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[发明专利]一种利拉鲁肽中间体多肽的制备方法-CN201810119330.0有效
发明人：潘尚书;汤传根;李宬;刘晓锐;崔怀言;陈松;张昊宁 -专利权人：美药星（南京）制药有限公司
申请日： 2018-02-06 - 公布日： 2020-11-03 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：其主要步骤包括构建重组利拉鲁肽工程菌，通过大肠杆菌诱导以包涵体形式表达利拉鲁肽中间体融合蛋白，再经过变性、复性、酶切和分离纯化得到利拉鲁肽中间体多肽GLP‑1(7‑37)。此发明通过改变重组序列信号肽，表达方式变为胞内不溶性包涵体表达，表达量大大增加；洗涤后的包涵体采用碱溶，无需使用大量的变性剂，以蛋白浓度为20‑30g/L的高浓度加入包涵体溶解缓冲液，变复性时间不超过1h
一种利拉鲁肽中间体多肽制备方法

[发明专利]一种重组人干扰素-κ包涵体的纯化和复性方法-CN202011560333.1有效
发明人：彭继先;李振森;晁香君;吴桂苹;韩景花 -专利权人：山东睿鹰制药集团有限公司
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2022-09-09 - 主分类号： C07K14/555 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人干扰素‑κ包涵体的纯化和复性方法。所述方法包括：将人干扰素kappa(hIFN‑κ)的编码基因通过密码子优化转化大肠杆菌，构建基因工程菌，所构建的基因工程菌经诱导，以包涵体的方式高效表达重组人干扰素hIFN‑κ，经过纯化复性，获得高纯度的具有抗病毒活性的本发明的纯化及复性方法实现了88％以上的包涵体纯度和60％以上的hIFN‑κ蛋白收率，操作简单且适于大规模生产。
一种重组干扰素包涵纯化复性方法

[发明专利]一种重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法及重组猪胃蛋白酶-CN202310428278.8在审
发明人：赵江峰;李艳霞;孟苗;秦奇鹏;张江凡;杨小静 -专利权人：西安麦博泰克生物科技有限公司
申请日： 2023-04-20 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本公开的一种重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法及重组猪胃蛋白酶，其中，纯化制备方法包括：将具有载体的猪胃蛋白酶转化到大肠杆菌中表达，并将表达后的猪胃蛋白酶进行发酵离心处理，得到湿菌；收获的湿菌经大肠杆菌裂解澄清试剂盒裂解、离心，获得沉淀；洗涤沉淀，获得包涵体，包涵体变性后进一步复性，得到复性液；复性液进一步在4℃透析过液，并将透析过液后的复性液进行离子交换层析纯化，得到纯度≥90％的重组猪胃蛋白酶原；重组猪胃蛋白酶原进一步脱盐，获得纯度≥95％的重组猪胃蛋白酶。该工程菌株在大肠杆菌培养基中表达猪胃蛋白酶原，后期再经过培养基及培养条件优化可实现猪胃蛋白酶原的高效连续生产，具有良好的商业应用前景。
一种重组胃蛋白酶纯化制备方法

[发明专利]一种重组人白细胞介素-2发酵包涵体的提取方法-CN201410229018.9有效
发明人：程度胜;桑建斌;吕建龙;韩明娣;龙应国 -专利权人：北京四环生物制药有限公司
申请日： 2014-05-27 - 公布日： 2014-08-27 - 主分类号： C07K14/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人白细胞介素-2发酵包涵体的提取方法，包括以下步骤：(1)对大肠杆菌表达重组人白介素-2的工程菌株进行培养；(2)对发酵培养所得菌体进行破菌收集包涵体；(3)对包涵体进行提取和洗涤，得到精制包涵体，所述工程菌株为E.Coli K802(ply-4)，培养方法包括扩增培养和发酵罐培养，均采用含酵母和蛋白胨的无抗生素培养基，采用高压均质机破菌，经过变性，得到高纯度ril-2原液。
一种重组白细胞发酵包涵提取方法

[发明专利]一种可溶性人肿瘤坏死因子Ⅱ型受体蛋白的制备方法-CN202110209711.X在审
发明人：陆一鸣;李安;王硕存;王俊杰;王胜 -专利权人：上海市第十人民医院
申请日： 2021-02-24 - 公布日： 2021-06-08 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种可溶性人肿瘤坏死因子Ⅱ型受体蛋白的制备方法；其主要包括构建shTNFR2的重组表达载体、转化大肠杆菌获得重组菌实现原核表达、菌体裂解获得包涵体沉淀、包涵体沉淀的洗涤和蛋白变性处理、稀释复性处理以及纯化处理；其中，在构建重组表达载体步骤中，采用特定的引物扩增shTNFR2全长蛋白的基因片段，面对随之带来的纯化操作中的困难，发明人做了大量的优化，发现在蛋白变性处理后，依次加入DTT和氧化型谷胱甘肽至特定浓度，对变性蛋白先后进行还原和氧化处理；在此基础之上，稀释复性步骤中，采用特定pH值和盐浓度的复性缓冲液进行复性处理，最终获得的纯化后的shTNFR2蛋白具有高纯度和较强的生物学活性。
一种可溶性肿瘤坏死因子受体蛋白制备方法

