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[发明专利]一种重组猪圆环病毒衣壳蛋白包涵体的分离纯化方法-CN201410324737.9有效
发明人：吕暾;王立波;乔春晓;王伟东;庄星来;洪晶;林拱阳;陈晟生 -专利权人：福州大学;福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2014-07-09 - 公布日： 2014-10-22 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组猪圆环病毒衣壳蛋白包涵体的分离纯化方法。本发明在诱导产生包涵体后，通过优化的裂解方法破碎菌体，初步去除了一部分杂质，接着通过对包涵体进行一系列处理，使得包涵体形成可溶性目标蛋白，避免了使用尿素、盐酸胍等变性剂对包涵体的变性溶解和复性。而镍柱亲和层析使得可以纯化获得的蛋白量比较大，具有纯度高，操作简单等优点。本发明从不溶性包涵体中分离纯化出来可溶性的目的蛋白，避免了反复变性复性的繁琐步骤以及复性过程中的蛋白沉淀的危险，并且所获得的蛋白纯度可以达到电泳纯。
一种重组圆环病毒蛋白包涵分离纯化方法

[发明专利]一种纯化蛛丝蛋白包涵体的方法-CN202111084292.8在审
发明人：汪志明;李翔宇;陆姝欢;舒敏;徐柳柳 -专利权人：嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司
申请日： 2021-09-14 - 公布日： 2021-12-31 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种纯化蛛丝蛋白包涵体的方法。所述方法，包括：步骤(1)，将湿菌体破壁后，分离得到含有蛛丝蛋白包涵体的沉淀I；步骤(2)，将所述沉淀I与含有尿素的缓冲液混合，并分离得到含有蛛丝蛋白包涵体的沉淀II；其中，所述含有尿素的缓冲液中，尿素的体积摩尔浓度为本发明直接采用离心的方法纯化蛛丝蛋白包涵体，操作简单，简化了蛋白纯化和复性步骤，可得到较纯的蛛丝蛋白包涵体；同时，节约了时间，降低了成本，可应用于工业生产。
一种纯化蛛丝蛋白包涵方法

[发明专利]一种烟草蚀纹病毒蛋白酶活性包涵体及其制备方法与应用-CN201610300134.4在审
发明人：孙怀昌;李光亚;卢会鹏;肖真真;李洋洋;周晓慧;谭笑;张鑫宇;夏晓莉 -专利权人：扬州大学
申请日： 2016-05-09 - 公布日： 2016-08-24 - 主分类号： C12N9/50 文献下载
摘要：本发明属于生物技术研究领域，具体涉及一种烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEVP)活性包涵体及其制备方法和在重组蛋白制备中的应用。所述TEVP活性包涵体由两个PT连接头分隔的ELK16自聚肽和烟草蚀纹病毒蛋白酶组成。其制备方法包括表达载体构建、活性包涵体表达与纯化、重组蛋白切割和目的蛋白回收。与现有的TEVP相比，本发明的TEVP活性包涵体具有制备简单、容易从终产物中去除和价格低廉等优点，可以用于各种重组蛋白的制备。
一种烟草病毒蛋白酶活性包涵及其制备方法应用

[发明专利]一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法-CN201310218483.8无效
发明人：王朋;赵林萍;鲁龙;李慧英;任宝红;王军;苗银萍;王真;孙帅领;张如民;曾小宇 -专利权人：郑州中道生物技术有限公司
申请日： 2013-06-04 - 公布日： 2013-09-04 - 主分类号： C07K14/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法，将表达包涵体蛋白的菌株离心收集，洗涤后，用BufferA进行重悬，接着用超声波或液压破碎仪破碎至清亮，经过适当离心后获得包涵体蛋白，用适当浓度的SKL溶解后，再用氧化型谷胱甘肽和还原性谷胱甘肽溶液进行处理，最终纯化复性的蛋白。本发明方法操作简单，提高了包涵体复性效率，简化了复性步骤，节约了时间并减少了操作人员的工作量，所得蛋白质纯度较高并且具有生物学活性。
一种大肠杆菌表达包涵蛋白纯化复性方法

