直接自组装的蛋白组装溶液在超滤离心后实现相位分离，实现了两种蛋白的简单、快速、高效组装。组装后的蛋白凝胶具有良好的吸水性和保水性，并且具有一定的耐盐性，可用于作为保水剂与干燥剂的材料。
基于粘液蛋白 estk 突变体组装功能凝胶

[发明专利]一种可溶性家蝇MdproPO1重组蛋白的制备方法及其应用-CN201610806990.7有效
发明人：李殿香;于洋;栾园园;王蕾 -专利权人：济南大学
申请日： 2016-09-07 - 公布日： 2020-03-24 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明涉及家蝇MdproPO1重组蛋白的制备方法及其应用。>mdproPO1/pET‑30a/Rosetta；3）表达菌株的发酵培养与诱导表达；4）MdproPO1包涵体的变性与复性。该法用大肠杆菌表达系统生产出的家蝇酚氧化酶原（MdproPO1）表达量高，通过原核菌体回收、破碎，可以获得大量的MdproPO1包涵体，通过MdproPO1包涵体的变性与复性，可以获得可溶的有酶活性的MdproPO1重组蛋白。MdproPO1重组蛋白可以发展为灭蝇剂、氧化剂、黑化剂以及免疫剂，应用到卫生、保健、生物与化工等多个领域。
一种可溶性家蝇 mdpropo1 重组蛋白制备方法及其应用

[发明专利]一种具有广谱中和活性的新型冠状病毒重组蛋白及其制备方法-CN202111354553.3有效
发明人：高孟;沈钱通;庄昉成;毛子安;朱赟;陈刚;李思奇;安彤;张柯欣;张月;徐凯;陈彦霖;张温阳;侯云龙;包佳源;毛江森 -专利权人：浙江普康生物技术股份有限公司;杭州医学院
申请日： 2021-11-16 - 公布日： 2022-02-11 - 主分类号： C07K14/165 文献下载
摘要：本发明涉及一种具有广谱中和活性的新型冠状病毒重组蛋白及其制备方法，所述新型冠状病毒重组蛋白为CRM‑RBD重组蛋白，所述CRM‑RBD重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，编码所述CRM‑RBD重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，利用所述核苷酸序列通过以下步骤制备得到重组纳米蛋白颗粒：构建得到大肠杆菌重组表达菌；培养大肠杆菌重组表达菌得到发酵液；获得包涵体粗提物；变性溶解得到包涵体变性蛋白；纯化得到纯化重组蛋白；复性得到复性后蛋白；对复性后蛋白进行分离纯化，得到重组纳米蛋白颗粒。本发明的新型冠状病毒重组蛋白对新冠病毒原型株、贝塔变异株、德尔塔变异株均具有中和保护效果。
一种具有广谱中和活性新型冠状病毒重组蛋白及其制备方法

[发明专利]提高光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体蛋白复性方法-CN201910696088.8有效
发明人：毛新芳;贾洋洋;张蕊;刘阳;刘忠渊 -专利权人：四川轻化工大学;刘忠渊
申请日： 2019-07-30 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C07K14/81 文献下载
摘要：本发明旨在提供一种光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂融合蛋白TrxA‑ApSerpin‑FA72包涵体蛋白复性及活性的方法。本发明采用在变性液中添加尿素，并使用盐酸胍稀释复性的方法对光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂融合蛋白TrxA‑ApSerpin‑FA72包涵体蛋白进行活化，在整个蛋白复性过程控制蛋白浓度在1‑10μg/mL，获得的重组蛋白TrxA‑ApSerpin‑FA72在pH=7~9，60℃对丝氨酸蛋白酶的抑制活性高达95%以上，能够有效获得具有活性的重组蛋白TrxA‑ApSerpin‑FA72，为后续进一步研究光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能奠定基础。
提高光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵蛋白复性方法

[发明专利]大肠杆菌S-甲酰谷胱甘肽水解酶的原核表达载体及其构建方法和应用-CN201010172010.5无效
发明人：陈丽梅;张婧;罗义勇 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2010-05-14 - 公布日： 2011-07-27 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达大肠杆菌S-甲酰谷胱甘肽水解酶蛋白的原核表达载体pET32a-FGH。该载体是含有大肠杆菌S-甲酰谷胱甘肽水解酶基因(FGH)的原核表达载体。本发明从大肠杆菌中克隆出FGH基因，用T7启动子控制它在大肠杆菌中的表达，表达的重组蛋白质60％以上形成包涵体，从包涵体中很容易纯化高纯度的重组蛋白质，可作为抗原用于FGH抗体的制备。
大肠杆菌谷胱甘肽水解表达载体及其构建方法应用

[发明专利]短芽孢杆菌甲醛脱氢酶基因的原核表达载体和应用-CN201110306492.3无效
发明人：年洪娟;陈丽梅;孟庆超;程琴 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2011-10-11 - 公布日： 2012-02-08 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达短芽孢杆菌甲醛脱氢酶蛋白的原核表达载体pET32a-faldh，该载体是含有短芽孢杆菌(BreviBacillusbrevis)甲醛脱氢酶基因(faldh)的原核表达载体，本发明从短芽孢杆菌中扩增出faldh基因，亚克隆与原核表达载体pET32a中获得其原核表达载体pET32a-faldh，用T7启动子控制它在大肠杆菌中的表达，表达的重组蛋白质80%以上形成包涵体，从包涵体中很容易纯化高纯度的重组蛋白质
芽孢杆菌甲醛脱氢酶基因表达载体应用

[发明专利]一种分离、纯化重组蛋白的方法-CN201610281661.5在审
发明人：朱建伟;路慧丽;李宁环;陈欢欢;江华;谢跃庆;史斯玮;张蕾;丁凯 -专利权人：上海交通大学;美国杰科实验室有限公司;杰科（天津）生物医药有限公司
申请日： 2016-04-29 - 公布日： 2016-08-24 - 主分类号： C07K1/30 文献下载
摘要：本发明涉及一种分离、纯化重组蛋白的方法。该方法包括：在大肠杆菌系统表达目的蛋白的包涵体，用PEG沉淀法对变性包涵体进行纯化后，再进行变性、复性过程，并进一步采用色谱纯化技术，最终获得高纯度、高活性的重组蛋白产品。该方法提供了一种快速、低成本、高质量的重组蛋白的分离纯化方法。本发明提供的方法可用于表达、纯化生物大分子目的蛋白，具体包括细胞因子、酶、抗菌肽、抗体或抗体片段，尤其包括人IL‑15。
一种分离纯化重组蛋白方法