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[发明专利]编码猪α干扰素的DNA分子及其重组蛋白的表达纯化方法-CN201410785607.5在审
发明人：史忠玉;王贵华;张国庆;于萍萍;刘培培;赵亚荣 -专利权人：北京大北农科技集团股份有限公司动物医学研究中心;福州大北农生物技术有限公司;北京大北农动物保健科技有限责任公司;北京大北农科技集团股份有限公司
申请日： 2014-12-17 - 公布日： 2016-07-13 - 主分类号： C12N15/21 文献下载
摘要：本发明涉及生物制药领域，主要涉及一种编码猪α干扰素的DNA分子和重组大肠杆菌及重组猪α干扰素蛋白的表达纯化。本发明以重组大肠杆菌BL21/pET-21a-rPoIFNα作为生产菌种，其表达蛋白的编码序列经过大肠杆菌偏好密码子优化，适合在大肠杆菌中表达。采用本发明中的表达纯化方法，可在细菌破碎沉淀中获得大量包涵体形式的目的蛋白，经过包涵体变性、复性、亲和层析、透析置换缓冲液等步骤，可获得纯度很高的大量重组猪α干扰素，该重组猪α干扰素具有很高的生物学活性
编码干扰素 dna 分子及其重组蛋白表达纯化方法

[发明专利]细胞因子白介素21的纯化方法及其应用-CN202310483288.1在审
发明人：崔志辉;童路;王琨;谭新勇;冷兆武 -专利权人：南京优爱生物科技研发有限公司
申请日： 2023-04-28 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C07K14/54 文献下载
摘要：该纯化方法是以获得的白介素21包涵体为基础，通过清洗、变性、阳离子柱粗纯、复性和阳离子柱精纯的方法获得白介素21，在该纯化方法中，复性前先通过阳离子柱粗纯提高了目的蛋白白介素21的纯度，从而提高了复性效率，使得目的蛋白收率进一步提高，在复性后仅需一步阳离子柱精纯便可将目的蛋白的纯度提高至98％以上。该层析工艺用于通过包涵体复性纯化的方式制备白介素21，可以大大提高白介素21的纯度，且提高白介素21的产量。
细胞因子白介素 21 纯化方法及其应用

[发明专利]一种提高昆虫病毒增殖效率的方法-CN02139104.1无效
发明人：孟小林;徐进平;王健;鲁伟 -专利权人：武汉大学
申请日： 2002-09-26 - 公布日： 2003-03-12 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明主要是利用昆虫病毒增效蛋白与昆虫病毒包涵体经爆破获得的病毒粒子混合感染大龄昆虫幼虫，使其体内高效高水平增殖病毒；利用昆虫病毒增效蛋白和病毒粒子复配，提高昆虫病毒杀虫活性、提高生防效率；利用体外昆虫病毒包涵体爆破，制备病毒粒子，用于提高昆虫病毒杀虫剂及其含有昆虫病毒的复合杀虫剂针对转昆虫病毒增效蛋白基因的植物杀虫活性、提高生防效率。
一种提高昆虫病毒增殖效率方法

[发明专利]通过融合蛋白的自我蛋白剪切制备重组蛋白-CN200680014330.X有效
发明人： F·韦特;C·阿赫谬勒;P·威时纳;B·奥尔;S·珀德米尔塞格 -专利权人：桑多斯股份公司;奥地利勃林格殷格翰有限公司
申请日： 2006-04-25 - 公布日： 2008-06-11 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明涉及一种通过重组制备所需的异源多肽的方法，该方法包括下列步骤(i)培养细菌宿主细胞，该宿主细胞通过表达载体得以转化，该表达载体包含一个为融合多肽编码的核酸分子，该融合多肽包含一个瘟病毒N^pro自我蛋白酶的衍生物，该衍生物与天然的瘟病毒N^pro自我蛋白酶相比，至少有一个半胱氨酸被置换为其他的氨基酸残基，第二个多肽与第一个多肽的C端通过下列方式相连，使得通过第一个多肽的自我蛋白水解活性可将第二个多肽从融合多肽中剪切出来，该第二个多肽为异源多肽，其特征在于，其培养是在可以表达融合多肽及形成相关的细胞质包涵体的环境中进行的，(ii)包涵体从宿主细胞中分离出来，(iii)溶解分离出来的包涵体，(iv)所需的异源多肽从融合多肽上通过自我蛋白水解剪切下来
通过融合蛋白自我剪切制备重组

[发明专利]HNF6多肽片段及其表达与纯化方法-CN202210496293.1在审
发明人：郁建锋;顾志良;许静雯;徐璐;俞丽莎 -专利权人：常熟理工学院
申请日： 2022-05-09 - 公布日： 2022-09-09 - 主分类号： C07K14/465 文献下载
摘要：其次，将该重组表达载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达，采用6mol/L尿素变性包涵体溶解重组蛋白，通过融合在HNF6重组蛋白C端的6‑His多肽，以Ni2+对重组蛋白进行亲和层析纯化，结合快速复性法对目的蛋白进行复性。结果显示通过Ni2+亲和层析和目的蛋白原位复性相结合的一步纯化法，成功地从包涵体中获得了高纯度的重组蛋白HNF6，这为研究鸡HNF6抗体的制备等方面提供了物质保障
hnf6 多肽片段及其表达纯化方法

