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[发明专利]一种可用于包装大量外源蛋白的重组质粒及构建方法和应用-CN201510777660.5有效
发明人：类承凤;孙修炼;赵丽娟;马瑞鹏;杨士礼 -专利权人：中国科学院武汉病毒研究所
申请日： 2015-11-13 - 公布日： 2021-04-20 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种可用于包装大量外源蛋白的重组质粒及构建方法和应用，基于杆状病毒多角体蛋白的单体结构和多聚体结构的形成机制，将多角体蛋白截断为N端150 aa和C端95 aa，并将C端与绿色荧光蛋白融合，至于两个不同启动子下表达，构建重组型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV），该病毒可以正确形成包涵体，而且包涵体能够在荧光显微镜下发出绿色荧光。此外，将多角体蛋白的C端95 aa与杆状病毒增效蛋白Enhancin或者GP37融合，可以检测到这两个蛋白在AcMNPV包涵体的大量表达，并且其杀虫活性均有显著提高。
一种用于包装大量蛋白重组质粒构建方法应用

[发明专利]一种重组人骨形态发生蛋白‑2的纯化生产方法-CN201310432794.4有效
发明人：张东刚;李东升 -专利权人：烟台正海生物科技股份有限公司
申请日： 2013-09-22 - 公布日： 2017-09-15 - 主分类号： C07K14/51 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人骨形态发生蛋白‑2的纯化生产方法。该方法包括如下步骤1）裂解含有rhBMP‑2蛋白的包涵体，得到包涵体裂解液；2）对所述包涵体裂解液依次进行亲和层析和阳离子交换层析，分离纯化得到变性重组人骨形态发生蛋白‑2溶液；3）对所述变性rhBMP‑2蛋白进行复性，得到复性rhBMP‑2蛋白粗品；4）对所述复性rhBMP‑2蛋白粗品依次进行亲和层析和凝胶过滤层析分离纯化，得到复性rhBMP‑2蛋白纯品。利用本发明所提供的方法纯化rhBMP‑2蛋白，制备的产品纯度达95%以上，蛋白收率为9.4%，内毒素和DNA残留均符合生物药物质量要求，本发明方法适于工业规模化生产；同时也为同类重组蛋白药物的研发生产提供参考
一种重组形态发生蛋白纯化生产方法

[发明专利]蛋白质生产-CN00811459.5有效
发明人： G·斯坦普弗;J·温迪什;F·诺塞德 -专利权人：生物化学有限公司
申请日： 2000-08-07 - 公布日： 2002-09-11 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明涉及用于在细菌宿主细胞中重组生产具有明确均一N端的预期异源多肽的方法,包括首先在宿主细胞中以胞质包涵体的形式形成包含具有瘟病毒自我蛋白酶Npro自我蛋白酶解活性的肽与所述异源多肽的融合蛋白,然后分离并处理包涵体,从而通过Npro自我蛋白酶解活性切割融合蛋白获得预期异源多肽。
蛋白质生产

[发明专利]一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备方法及通过该方法获得的病毒样颗粒-CN201710439243.9有效
发明人：李中圣;王凤求;伍建敏;赵玉林;侯月娥;王贵平 -专利权人：广东海大畜牧兽医研究院有限公司
申请日： 2017-06-06 - 公布日： 2020-06-30 - 主分类号： C12N7/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备方法，包括猪圆环病毒2型Cap重组蛋白包涵体的制备步骤：将编码Cap蛋白的PCV2‑ORF2基因全长DNA或已去掉编码Cap蛋白N’端信号肽碱基序列的PCV2‑ORF2 DNA片段插入原核表达载体中，转化大肠杆菌表达菌，诱导表达Cap重组蛋白；和Cap重组蛋白包涵体变性步骤；和溶液置换及蛋白复性步骤：采用恒体积透析法对变性蛋白溶液进行溶液置换与蛋白复性；和病毒样颗粒组装和回收步骤：使用中空纤维膜或膜包，以PBS对回收溶液进行超滤，浓缩；制备方法中蛋白复性效率高，可将包涵体持续、大量地制备得到病毒样颗粒，适合工业化生产。
种猪圆环病毒颗粒制备方法通过获得

[发明专利]用于生产重组兴趣蛋白的方法-CN201380066196.8有效
发明人： M·赖特迈尔;R·施耐德;B·奥尔 -专利权人：桑多斯股份公司;勃林格殷格翰RCV有限两合公司
申请日： 2013-12-19 - 公布日： 2020-02-18 - 主分类号： C12N9/50 文献下载
摘要：公开了用于生产重组兴趣蛋白的方法，所述方法特征在于如下步骤：(a)提供包涵体中的包含Npro自我蛋白酶部分和兴趣蛋白部分的融合蛋白，(b)溶解所述包涵体，(c)允许所述Npro自我蛋白酶部分在离液序列高的条件下切割所述融合蛋白，其中所述重组兴趣蛋白从所述融合蛋白中切割下来，以及其中所述重组兴趣蛋白尚未复性或同时复性，以及(d)回收所述兴趣蛋白，任选地包括兴趣蛋白的复性步骤。
用于生产重组兴趣蛋白方法