[发明专利]大肠杆菌重组外膜蛋白A包涵体蛋白的复性纯化方法-CN202010854423.5有效
发明人：崔玉东;肖雪 -专利权人：黑龙江八一农垦大学
申请日： 2020-08-24 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C07K14/245 文献下载
摘要：本发明涉及一种大肠杆菌重组外膜蛋白A包涵体蛋白的复性纯化方法，该方法包括以下步骤：(1)诱导表达的rOmpA包涵体蛋白沉淀的收集；(2)rOmpA包涵体蛋白用8M尿素溶液变性；(3)用含15mMβ‑环糊精Tris‑HCl缓冲液进行5倍稀释复性；(4)复性的rOmpA亲和层析纯化；(5)纯化的rOmpA置透析袋中，于pH7.6的PBS缓冲液中4℃透析12h以上，离心后收集上清，即获得纯化的复性rOmpA蛋白本发明对表达的rOmpA包涵体蛋白进行复性和纯化，可获得纯度高达95％的可溶性rOmpA蛋白；本发明使用的复性方法简便快捷，有效解决了大肠杆菌rOmpA包涵体蛋白的复性纯化问题，为大规模生产利用rOmpA
大肠杆菌重组膜蛋白包涵蛋白复性纯化方法

[发明专利]疏水性包涵体抗原蛋白的复性方法-CN202210414590.7在审
发明人：何家敏;武云波;林育佳;孟莎;游梅香;刘晓婷;陈禄凤 -专利权人：深圳重链生物科技有限公司
申请日： 2022-04-15 - 公布日： 2022-08-30 - 主分类号： C07K1/34 文献下载
摘要：本发明公开了包涵体抗原蛋白的透析复性方法，尤其是疏水性包涵体抗原蛋白的透析复性方法，具体地，本发明公开了在包涵体的透析复性过程中引入了高温透析步骤，进而得到纯度高、单位活性高、稳定性显著增加、溶解度好的目标蛋白
疏水包涵抗原蛋白复性方法

[发明专利]一种基于包涵体形式表达的釉原蛋白的制备方法及产品和应用-CN202310198956.6在审
发明人：汤杰;薛永永;蔡晓红;张启清;曾飒 -专利权人：广州栋方生物科技股份有限公司
申请日： 2023-03-03 - 公布日： 2023-06-09 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明提供一种基于包涵体形式表达的釉原蛋白制备方法及产品和应用，所述制备方法包括如下步骤：(1)使含有釉原蛋白基因的重组质粒在外源表达系统中进行表达，获得以包涵体形式存在的重组釉原蛋白；(2)使用含浓度梯度尿素的溶解液依次梯度溶解步骤(1)中所述包涵体，离心，得上清液和沉淀；(3)混合步骤(2)中所述上清液与复性剂，过滤，滤液脱盐制得所述基于包涵体形式表达的釉原蛋白。本发明创造性地应用含梯度浓度尿素的溶解液分离纯化釉原蛋白，加入不同浓度梯度的尿素梯度溶解包涵体，制得的目标蛋白纯度高、活性强。此外，该制备工艺操作简单，适宜工业放大。
一种基于包涵体形表达蛋白制备方法产品应用