[发明专利]恶臭假单胞菌谷胱甘肽-非依赖型甲醛脱氢酶的原核表达载体及其构建方法和应用-CN201010172232.7无效
发明人：陈丽梅;张婧;孟庆超;年洪娟;李昆志 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2010-05-14 - 公布日： 2010-10-20 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达恶臭假单胞菌谷胱甘肽-非依赖型甲醛脱氢酶蛋白的原核表达载体pET28a-PADH。该载体是含有恶臭假单胞菌谷胱甘肽-非依赖型甲醛脱氢酶基因(PADH)的原核表达载体。本发明从恶臭假单胞菌中克隆出PADH基因，用T7启动子控制它在大肠杆菌中的表达，表达的重组蛋白质40％以可溶性形式存在于上清中(占大肠杆菌可溶性总蛋白30％)，60％存在于包涵体中，通过割胶纯化从上包涵体中很容易获得高纯度的PADH重组蛋白质，可作为抗原用于PADH特异性抗体的制备。用亲和层析很容易从大肠杆菌可溶性总蛋白中纯化出有活性的重组PADH蛋白质，用于PADH酶制剂的生产及其生化特性分析。
恶臭假单胞菌谷胱甘肽依赖甲醛脱氢酶表达载体及其构建方法应用

[发明专利]含有包涵体的具有改善的质地和延长的保质期的蛋白质肉类似物-CN201580056819.2有效
发明人： A.雷德尔;A.费诺伊尔;F.沃格尔 -专利权人：特雷奥斯淀粉及甜味剂比利时公司
申请日： 2015-09-07 - 公布日： 2021-09-28 - 主分类号： A23J3/18 文献下载
摘要：本发明涉及保质期延长的蛋白质肉类似物，其中所述蛋白质肉类似物在基质中包含至少一种包涵体，该蛋白质肉类似物包含植物蛋白和增塑剂，在植物蛋白中至少有小麦面筋，所述蛋白质肉类似物具有的水含量少于20％(w/w本发明还涉及获得保质期延长的蛋白质肉类似物的方法，包括以下步骤：(i)混合植物蛋白和增塑剂以得到面团，其中植物蛋白中至少有活性小麦面筋；(ii)通过至少将所述面团切割为面团块、且将所述面团块与至少一种包涵体团聚以获得团聚体，而使所述面团成形；和(iii)加热所述团聚体，其中所述保质期延长的蛋白质肉类似物具有的水含量少于20％(w/w)。本发明还涉及包含所述保质期延长的蛋白质肉类似物的食品和获得所述食品的方法。
含有包涵具有改善质地延长保质期蛋白质肉类

[发明专利]一种重组肠激酶的制备方法-CN201210585576.X无效
发明人：文良柱;梅丽;朱亮 -专利权人：江苏万邦生化医药股份有限公司;上海复星医药(集团)股份有限公司
申请日： 2012-12-31 - 公布日： 2014-07-02 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了包含肠激酶基因的表达载体和工程菌，还提供了肠激酶的制备方法，包括培养工程菌、收获工程菌菌体、破碎得包涵体、洗涤和溶解包涵体、复性、酶原活化及纯化肠激酶的步骤。本发明的方法是重组肠激酶制备工艺成熟、质量稳定、纯度高、成本低，适合药用蛋白生产。
一种重组肠激酶制备方法

[发明专利]高尔基体蛋白GP73的纯化方法-CN200910024426.X有效
发明人：吕棠山;符芳芳;于秀菊 -专利权人：江苏默乐生物科技有限公司
申请日： 2009-02-24 - 公布日： 2010-08-25 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：具有良好应用前景的新肝癌标记物高尔基体蛋白GP73的纯化方法。采用离子交换层析，疏水层析，收集单峰，具有成本低廉、工艺简便易行、蛋白收率高等优点。其制备方法包括：将表达的蛋白包涵体洗涤，再变性溶解，分别利用离子交换层析和疏水层析进行纯化，收集洗脱单峰，即得高尔基体蛋白。
高尔基蛋白 gp73 纯化方法