[发明专利]一种rhIL-10重组载体构建及其蛋白提纯的方法-CN201510325665.4有效
发明人：杨芳芳;胡大海;石继红;王许杰;官浩;郑朝;王洪涛;高建新 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2015-06-15 - 公布日： 2019-01-01 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：一种hIL‑10重组载体，采用IMPACT系统表达，其融合蛋白标签为6个组氨酸(6×His)的重组载体，如重组载体的质粒图谱所示；重组载体的构建、表达及鉴定方法步骤包括：1)rh‑IL10基因的扩增；2)重组载体的构建、表达及其鉴定；rh‑IL10融合蛋白的纯化方法步骤为：1)融合蛋白his‑intein‑IL10‑RGD的粗提；2)包涵体洗涤；3)包涵体溶解；4)融合蛋白his‑intein‑IL10‑RGD的纯化；5)融合蛋白his‑intein‑IL10‑RGD的复性及自切割；6)IL10‑RGD纯化；增加了hIL‑10在体内的靶向性，赋予了蛋白具有抗肿瘤以及机体免疫功能的活性，更为重要的是其在伤口愈合过程中能够与新生血管内皮细胞特异靶向结合
一种 rhil 10 重组载体构建及其蛋白提纯方法

[发明专利]重组人胰岛素的制备方法-CN201810938962.X有效
发明人：龙乔明 -专利权人：苏州大学
申请日： 2018-08-17 - 公布日： 2020-07-28 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：HindIII酶位点之间，得到重组质粒；将重组质粒转入宿主菌中，在18‑37℃下在培养基中生长至OD600＝0.5‑0.7，诱导表达后，分离出Sumo‑胰岛素原融合蛋白包涵体；用含有尿素的缓冲液洗涤Sumo‑胰岛素原融合蛋白包涵体，离心后取沉淀，变性、梯度复性后，得到复性Sumo‑胰岛素原融合蛋白；利用Sumo蛋白酶、胰蛋白酶和羧肽酶B在pH＝6.0‑8.0条件下一步酶切复性Sumo‑胰岛素原融合蛋白，酶切温度为16‑37℃，酶切时间为3‑6小时，得到重组人胰岛素。
重组胰岛素制备方法

[发明专利]一种含未复性重组蛋白的生物制剂及其制备方法与应用-CN200810014363.5有效
发明人：厉保秋 -专利权人：山东大学
申请日： 2008-03-10 - 公布日： 2008-08-20 - 主分类号： A61K38/17 文献下载
摘要：本发明提供了一种含未复性重组蛋白的生物制剂及其制备方法与应用，制备方法为：先制备包涵体，然后将包涵体蛋白在变性条件下分离纯化，得到高纯度的、未复性的、不溶于水的重组蛋白，再与其它医学上可接受的辅液混匀，本发明具有以下优点：1.只对重组蛋白进行纯化，不进行体外复性，省略了繁琐的复性过程，成本低、产品收率高；2.将纯化处理后的未复性的重组蛋白直接制成生物制剂供静脉注射用，重组蛋白在体内会逐渐复性、逐步发挥药理作用
一种复性重组蛋白生物制剂及其制备方法应用

[发明专利]一种鸭坦布苏病毒抑制剂-CN202110878638.5有效
发明人：张琳;徐敏丽;吴家强;焦安琪;于江;张玉玉;陈智;任素芳;孙文博 -专利权人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2021-08-02 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： C07K14/18 文献下载
摘要：本发明属于兽医学领域，提供了一种鸭坦布苏病毒E D III蛋白的制备方法：（1）构建重组大肠杆菌，诱导表达获得E D III蛋白包涵体；（2）将包涵体复性、纯化后获得E D III蛋白的溶液；所述重组大肠杆菌的目的基因的序列包含本发明制备获得了高纯度的鸭坦布苏病毒E D III蛋白溶液进而获得了该蛋白的晶体及其结构，以该蛋白处理细胞后能够有效抑制病毒的入胞和感染，具有高效、广谱、长效的优点，为控制DTMUV传播与流行提供了基础
一种鸭坦布苏病毒抑制剂