[发明专利]一种适用于大规模生产的结核分枝杆菌rTPA38蛋白包涵体初纯的方法-CN201310693256.0有效
发明人：何秀云;崔玉华;李申建;贺运泉 -专利权人：广东瀚森生物药业有限公司
申请日： 2013-12-16 - 公布日： 2014-03-26 - 主分类号： C07K14/35 文献下载
摘要：本发明属于生物工程领域，涉及结核分枝杆菌rTPA38蛋白包涵体初纯的方法。具体的技术方案是通过菌体的获得、破碎，四次洗涤的步骤得到了初纯的包涵体。本方法适合工业化大生产，批量大，一次性可处理100g至5000g rTPA38菌体，破碎效果高，破碎率可达99.9%以上，收率高，包涵体收率达90%以上，包涵体中rTPA38蛋白纯度高，rTPA38包涵体目的蛋白纯度(电泳)达到50%以上，并给后续纯化工作降低了难度，且不影响rTPA38蛋白的活性。
一种适用于大规模生产结核分枝杆菌 rtpa38 蛋白包涵体初纯方法

[发明专利]一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的方法及试剂-CN201410363398.5有效
发明人：邹潮 -专利权人：哈德逊(天津)生物技术有限责任公司
申请日： 2014-07-28 - 公布日： 2018-08-03 - 主分类号： C07K14/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的方法及试剂，包括洗涤液、菌体裂解液、包涵体溶解液、蛋白复性液‑I和蛋白复性液‑II。使用本发明诉述的包涵体溶解液可以显著提高从包涵体中获得可溶性白介素重组蛋白的得率，从而解决用大肠杆菌表达体系生产白介素所存在的问题。与现有技术相比，本发明不含有任何蛋白变性剂，这样有利于后续的蛋白复性；操作简单，可提升可溶性白介素蛋白得率达90％以上，相对常规使用蛋白变性剂法只能获得5‑20％具有明显优势，具有推广应用的价值。
一种包涵制备可溶性白介素重组蛋白方法试剂

[发明专利]一种利用蛋白质酶切位点形成包涵体并制备小肽的方法-CN201711426661.0在审
发明人：刘宝全;郑维;王剑锋;李春斌;权春善;范圣第 -专利权人：大连民族大学
申请日： 2017-12-26 - 公布日： 2018-06-15 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用蛋白质酶切位点形成包涵体并制备小肽的方法，利用基因工程技术将识别序列为芳香族氨基酸的蛋白酶酶切位点分别置于目标小肽的两端，通过提高最终表达蛋白质中的芳香族氨基酸含量促使蛋白质以包涵体形式表达；通过包涵体形式低成本获得目标蛋白质，将蛋白质变性处理后利用选定的蛋白酶进行切割，从酶切产物中分离纯化获得目标功能小肽。将蛋白质酶切技术与包涵体技术整合，降低功能小肽的生产成本，为功能小肽的产业开发提供可行之路。 1
包涵体小肽蛋白质酶芳香族氨基酸蛋白酶功能小肽位点制备蛋白质基因工程技术蛋白质变性目标蛋白质产业开发分离纯化技术整合酶切产物酶切位点目标功能形式表达低成本生产成本切割

[发明专利]包涵体蛋白复性并同时纯化的方法-CN01141501.0有效
发明人：苏志国;李明 -专利权人：中国科学院过程工程研究所
申请日： 2001-09-27 - 公布日： 2003-04-16 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明涉及的包涵体蛋白复性并同时纯化的方法，为将溶解的包涵体蛋白在离子交换层析柱中进行变性剂浓度的梯度洗脱或pH值梯度洗脱或同时进行变性剂浓度梯度洗脱和pH值梯度洗脱；其具体步骤是1)用酸性/碱性流动相I或者其它溶液溶解的包涵体蛋白，进入到流动相I平衡的离子交换层析柱中，包涵体蛋白可逆地被吸附在层析介质上；2)然后用碱性/酸性流动相II梯度取代流动相I进行梯度长度为1－5柱体积，流动相II中的变性剂的浓度低于流动相I中的变性剂的浓度，其蛋白可获得高浓度下的高活性回收，同时此过程对不纯的包涵体蛋白有纯化作用。
包涵蛋白复性同时纯化方法