[发明专利]一种重组蛋白的制备方法-CN202010228743.X在审
发明人：周闯;张忠民 -专利权人：苏州佑宁康生物技术有限公司
申请日： 2020-03-27 - 公布日： 2020-07-14 - 主分类号： C12P21/00 文献下载
摘要：本发明适用于生物技术领域，提供了一种重组蛋白的制备方法，其包括以下步骤：将重组蛋白的表达工程菌株进行活化培养，得到活化菌落；将所述活化菌落依次进行一级培养和二级培养，得到二级种子；将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；将所述发酵液进行离心处理，收集菌体；将所述菌体进行冻存后，再置于裂解液中进行裂解，然后经离心处理，得到以包涵体形式存在的重组蛋白；所述裂解液包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、聚乙二醇辛基苯基醚该制备方法能够使菌体在自然条件下自行破碎，其不仅可以使得到的包涵体的蛋白完全不受外力的破坏，而且还可以使菌体的破碎率达到95%。
一种重组蛋白制备方法

[发明专利]以pGEX6P1作为载体制备肿瘤相关抗原NY-ESO-1的方法及应用-CN202310900565.4在审
发明人：虞淦军;吴艳峰;丁凯;何晓波;张亚楠 -专利权人：中国人民解放军海军军医大学;上海长征医院
申请日： 2023-07-21 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：将NY‑ESO‑1基因与带GST标签蛋白的pGEX6P1载体重组后转染感受态细胞，依次经种子获取及扩大培养、IPTG诱导后破菌收集上清、纯化后得到毫克级别的GST/NY‑ESO‑1融合蛋白。本发明选择pGEX6P1载体作为承载载体，并在后续表达纯化过程对各项工艺过程及条件进行优化，使得目标蛋白在可溶性上清中出现，避免了现有包涵体制备方式中需要对包涵体进行复性的步骤，简化了分离纯化流程及操作难度得率方面，5L菌液经过本发明方法进行表达、纯化后，获得的GST/NY‑ESO‑1蛋白约为20mg，相较于现有微克级别的得率有大幅提升。
pgex6p1 作为载体制备肿瘤相关抗原 ny eso 方法应用

[发明专利]一种提高鹅产蛋性能的方法-CN201910608639.0有效
发明人：安晨;徐琪;陈国宏;曹正锋;张扬;张钰 -专利权人：扬州大学
申请日： 2019-07-08 - 公布日： 2021-08-31 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：插入原核表达载体PET‑30a(+)载体NdeI/HindIII酶切位点中；(2)将上述载体转化重组产物，构建重组表达质粒；(3)将上述重组表达质粒转化到大肠杆菌中培养，诱导，收集菌体，采用超声波破碎后，离心得含有蛋白的包涵体；(4)从上述包涵体中分离纯化蛋白，得重组融合蛋白；(5)将纯化的重组融合蛋白制成疫苗，免疫产蛋鹅。
一种提高鹅产蛋性能方法

[发明专利]重组极端耐热α-淀粉酶的复性与纯化方法-CN200810039429.6有效
发明人：张毅;王丽萨;陆坚峰;杨胜利 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2008-06-24 - 公布日： 2009-12-30 - 主分类号： C12N9/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种嗜热α-淀粉酶的制备方法，包括：用去垢剂溶液溶解嗜热α-淀粉酶的包涵体，从而获得含嗜热α-淀粉酶的溶液；和从所获得的溶液中分离出所述的嗜热α-淀粉酶。本发明的方法获得的嗜热α-淀粉酶具有天然蛋白一致的酶活性及耐热性。本发明的方法具有简便、高效、低成本及易于放大的特点，特别适用于重组嗜热α-淀粉酶的较大规模制备。同时该方法亦适用于其它以不溶性包涵体形式表达的嗜热蛋白质的复性纯化。
重组极端耐热淀粉酶复性纯化方法

[发明专利]高活性可溶重组人内皮抑素注射剂的制备方法-CN200610039240.8无效
发明人：徐根兴;荣志刚;朱浩文;赵延发;钟慎政 -专利权人：江苏省基因药物工程技术研究中心
申请日： 2006-03-31 - 公布日： 2007-10-03 - 主分类号： A61K38/22 文献下载
摘要：其主要特征是，通过50至500立升发酵罐发酵表达，改进大肠杆菌包涵体二次提取工艺技术，使包涵体蛋白复性后纯度达82％以上，并且在小于0.01mol/L的尿素中保持高度的可溶性，再将该内皮抑素包涵体进行复性、超滤浓缩，并用阴离子交换树脂和阳离子交换树脂进行分离纯化，从而获得纯度为96％以上的重组人内皮抑素蛋白。
活性可溶重组内皮注射制备方法

[发明专利]一株产L-氨基酸氧化酶的重组菌株的构建方法及其应用-CN201310309931.5在审
发明人：刘立明;牛盼清;董晓翔 -专利权人：江南大学
申请日： 2013-10-12 - 公布日： 2014-02-05 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明阐述了一株产L-氨基酸氧化酶的重组菌株的构建方法及其应用，属于基因工程与酶学品领域，将重组产生的L-氨基酸氧化酶包涵体进行蛋白变性、复性和浓缩，使蛋白包涵体恢复活性;蛋白表达量最佳诱导条件为37℃
一株产氨基酸氧化酶重组菌株构建方法及其应用