[发明专利]博伊丁假丝酵母甲酸脱氢酶的原核表达载体及其构建方法和应用-CN201010172023.2无效
发明人：陈丽梅;张婧;李昆志 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2010-05-14 - 公布日： 2011-12-14 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达博伊丁假丝酵母甲酸脱氢酶蛋白的原核表达载体pET28a-FDH。该载体是含有博伊丁假丝酵母甲酸脱氢酶基因(FDH)的原核表达载体。本发明从博伊丁假丝酵母中克隆出FDH基因，用T7启动子控制它在大肠杆菌中的表达，表达的重组蛋白质40％以可溶性形式存在于上清中(占大肠杆菌可溶性总蛋白40％)，60％存在于包涵体中，通过割胶纯化从包涵体中很容易获得高纯度的重组蛋白质用亲和层析很容易从大肠杆菌可溶性总蛋白中纯化出有活性的重组FDH蛋白质，用于FDH酶制剂的生产及其生化特性分析。
博伊丁假丝酵母甲酸脱氢酶表达载体及其构建方法应用

[发明专利]人中期因子Midkine的制备及新用途-CN200710168287.9无效
发明人：韩伟;杜丽娟 -专利权人：再生医药有限公司
申请日： 2007-11-01 - 公布日： 2009-05-06 - 主分类号： A61K38/18 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，揭示了中期因子重组蛋白的纯化方法，并公开了中期因子的新用途，即用于制备增加血小板的组合物。本发明首先构建了中期因子基因的重组表达载体，将经验证无误的重组载体转入微生物表达菌株，进行诱导表达，其后将该微生物表达菌株超声波裂解得到包涵体蛋白，对包涵体蛋白进行变性复性后再经强阳离子交换层析，获得了中期因子重组蛋白通过本发明方法的原核表达和纯化系统可以得到纯度很高、内毒素含量低、具有良好的生物学活性的中期因子重组蛋白，且该重组蛋白得率高。
人中因子 midkine 制备用途

[发明专利]表达和纯化RANK胞外区域蛋白的方法-CN201410410449.5有效
发明人：唐佩福;刘长振;黄鹏;张世谦;高斌 -专利权人：中国人民解放军总医院;北京表源生物技术有限公司
申请日： 2009-03-26 - 公布日： 2017-10-10 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种表达和纯化RANK胞外区域蛋白的方法。该方法包括(1)构建具有编码RANK胞外区域的cDNA的载体，将该载体转化到原核细胞中，从而得到以包涵体形式表达的重组RANK；(2)对该包涵体进行超声处理，然后重新溶解在6M的盐酸胍中，得到解离状态的重组本发明提供的方法尤其适用于鼠RANK胞外区域蛋白的表达与纯化。
表达纯化 rank 区域蛋白方法

[发明专利]一种新的多肽——人包涵素相似蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸-CN00115525.3无效
发明人：毛裕民;谢毅 -专利权人：上海博德基因开发有限公司
申请日： 2000-04-29 - 公布日： 2001-11-14 - 主分类号： C07K14/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种新的多肽——人包涵素相似蛋白9,编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明还公开了编码这种新的人包涵素相似蛋白9的多核苷酸的用途。
一种多肽包涵相似蛋白编码这种多核苷酸

[实用新型]一种重组蛋白高效复性装置-CN202020509316.4有效
发明人：周闯;张忠民 -专利权人：苏州佑宁康生物技术有限公司
申请日： 2020-04-09 - 公布日： 2021-02-19 - 主分类号： C07K1/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种重组蛋白高效复性装置，包括复性罐，复性罐底部连接有排液管道，排液管道上设置有出液阀，所述复性罐内设置有搅拌装置，所述复性罐通过管道连接变性液瓶和GSSG瓶，且管道上分别安装有第一蠕动泵和第二蠕动泵；所述复性罐上还安装有蛋白紫外检测器，实现了包涵体的变复性过程的控制，重复性好，且包涵体的复性变得简单易操作，大大提高了生产效率。
一种重组蛋白高效复性装置

[发明专利]一种水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E胞外区蛋白的制备方法-CN202110222073.5有效
发明人：李春明;徐俊峰;双慧;李海燕;朱晓文;沈红杰 -专利权人：长春祈健生物制品有限公司
申请日： 2021-02-28 - 公布日： 2022-05-17 - 主分类号： C07K14/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种水痘‑带状疱疹病毒糖蛋白E胞外区蛋白的制备方法，包括以下步骤：S1，携带大肠杆菌偏爱密码子的水痘‑带状疱疹病毒糖蛋白E胞外区基因的重组质粒载体构建；S2，所述重组质粒载体转化感受态大肠杆菌获得的转化体；S3，用含有非离子表面活性剂和镁盐的培养基进行菌体培养；S4，菌体清洗和收集；S5，包涵体提取和溶解；S6，包涵体复性；S7，蛋白纯化。本发明的制备方法，操作简单、蛋白表达量高，所获取的目的蛋白具有免疫原性，可以激发有效细胞免疫和体液免疫，可以作为疫苗开发的候选抗原。本发明专利公开的蛋白制备方法可以应用于产业化大量获得目标蛋白，在疫苗和检测方法开发方面具有很大优势。
一种水痘带状疱疹病毒糖蛋白胞外区蛋白制备方法

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