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[发明专利]一种用于单细胞核测序的棉花根部单细胞核悬液制备的方法-CN202310352080.6在审
发明人：万素梅;李燕芳;李鹏涛;陈国栋;赵梓霖;谷昊南;刘乾坤;彭仁海;杨舒涵 -专利权人：塔里木大学;安阳工学院
申请日： 2023-04-04 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于单细胞核测序的棉花根部单细胞核悬液制备的方法，该方法包括将棉花种子置于蛭石沙土纸杯中萌发生长，生长至种子第一片真叶展开时，去除侧根，取下胚轴以下的主根部分获得根部组织；取根部组织置于冰上的培养皿中，加入一定量切割缓冲液，用刀片多次切割根部组织释放细胞核，获得粗细胞核悬液；收集培养皿中的粗细胞核悬液，通过尼龙膜过滤，加入荧光染料进行标记，分选后离心，丢弃上清，收集沉淀使用细胞核保存液进行重悬。通过本发明的方法能够获得高质量的棉花根部单细胞核悬液，完全满足单细胞核测序的上机要求，一定程度上解决了棉花真叶期根部细胞核释放的困难，对于棉花的遗传发育研究和育种进程的加快至关重要。
一种用于细胞核棉花根部制备方法

[发明专利]骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法-CN201210148116.0无效
发明人：张志仁;杨琴;杨晓风;姜曼;吴玉章 -专利权人：中国人民解放军第三军医大学
申请日： 2012-05-14 - 公布日： 2012-10-17 - 主分类号： C12N5/0786 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及细胞的培养方法，骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法，具体为将骨髓来源单细胞悬液在体外用含M-CSF的PRMI1640完全培养基培养，在加入培养基培养前，还包括骨髓来源单细胞悬液的预处理步骤，具体为：将所述骨髓来源单细胞悬液用滤孔为40～75μm的滤器过滤，取过滤液进行培养；本实施例中培养的巨噬细胞分化成熟所需的时间与原来相比缩短了1～2天；在细胞悬液的处理中，经过滤的细胞与未过滤的细胞相比，骨髓来源祖细胞的纯度提高；未过滤的骨髓来源祖细胞的纯度仅约为17％～20％，经过滤后，骨髓来源祖细胞的纯度提升到30％-40％。
骨髓来源巨噬细胞体外诱导培养方法

[发明专利]一种肿瘤细胞原代培养的方法-CN201410117528.7有效
发明人：宋雷 -专利权人：西北民族大学
申请日： 2014-03-26 - 公布日： 2014-06-18 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种肿瘤细胞原代培养的方法，涉及细胞生物学领域。本发明是将经过酶法或机械法把肿瘤样本制备成单细胞悬液，然后采用无血清悬浮培养法制得肿瘤细胞囊球，培养过程需添加碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、胰岛素和牛血清白蛋白，然后撤除生长因子，并在常规培养基中培养就可得到能连续传代的贴壁细胞了本发明培养周期短、并且提高了肿瘤原代培养的成功率。
一种肿瘤细胞培养方法

[发明专利]一种体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法-CN202011605023.7在审
发明人：邹琳清 -专利权人：南通大学
申请日： 2020-12-30 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C12N5/079 文献下载
摘要：本发明公开了一种体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其包括，获取孕鼠大脑皮质和海马组织；用DMEM/F12基础培养液制备所述海马组织的单细胞悬液；用神经干细胞培养液重悬，接种、培养形成细胞球；消化所述细胞球，终止后过滤得单细胞悬液，接种后传代培养，收集细胞球；消化收集到的所述细胞球，终止后用神经干细胞培养液重悬，接种，让悬浮的单细胞贴壁，继续用神经干细胞培养液培养；所述神经干细胞培养液由DMEM
一种体外纯化培养大鼠胚胎海马放射胶质细胞方法

[发明专利]一种肺动脉组织单细胞悬液的制备方法及应用-CN202010517771.3有效
发明人：缪冉;杨媛华;钟久昌;翟振国;董星琲;龚娟妮;李一丹;王剑锋;万钧;郭晓娟;王莹;杨苏乔;李积凤;邝土光 -专利权人：首都医科大学附属北京朝阳医院
申请日： 2020-06-09 - 公布日： 2020-12-29 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于单细胞测序的肺动脉组织单细胞悬液的制备方法，肺动脉内膜剥脱组织经分离、清洗、修块、孵育、酶解消化后可获得单细胞悬液。本发明的方法在保证细胞质量的同时，还可一次性获得大量分离的肺动脉内膜剥脱组织来源的细胞。所用试剂简单、操作方便，具有良好的实际应用价值。
一种肺动脉组织单细胞制备方法应用