[发明专利]免疫球蛋白组合物和生产其的方法-CN200980115304.X无效
发明人： I·本哈尔;R·哈金 -专利权人：特拉维夫大学拉莫特有限公司
申请日： 2009-02-25 - 公布日： 2011-04-13 - 主分类号： C07K16/28 文献下载
摘要：在细菌培养物中生产免疫球蛋白的方法，该方法包含：(a)在第一种细菌宿主细胞中表达包含免疫球蛋白轻链的第一种多肽，从而形成包含免疫球蛋白轻链的包涵体；(b)在第二种细菌宿主细胞中表达包含免疫球蛋白重链的第二种多肽，从而形成包含免疫球蛋白重链的包涵体；(c)从包涵体回收第一种多肽和第二种多肽，从而得到重建的重链和重建的轻链；和(d)在允许重建的轻链和重建的重链主要重新折叠为完整免疫球蛋白的条件下，重新折叠重建的重链和重建的轻链
免疫球蛋白组合生产方法

[发明专利]用于重组鸡α干扰素包涵体的复性液及其制备方法与应用-CN201210127204.2无效
发明人：高应瑞 -专利权人：天津生机集团股份有限公司
申请日： 2012-04-27 - 公布日： 2012-08-15 - 主分类号： C07K14/56 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于重组鸡α干扰素包涵体的复性液及其制备方法，所述复性液主要由精氨酸、EDTA、氧化型谷胱甘肽、Tris和甘油组成，其中各组分浓度分别为：0.2～0.8M精氨酸、0.5～2mM EDTA0.3～0.9mM氧化型谷胱甘肽、60～100mM Tris、甘油含量15～30％(v/v)，复性液pH为8.0～8.5，该复性液通过溶解在蒸馏水中并用HCl调节pH的方法制得，所述复性液在重组鸡α干扰素包涵体方面具有应用前景；所述复性液通过对各组分的合理配比，使包涵体蛋白通过三步洗涤纯化及点滴加样一次复性的工艺方法，将菌体蛋白与包涵体很好的分离，使蛋白质的复性率大大提高。
用于重组干扰素包涵复性及其制备方法应用

[实用新型]一种包涵体复性集约装置-CN202022196233.7有效
发明人：朱希灿 -专利权人：北京中源合聚生物科技有限公司
申请日： 2020-09-29 - 公布日： 2021-04-20 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种包涵体复性集约装置，复性液泵设置与变性液泵相连接后进入滤筒中的滤芯中，澄清颗粒物的同时，稀释后的蛋白暂存在滤筒中延长了复性时间，澄清后的复性蛋白通过滤出泵控制滤出速度进入超滤循环泵浓缩与超滤储液混合后通过进入中空纤维超滤柱后进入超滤存储袋本实用新型可放大适合稀释1000L中试和生产规模的包涵体复性集约装置，按比例可控稀释复性包涵体，澄清浓缩复性正确有活性目标蛋白，同时去除复性失败包涵体颗粒、宿主DNA和菌体碎片颗粒。
一种包涵复性集约装置

[发明专利]一种包涵体复性集约装置-CN202011051652.X在审
发明人：朱希灿 -专利权人：北京中源合聚生物科技有限公司
申请日： 2020-09-29 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种包涵体复性集约装置，复性液泵设置与变性液泵相连接后进入滤筒中的滤芯中，将过滤后的复性液滤除复性液中的杂质，包括菌体碎片宿主DNA以及复性不完全不溶包涵体颗粒性杂质，同时复性液在滤筒中进一步正确折叠复性，澄清颗粒物的同时，稀释后的蛋白暂存在滤筒中延长了复性时间，澄清后的复性蛋白通过滤出泵控制滤出速度进入超滤循环泵浓缩与超滤储液混合后通过进入中空纤维超滤柱后进入超滤存储袋，中空纤维超滤柱还设置与超滤透出泵相连接本发明可放大适合稀释1000L中试和生产规模的包涵体复性集约装置，按比例可控稀释复性包涵体，澄清浓缩复性正确有活性目标蛋白，同时去除复性失败包涵体颗粒、宿主DNA和菌体碎片颗粒。
一种包涵复性集约装置

[发明专利]一种磁珠法纯化复性包涵体蛋白的方法-CN202211057812.0在审
发明人：俞志豪;景成宇 -专利权人：可孚医疗科技股份有限公司
申请日： 2022-08-30 - 公布日： 2022-10-14 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明提供了一种磁珠法纯化复性包涵体蛋白的方法，具体包括：对样品蛋白的预处理：将包涵体蛋白置于变性液中变性溶解，离心，取上清液，获得处理好的样品蛋白；GSH偶联磁珠纯化复性样品蛋白：将GSH偶联磁珠置于离心管中，用第一缓冲液进行清洗；将清洗后的GSH偶联磁珠与样品蛋白混合，加入还原稀释液，磁吸附，弃去上清液；用还原稀释液清洗GSH偶联磁珠，磁吸附，弃去上清液；加入第二缓冲液，磁吸附，取出上清液，获得纯化复性后的样品蛋白本发明的优点在于，采用本发明提供的磁珠法纯化复性包涵体蛋白的方法，能够提高纯化复性的效率，避免常规复性方法的复性时间较长、溶液消耗量大的问题。
一种磁珠法纯化复性包涵蛋白方法

