本发明实施例提供一种重组蛋白、制备方法、试剂盒及用途，所述重组蛋白为AHSG重组蛋白；所述AHSG重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编码所述AHSG重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO制备方法包括：将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列连接重组载体，构建重组蛋白表达载体；将重组蛋白表达载体转化E.coli DH5α大肠杆菌感受态细胞培养，获得重组蛋白表达菌株，从重组蛋白表达菌株中提取质粒，转化DH10bac感受态细胞进行蓝白斑筛选；从白色单菌斑摇菌提取Bacmid杆粒，并将提取到的重组杆粒转进sf9昆虫细胞，进行大规模培养；收集细胞上清，纯化，得到重组蛋白。本发明实施例通过异源重组表达AHSG蛋白，能迅速并且特异性识别人血中抗AHSG抗体，实现定量检测。
本发明提供了一种增加植物细胞重组蛋白胞外分泌的方法。具体包括以下步骤：1)分别构建含有EXO基因的表达载体和含有编码重组蛋白的基因的表达载体，或者构建含有EXO基因和编码重组蛋白的基因的共表达载体；2)转化植物细胞以分泌表达重组蛋白；其中，所述EXO基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述编码重组蛋白的基因的核酸序列包括编码连接在重组蛋白的N端的分泌型信号肽的核酸序列。本发明首次发现EXO基因可实现定位于内质网和胞外的重组蛋白的运输，实现重组蛋白的胞外分泌；EXO基因和编码重组蛋白的基因同时转化植物细胞，起到协同作用，提高了重组蛋白的产量和分泌率。
本发明涉及无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白及其制备方法与应用，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述重组蛋白的编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示；所述重组蛋白的制备方法即将所述的重组蛋白的编码基因构建到表达载体上，获得重组表达载体；将重组表达载体转化宿主细胞，培养转化的宿主细胞，使转化的宿主细胞表达产生所述无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白，之后回收并纯化所表达的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白；所述重组蛋白在制备罗非鱼抗无乳链球菌感染的疫苗中的应用一种罗非鱼口服纳米疫苗是以所述的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白作为抗原；本发明的纳米疫苗对罗非鱼具有良好的免疫保护效果。
本发明提供一种用于表达猪塞内卡病毒重组蛋白的枯草芽孢杆菌及其在制备猪塞内卡病毒重组蛋白疫苗中的应用。所述的VP2蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3。本发明所构建的枯草芽孢杆菌表达系统安全无毒，能够高效分泌猪塞内卡病毒重组蛋白。本发明使用的猪塞内卡重组蛋白是通过转入pHT43‑His‑rVP2高效表达载体的枯草芽孢杆菌表达获得，所述pHT43‑His‑rVP2高效表达载体通过同源重组技术获得，不仅实现了猪塞内卡病毒重组蛋白的高水平表达，而且能够高效分泌到细胞外，极大地简化了重组蛋白的制备流程，有利于重组蛋白抗原的大规模生产。