[发明专利]一种培养专用于生物医药功能研究的人肺癌类器官3D模型的方法-CN202010907237.3有效
发明人：季俐俐;方译萱;薛群;张曙;李晶菁 -专利权人：南通大学
申请日： 2020-09-01 - 公布日： 2022-05-31 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：该方法包括以下步骤：1)获取肺癌肿瘤组织，消化肿瘤组织，分离形成单细胞悬液；2)细胞计数并将细胞悬液与基质胶重悬，接种于细胞培养板，转移至培养箱，凝固基质胶；3)加入肺癌类器官条件培养基完全没过基质胶进行培养至得到人肺癌类器官
一种培养专用生物医药功能研究肺癌器官模型方法

[发明专利]一种肺癌干细胞的制备方法及应用-CN201910034168.7有效
发明人：冷水龙;龚杰 -专利权人：广州医科大学
申请日： 2019-01-15 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12N5/095 文献下载
摘要：本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种肺癌干细胞的制备方法及应用。该肺癌干细胞的制备方法为：步骤1)：配制含羧甲基纤维素钠的无血清DMEM/F12培养基A；其中，培养基A中羧甲基纤维素钠和无血清DMEM/F12培养基的质量体积比为0.25％以下；步骤2)：用培养基A把肺癌细胞制成单细胞悬液A，再向单细胞悬液A中加入维持肺癌干细胞干性的物质,得到混合液，将混合液在3D细胞培养条件下培养7天以上即可；或将维持肺癌干细胞干性的物质加到上述培养基A中，得到培养基B,用培养基B把肺癌细胞制成单细胞悬液B，再将单细胞悬液B在3D细胞培养条件下培养7天以上即可。本发明制备方法简单，高效稳定，肺癌干细胞干性高。
一种肺癌干细胞制备方法应用

[发明专利]一种抗肿瘤药物快速药效测试试剂盒的制备方法及使用方法-CN201910540147.2有效
发明人：王国华;周佳敏;高纯一;张潇逸;吴昊;杨宇轩;王祎晨;徐丽华 -专利权人：南通大学
申请日： 2019-06-21 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗肿瘤药物快速药效测试试剂盒的制备方法及使用方法，收集临床肿瘤手术样本或PDX小鼠肿瘤样本，单细胞悬液制备，肿瘤干细胞和巨噬细胞提取，3D共培养装置的建立，LDH检测肿瘤干细胞活力，根据对照组肿瘤干细胞的活力值，计算出给药组肿瘤干细胞活力增殖百分比，进而评价相应药物的药效，由于肿瘤干细胞在体外不容易生长，此种方法先筛选出具有高度增殖能力的肿瘤干细胞，再借助其成瘤，两周即可做出药效结果。可以结合体内和体外实验技术进行快速抗肿瘤药物药效评价，可用于快速高效的检测抗肿瘤药物的药效。
一种肿瘤药物快速药效测试试剂盒制备方法使用方法

[发明专利]一种人骨膜单细胞悬液制备方法-CN202310844723.9在审
发明人：郑圣晗;李志芬;郑智鸿;李常胜;林建雄 -专利权人：杭州联川生物技术股份有限公司
申请日： 2023-07-11 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明公开了一种人骨膜单细胞悬液制备方法及应用，所述方法先将人骨膜组织分别利用第一解离液、第二解离液和第三解离液进行3次消化，然后进行红细胞裂解，制备得到人骨膜单细胞悬液，其中，第一解离液为链霉蛋白酶，弹性蛋白酶，透明质酸酶和胶原酶II型溶于细胞培养基中配制而成的混合酶解离液，第二解离液为0.5mg/mL胶原酶P溶液，第三解离液为0.25％的胰蛋白酶‑EDTA溶液。本发明的方法采用多步消化法，有很高的可重复性和成功率，能够稳定地得到高活率且杂质低的人骨膜单细胞悬液，能很好地应用于单细胞检测。
一种骨膜单细胞制备方法

[发明专利]一种通过氮气爆破分离单细胞中线粒体的方法-CN202310936164.4在审
发明人：孙爱军;葛均波;黄涯;董震;孙晓垒 -专利权人：复旦大学附属中山医院
申请日： 2023-07-27 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种通过氮气爆破分离单细胞中线粒体的方法，属于生物医药技术领域。包括：将盛放有单细胞/线粒体分离缓冲液的容器和保持低温的冰盒一起放置进氮气爆破箱中，通过氮气加压和减压的方式对单细胞进行爆破处理，得到单细胞破碎后的混悬液，离心去除细胞碎片，然后再次离心收集线粒体。本发明通过使用氮气爆破的方法，在低温下进行单细胞破碎，通过调节氮气加压的阈值和减压速度控制破碎阈值，使之适应不同的单细胞悬液、贴壁细胞或者全血等，这一方法不仅能更好地适应不同的细胞，还能提高线粒体的分离效率
一种通过氮气爆破分离单细胞线粒体方法