[发明专利]LRR受体激酶-PXY的纯化方法-CN201810525064.1有效
发明人：张建国;国鹏;王兆山 -专利权人：中国林业科学研究院林业研究所
申请日： 2018-05-28 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C12N9/12 文献下载
摘要：本发明提供一种LRR受体激酶‑PXY的纯化方法，包括：S1：获得表达PXY的重组菌，诱导表达PXY；S2：破碎经诱导表达PXY后的重组菌，分离得到含有包涵体的第一沉淀物；S3：用包涵体洗涤液重悬所述第一沉淀物并离心，得到第一含有PXY的包涵体；S4：将所述第一含有PXY的包涵体用第一包涵体溶解液进行孵育，分离得到第二含有PXY的包涵体；和S5：将所述第二含有PXY的包涵体用第二包涵体溶解液进行孵育，分离得到PXY膜蛋白。
lrr 受体激酶 pxy 纯化方法

[发明专利]在大肠杆菌中制备猪丹毒杆菌表面保护性抗原变体的方法-CN200580013595.3有效
发明人：牛岛稔大;坂口正士;德永英治 -专利权人：财团法人化学及血清疗法研究所
申请日： 2005-02-08 - 公布日： 2007-09-05 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：提供了一种防止猪丹毒杆菌感染的猪丹毒杆菌表面保护性抗原SpaA蛋白或其中SpaA蛋白被除去一部分后得到的缩短型SpaA蛋白(ΔSpaA)的变体及其制备方法。在SpaA蛋白或SpaA蛋白的氨基酸序列的特定位点上引入氨基酸取代得到具有免疫原性，以包涵体形式在大肠杆菌中表达的SpaA蛋白或SpaA蛋白变体。由于本发明SpaA蛋白或SpaA蛋白变体以包涵体形式在大肠杆菌中表达，可容易地回收和纯化。
大肠杆菌制备丹毒杆菌表面保护性抗原变体方法

[发明专利]一种重组人转化生长因子TGFB3的制备方法-CN201310182505.X无效
发明人：董佳里;张宝华 -专利权人：天津博发生物技术有限公司;成都博发生物技术有限公司
申请日： 2013-05-17 - 公布日： 2014-11-26 - 主分类号： C07K14/495 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人转化生长因子TGFB3的制备方法，其特征在于，包含包涵体的收集和洗涤；包涵体的溶解；变性蛋白的纯化；单体蛋白的复性；复性蛋白的纯化五个步骤，该五步法解决的现有技术中纯化复性TGFB3收率低的缺陷，提高了蛋白的活性，同时有效的降低了成本，有利于工业化大生产。
一种重组转化生长因子 tgfb3 制备方法

[发明专利]抗肿瘤药物TAT(m)－Survivin(T34A)的纯化复性方法-CN200710046422.2无效
发明人：魏东芝;马兴元;张海毅;李明华;郑文云;赵莉;刘清海 -专利权人：华东理工大学
申请日： 2007-09-26 - 公布日： 2008-03-12 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组抗肿瘤蛋白新药TAT(m)－Survivin(T34A)的纯化复性方法，所述方法包括以下步骤：包涵体制备与洗涤，包涵体变性，蛋白复性，蛋白纯化，其特征在于，蛋白复性采用阴离子交换层析复性，蛋白纯化采用亲和层析纯化。
肿瘤药物 tat survivin t34a 纯化复性方法

[发明专利]一种WSSV囊膜蛋白原核表达包涵体的变复性方法-CN201210468427.5有效
发明人：李鹏;严洁;马晓燕;周开亚 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2012-11-19 - 公布日： 2013-02-13 - 主分类号： C07K14/01 文献下载
摘要：本发明涉及一种WSSV囊膜蛋白原核表达包涵体的变复性方法。其内容包括：1）向WSSV囊膜蛋白原核表达包涵体中加入8M尿素的10mMTris-HCl，pH8.0，剧烈搅动，25℃下用磁力搅拌器不断搅拌3-4小时，使沉淀缓慢溶解；2）4℃，12000rpm离心12min，弃沉淀；3）在所得上清液中加入pH8.0的磷酸盐缓冲液，以pH8.0的磷酸盐缓冲液透析20-22小时，然后用PEG-20000浓缩得可溶性蛋白。利用本发明，WSSV囊膜蛋白原核表达包涵体的复性效率均达到了95%以上，获得了可溶性蛋白。
一种 wssv 膜蛋白表达包涵复性方法