[发明专利]一步加热法溶解重组蛛丝蛋白包涵体的方法-CN201910603896.5有效
发明人：齐兴梅;熊思东;蔡慧 -专利权人：苏州大学
申请日： 2019-07-05 - 公布日： 2020-12-08 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明涉及一种一步加热法溶解重组蛛丝蛋白包涵体的方法，包括以下步骤：将重组蛛丝蛋白包涵体悬浮于含有尿素的缓冲液中，得到悬浮液，所述悬浮液中尿素的浓度为2‑4M，所述缓冲液的pH为5‑10，然后将所述悬浮液加热至40～100℃，使重组蛛丝蛋白包涵体蛋白溶解，离心后分离出上清液，即得到可溶重组蛛丝蛋白。本发明的方法操作简单，在低浓度变性剂的作用下，简化了蛋白纯化和复性步骤，只需一步操作即可从包涵体中得到可溶的纯净重组蛛丝蛋白，节约了时间，降低了成本。
一步加热溶解重组蛛丝蛋白包涵方法

[发明专利]一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法-CN201610153001.9有效
发明人：冷春生;李一奎;魏宏壮;常晓慧 -专利权人：通化东宝药业股份有限公司
申请日： 2016-03-17 - 公布日： 2017-08-25 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法，属于蛋白纯化领域，包括以下步骤1)破碎表达重组人胰岛素原融合蛋白的大肠杆菌菌体，收集包涵体；2)洗涤包涵体，然后使包涵体溶解、融合蛋白变性；3)蛋白复性步骤；本方法不需预先的蛋白纯化步骤，直接进行蛋白复性，最后收获高浓度的具有天然结构的重组胰岛素原融合蛋白，克服现有技术中，蛋白复性后蛋白浓度低，易发生蛋白聚集沉淀的缺陷，复性率提高至80％‑90％，提高生产效率
一种重组胰岛素融合蛋白复性方法

[发明专利]一种L‑天冬氨酸氧化酶包涵体纯化复性方法-CN201610864870.2在审
发明人：邹培建;王鹏举;张文宇;蒋溱;杨锦勋 -专利权人：苏州埃德蒙生物技术有限公司
申请日： 2016-09-30 - 公布日： 2017-05-10 - 主分类号： C12N9/06 文献下载
摘要：本发明提供了一种L‑天冬氨酸氧化酶包涵体纯化复性方法，包括如下步骤包涵体沉淀的收集,包涵体沉淀的充分洗涤，变性蛋白使用镍柱纯化,并通过将纯化的变性蛋白使用缓冲液D稀释至蛋白浓度低于1mg/ml，置于透析缓冲液中保持透析温度为最后将上清使用超滤管浓缩，再通过分子筛纯化分离单体蛋白和聚集蛋白，获得均一的天然活性蛋白。本发明解决了L‑天冬氨酸氧化酶复性的问题，使用方便快捷的方法进行L‑天冬氨酸氧化酶的包涵体纯化以及复性，通过包涵体的漂洗以及镍柱纯化获得纯度较高的变性蛋白，通过一步透析复性过程，逐渐去掉变性剂，蛋白折叠为有活性的蛋白分子
一种天冬氨酸氧化酶包涵纯化复性方法

[发明专利]一种重组聚氨酯塑料降解酶的制备方法及应用-CN202010104512.8有效
发明人：杨宇;茹家康;霍毅欣 -专利权人：北京理工大学
申请日： 2020-02-20 - 公布日： 2021-12-14 - 主分类号： C12N9/20 文献下载
摘要：所述重组聚氨酯塑料降解酶为重组PueA酶，所述制备方法包括：溶解包涵体：以含有SDS的Tris‑HCl缓冲液作为变性剂溶解所述重组PueA酶的包涵体得到包涵体蛋白溶解液；包涵体复性：向包涵体蛋白溶解液中加入KCl对所述包涵体蛋白溶解液进行复性，得到复性后的重组PueA酶。
一种重组聚氨酯塑料降解制备方法应用