[发明专利]一种基于单分子DNA定量技术的临床前化疗药物筛选方法-CN201810138515.6在审
发明人：姜伟 -专利权人：四川省人民医院
申请日： 2018-02-10 - 公布日： 2018-08-10 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于单分子DNA定量技术的临床前化疗药物筛选方法，其特征在于：步骤如下：(1)取肿瘤组织，消化，收集单细胞悬液，培养；(2)在实验组中添加不同浓度的待筛选药物至培养体系中，对照组不添加药物，培养，检测肿瘤细胞和非肿瘤细胞的数量，确定药物的抗肿瘤活性和毒性；其中，检测肿瘤细胞的数量采用如下方法：a、取细胞，提取细胞DNA；b、采用ddPCR检测肿瘤靶基因和参考基因的拷贝数，得肿瘤靶基因拷贝数NTar以及参考基因拷贝数NRef；c、计算肿瘤细胞和非肿瘤细胞的绝对数量。本发明方法可以快速、有效检测药物的抗肿瘤作用和毒性，临床应用前景良好。
拷贝数化疗药物筛选检测肿瘤细胞非肿瘤细胞单分子DNA 参考基因定量技术靶基因肿瘤单细胞悬液抗肿瘤活性抗肿瘤作用临床应用培养体系筛选药物添加药物有效检测肿瘤细胞肿瘤组织细胞DNA 实验组细胞消化检测

[发明专利]一种人肝癌组织和肝脏组织活性单细胞悬液的制备方法-CN202010196718.8在审
发明人：王小辉;徐立;陈敏山;王骏成;施木德;张耀军;邹如海 -专利权人：中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所）
申请日： 2020-03-19 - 公布日： 2020-08-25 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明提供了一种人肝癌组织和肝脏组织活性单细胞悬液的制备方法，包括以下步骤：S1组织样品保存以及转运：S2组织漂洗及预消化；S3组织消化；S4终止消化及过滤除杂；S5裂解红细胞及第二次过滤；S6洗涤纯化细胞：清除坏死细胞；S7重悬获取细胞。由本发明肝脏组织活性单细胞悬液的制备方法获得单细胞，其细胞活性较好，细胞总体活性大于70％，且操作较为简单，稳定性好。
一种肝癌组织肝脏活性单细胞制备方法

[发明专利]一种适用于酶解小鼠脑组织的酶解液、细胞分离的方法及其应用-CN202111508226.9在审
发明人：范黎明;殷昊;朱燕敏;王佳琦;肖云平 -专利权人：上海欧易生物医学科技有限公司
申请日： 2021-12-10 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本发明公开了一种适用于任一时期小鼠脑组织细胞分离的酶解液，以及使单细胞悬液低损失的优化方法，本发明所述的方法得到单细胞悬液中活细胞占比优于现有技术方法。这些优点可以让本领域技术人员完成小鼠各个时期脑组织细胞的分离且取得高活率、高得率、低杂质占比的细胞悬液，或使分离得到的细胞能继续应用于后续单细胞测序实验中，拿到更加真实且有意义的结果，为进一步明晰疾病机理和疾病的治疗提供了更完备的保障
一种适用于小鼠组织酶解液细胞分离方法及其应用

[发明专利]一种获取单克隆细胞的方法-CN201510528956.3在审
发明人：赵国琦;詹康;林淼;贡笑笑;左晓昕 -专利权人：扬州大学
申请日： 2015-08-25 - 公布日： 2015-12-09 - 主分类号： C12N5/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种获取单克隆细胞的方法，其具体步骤如下：(1)胰酶分离消化细胞，用完全培养基终止消化，制成单细胞悬液；(2)吸取适量单细胞悬液至微孔板的一个孔中，放置在显微镜下数出该悬液中的细胞总数，并且通过增减细胞悬液体积，使得该孔内细胞总数达到所需克隆的数量；(3)吸取适量培养基悬浮该孔内的细胞，再将其转移至含有培养基的具有易于均匀分散单细胞的结构的储液槽内，该培养基的体积为步骤(4)中准备加入微孔板各孔内培养基体积的总和；(4)吸取适量细胞悬液至微孔板各孔中，进行培养；(5)培养一至两周。该方法操作方法简单，并能最大限度地获得较多孔的单克隆细胞，建立单克隆细胞系成功率较高。
一种获取单克隆细胞方法

[发明专利]一种在同一肝内胆管组织样本中同时进行外泌体、单细胞、单细胞核测序的方法-CN202211484254.6在审
发明人：佟思雨;殷昊;肖云平;范黎明;朱燕敏;王佳琦 -专利权人：上海欧易生物医学科技有限公司
申请日： 2022-11-24 - 公布日： 2023-04-21 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种从同一肝内胆管组织样本出发，基于同一组织样本同时进行外泌体、单细胞悬液和单细胞核悬液的制备方法。本发明创新改进地将外泌体制备、单细胞悬液制备和单细胞核悬液制备三种技术相结合，突破了现有的技术障碍，得到样本中更全面的细胞类型的同时，又真正解析了生命现象背后这种细胞互作的网络机制(既能了解单个细胞的功能，又能了解细胞之间是如何传递信号的以及特定的细胞对信号会有什么响应。)
一种同一胆管组织样本同时进行外泌体单细胞细胞核方法